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质谱法引入了用于细胞内蛋白质表征的新概念
细胞中的蛋白质具有很高的柔韧性，并且通常存在于多种构象中，每个构象都具有结合配体的独特能力。这些构构受生物体控制蛋白质功能的调节。当前，大多数关于蛋白质结构和活性的研究都是在体外使用纯化的蛋白质进行的，该研究无法完全复制细胞内环境的复杂性，并且可能受到纯化过程或缓冲条件的影响。
来源:英国物理学家网首页细胞中的蛋白质具有很高的柔韧性，并且通常存在于多种构象中，每个构象都具有结合配体的独特能力。这些构构受生物体控制蛋白质功能的调节。当前，大多数关于蛋白质结构和活性的研究都是在体外使用纯化的蛋白质进行的，该研究无法完全复制细胞内环境的复杂性，并且可能受到纯化过程或缓冲条件的影响。
在《美国化学学会杂志》上发表的一项研究中，由达利安大学化学学院（CAS）的Wang Fangjun教授领导，与CAS中国科学与技术大学的Huang Guanging教授合作，开发了一种使用蛋白质的新方法，用于使用Vacuum spectrory spectrory的新方法（UVPD-TDMS），提供了一种创新技术，用于分析MS原位细胞内蛋白质的异质性。
质谱研究人员将MS与193 nm UVPD结合在一起，直接分析细胞内的蛋白质结构。该方法采用了诱导的电喷雾电离，该电喷雾离子化以最小的结构扰动使细胞内蛋白质电离。
分析了细胞内蛋白的电荷状态分布以确定其构象合并。将UVPD应用于激发和解离蛋白质骨架，从而产生丰富的A-，B-，C-，X-，Y-和Z-Fragment离子，它们富含蛋白质结构和相互作用的特征。
蛋白质结构 2+他们还透露，在紧凑型构象中，前两个Ca2+离子优先结合了EF-2和EF-3，而扩展形式有利于在蛋白质的C-Lobe中与EF-3和EF-4结合。
更多信息： doi：10.1021/jacs.4c16376 期刊信息：