讲师名称Paweena sukhawathanakul办公室Cornett A260电子邮件paweenas@uvic.ca电话(250)721-7523上课时间周四上课时间:11:30上课时间:11:30 am - 12:50 pm星期一和周四星期一和周四,星期一和周四的周一和星期四的日期:1月6日至4月3日的时间:2025年4月3日的网站:Cleareirection:Clearue clesion cleihue clesistion a Cleasire cleihue clesion a usihue clesion a usihue clesisties a usihue cley a cleihue clesisties a usihue cley(Cleihue cle) 描述。本课程对婴儿和儿童发育中的开创性理论和研究进行了深入的研究。学生将采用一系列理论观点来理解儿童的社会和情感发展,并研究上下文如何在塑造个人能力中发挥作用。将重点放在我们如何将理论和研究应用于开发基于学校的预防计划和健康促进方法中。学习目标。学生将能够:
分子生物学分析相较于培养方法具有多种优势,包括能够识别更广泛的目标生物、提高灵敏度和特异性。细菌 DNA 分离是分子生物学分析中的一种简单解决方案。使用高温加热的煮沸技术会破坏细胞壁通透性。加热煮沸技术可以使用具有不同传热机制的水浴和加热块来实现。结果表明,使用加热块分离的样品的浓度值在 77,6 ng/µl – 200,45 ng/µl 范围内,而使用水浴分离的样品的浓度值在 145,575 ng/µl – 288,8 ng/µl 范围内。使用水浴可获得最高的 DNA 浓度。在波长 A260/A280 下测得的纯度值在纯度范围内没有差异。关键词:DNA 分离、煮沸、水浴、加热块
1,2 Pusat Pengeman pengujian obat dan Makanan鼻腔,Badan Pengawas obat obat Dan Makanan,印度尼西亚Jakarta Pusat *通讯作者:alfi.sophian@pom.go.go.id.iid摘要背景:与隔离的纯度参数分析的纯度参数:260/230的纯度参数是260/230,鸡块产品中的DNA。目的:这项研究的目的是提供有关孤立DNA纯度读数的分析值的信息,比为260/230。通过从这项研究的结果中获取信息,希望它可以为相关的类似研究提供好处。方法:本研究中使用的方法是使用自旋柱技术的DNA分离方法,然后使用纳米光度计以260/230的比例读取所获得的分离的DNA。结果:然后将测量结果计算为平均值和标准偏差。基于孤立的DNA测量结果,以A260/A230比率读取的纯度结果在1.98 - 2.10范围内,平均值为2.043。结论:根据这些结果,可以得出结论,获得的隔离DNA根据DNA的纯度值以260/230的比例(即2.0 - 2.2范围内)显示出良好的DNA质量。Keywords: analysis, DNA, purity, ratio, validation ABSTRAK Latar belakang: Parameter nilai kemurnian yang dianalisis dari panjang gelombang dengan rasio 260/230 merupakan parameter validasi sekunder yang digunakan untuk melakukan analisis mutu DNA hasil isolasi pada produk nugget ayam.kata kunci:Analisis,DNA,Kemurnian,Rasio,Pallasi目的:这项研究的目的是提供有关以260/230比率读取的DNA隔离纯度的值的信息。通过从这项研究结果中获得的信息有望受益相关的类似研究。方法:本研究中使用的方法是使用柱自旋技术的DNA隔离方法,然后使用260/230比例的光度计NANO读取所获得的绝缘结果。结果:然后计算得出的结果平均值和标准偏差。基于A260/A230比率读取的隔离DNA结果的测量结果,在1.98-2.10范围内,其平均值为2.043。结论:基于这些结果,可以得出结论,获得的绝缘结果的DNA根据DNA纯度值在260/230的比率下显示出良好的质量DNA,范围为2.0-2.2。
•使用1 O.D的惯例使用A260处的分光光度吸光度来确定DNA浓度。相当于50 µg/ml的双链DNA或量子dsDNA BR分析,这是一种基于染料的荧光方法,具体取决于存储库。有关特定信息,请参见#9。示例至少读取两次以验证阅读。仪器每季度进行测试,并根据需要进行校准。•为了评估DNA完整性,通过安装贴纸评估DNA。挂接软件确定DNA完整性数(DIN)作为GDNA完整性的度量。(注意:所有存储库都不执行。)•使用6个常染色体微卫星标记的多重PCR分析确认DNA样品身份。性别是在同一反应中使用额外的底漆对确定的,该对X和Y-染色体蛋白基因基因之间的等位基因差异区域。此测定的细节及其在质量控制过程中的重要性将在下面讨论。此测定法提供了几个质量控制参数,如下:
讲师助教姓名 Paweena Sukhawathanakul McKenna Knox 办公室 Cornett A260 - 电子邮件 paweenas@uvic.ca mckennaknox@uvic.ca 办公室电话 (250) 721-7523 - 办公时间 星期一 1:30-2:30pm 预约上课时间:星期一和星期四上午 10:00 – 晚上 11:20 日期范围:2024 年 1 月 6 日至 2025 年 4 月 3 日地点:MacLaurin 大楼 A144 室必修文本:Steinberg,Laurence (2023)。青春期(第 13 版)。麦格劳希尔教育:纽约。课程网站:可通过 UVic Brightspace 学习管理系统课程描述获取。青春期代表从童年到成年的过渡,其特点是显著的生物、认知和社会变化,但青春期的定义特征可能因社会而异。本课程概述了青春期的关键发展,包括神经和身体发育、社会关系和情绪过程的变化、精神病理学以及这些发展发生的文化背景。学习目标。学生将能够:
(12)(9)重复(10)和(11)的其余混合物。 (如果滤液是高粘性的,并且保留在色谱柱中,则建议在20,000 x g处离心。)(13)将Dneasy Mini Spin柱连接到新的2 mL收集管上,并添加500μL的缓冲液AW2。在室温下在6,000 x g处离心1分钟,然后丢弃滤液。 (14)将500μl的缓冲液AW2添加到Dneasy Mini自旋柱中,然后在室温下离心2分钟以干燥膜。 (15)将Dneasy Mini Spin柱转移到新的1.5 mL管,然后将50μl缓冲液AE直接转移到Dneasy膜上。在室温下(15-25°C)孵育5分钟后,在室温下在6,000 x g处离心1分钟,然后收集滤液。 (事先快速缓冲AE至65度增加了DNA的产量)3。确认DNA溶液的质量1)使用分光光度计在230 nm和260 nm处获得的样品DNA溶液的吸光度(A230,A260)测量。 <准备什么>
实验室质量培养物。minimus,A。fortilissima,P。uncinatum和S.细长。通过监测浊度,叶绿素浓度和蛋白质含量来评估这些培养物的生长。经过18天的接种期,观察到纯培养物的最大生长。使用离心浓缩的发育良好的培养物并随后冻干以将其保存为粉状形式。DNA提取在冻干的培养物上进行,从而在井下导致透明的DNA带。由A260/280比率确定的提取的DNA的质量范围为1.6至1.8。Mcyabde基因在铜绿节和O. Laetevirens var中成功扩增。minimus,而A. fortilissima和P. uncinatum分别显示了McYabd和McYabe基因的扩增。在弹性链球菌中未观察到放大。使用半定量ELISA技术,仅在微囊孢子虫中检测到显着浓度的微囊藻蛋白,水平为0.5 ppb,而其他培养物的痕量量低于0.5 ppb。
DNA提取自1869年弗里德里希·米舍(Friedrich Miescher)首次试图隔离它以来,它已经走了很长一段路,意外地发明了一种核酸隔离方法,后来其他人会完善。该过程涉及分解细胞膜和核信封以获得DNA,这对于PCR,DNA克隆,测序和电泳等各种分子生物学应用至关重要。取决于样本类型 - 需要植物,血液,细菌或其他 - 需要不同的提取方法,每种方法都有自己的手术,以确保DNA的所需纯度和数量。从苯酚 - 氯仿等醇到蛋白酶K,CTAB,自旋柱,磁珠等等,存在各种技术,每个技术都基于样品的特定要求选择。DNA提取的故事是连续的创新和精致之一,像Meselson和Stahl这样的先驱在1958年建立了全功能程序,而其他人则随着时间的推移贡献了他们的方法。从细胞中提取DNA的过程涉及三个主要步骤:细胞裂解,沉淀和溶解DNA。所使用的化学或组合的类型可能会根据目标和细胞类型而有所不同。对于柔软的细胞壁,如在结核分枝杆菌中发现的,用简单的裂解缓冲液加热是有效的。然而,较硬的细胞壁需要机械,化学和酶促方法来提取DNA。基于化学的DNA提取方法是基于溶液的,涉及各种有机和无机溶液。这些包括SDS,CTAB,苯酚,氯仿和硫氰酸鸟酯。所有程序的主要步骤是细胞裂解,降水和洗脱。基于溶液的(化学)DNA提取进一步分为基于有机溶剂的和基于无机溶剂的方法。有机溶剂(如苯酚和氯仿)以前已被使用,但由于危险而灰心。相反,采用了更安全的替代方案,例如Triton X100和EDTA。不同的化学物质有特定目的;蛋白酶K等酶分解蛋白质直接靶向氨基酸连接。DNA提取过程的有效性可能受细胞类型的影响以及某些化合物或化学物质组合的使用。在冷链中,尽管有一些缺点,但基于蛋白酶K的DNA分离方法还是有效的方法。此过程的一个问题是酶的稳定性降低,随着时间的流逝而降低。使用无机溶液(例如氯化钠和乙酸钾)与蛋白酶K结合使用的盐溶液。但是,提取的DNA的纯度可能是一个问题,因为尽管获得了足够的质量,但收益率可能不会令人满意。苯酚 - 氯仿 - 异氧化酒精法(PCI)是提取DNA的另一种流行技术。它使用液化缓冲液,苯酚和氯仿对蛋白质和破坏细胞,从而产生出色的产率和纯度。可以通过使用现成的DNA提取缓冲区来修改此方法,从而快速而简单。高质量的DNA产量和简单操作系统对于准确的DNA分析至关重要。相反,基于二氧化硅的DNA提取方法提供了一种独特的方法,依赖于二氧化硅和DNA相互作用的独特化学。带正电荷的二氧化硅颗粒在离心过程中与带负电荷的DNA结合,从而允许高质量的DNA产量和易于操作。由于其简单性和有效性,该市售技术已在诊断实验室中被广泛接受。为了验证提取的DNA,可以使用溴化乙锭或其他与DNA在UV光下反应的荧光染料在琼脂糖凝胶上电泳。通过计算260 nm和280 nm波长的吸光度来测量DNA的纯度。确定DNA纯度的最常见方法是A260/A280比率,对于优质DNA,应在1.7-2.0之间。较低的比率表明存在更多的污染物。荧光测量是确定DNA产量和浓度的另一种流行方法,它由于其广泛的可用性和比吸光度方法更高的灵敏度。也可以使用二苯胺(DPA)指示器确认DNA的存在,该指标涉及DNA化学水解。与分光光度计在600 nm处的吸光度强度也可以通过将DNA浓度与已知DNA浓度的标准曲线进行比较来确定DNA浓度。已开发和应用多种用于DNA提取的方法,包括用于传染病的护理核酸测试和人类DNA提取方法。方法的选择取决于DNA的特定应用和所需的质量。
