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病毒
摘要：腺相关病毒（AAV）在临床试验中被广泛用作体内基因治疗的递送向量，因为它们的独特特征。GöttingenMinipigs是多种疾病的良好动物模型，可用于基于AAV的基因疗法的功效和安全性测试。针对AAV的预先存在的抗体可能会影响测试结果，因此，应测试动物的抗体，以抗相关的AAV血清型。猪中AAV的检测对于异种移植的病毒安全性也可能很重要。在这项研究中，我们筛选了来自EllegaardGöttingenMinipigs A/S，Denmark和Marshall Bioresources的GöttingenMinipigs，用于针对AAV1，AAV1，AAV2，AAV6，AAV6，AAV9，AAV9 Serotypes的抗体。对所有测试的AAV没有中和抗体，没有一个针对AAV9的抗体，只有一种对AAV6具有抗体，针对AAV1和AAV2的抗体滴定剂量小于1：100，有两个除外。对于总结合IgG，越来越多的个体对所有测试的血清型都表现出阳性，但通常，水平较低或零。三只动物完全没有针对测试的AAV的抗体。因此，哥廷根小杂志可以被认为是用于基因治疗研究的有吸引力的动物模型。由于某些动物对所有测试的AAV均为阴性，因此可以选择并用作异种移植的供体动物。
双AAV介导的人耳面表达的恢复动力学
在Otoferlin（OTOF）中引起耳聋的缺陷已使用基于双重腺相关病毒（AAV）的方法来临床上解决。然而，以前尚未表征转导的时机，mRNA重组的时机和具有双重混合AAV方法的蛋白质表达。在这里，我们建立了一个离体测定，以确定小鼠尿素细胞中OTOF的双AAV介导的表达的动力学。我们利用了两个不同的重组矢量，其中包含db-oto，一个载体在毛细胞特异性肌细胞的控制下包含OTOF的5'部分，另一个包含OTOF的3'部分。我们探索了小鼠尿素毛细胞中MyO15启动子的特异性，在OTOF缺乏小鼠模型中确定了DB-OTO EXBO的剂量反应特征，并证明了AAV1在尿皮毛细胞中的耐受性。此外，我们确定了从5'至3'矢量的一对比率的偏差，对重组OTOF的影响很小。最后，我们以14至21天的体内结构了一个与体内模型相当的恢复时机的平稳量的重组OTOF mRNA和蛋白质表达。这些发现证明了离体模型系统用于探索表达动力学并在体内和离体恢复时机中建立双重AAV介导的OTOF表达的实用性。