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AXV-101，一种新的密码子优化的BBS1 AAV9向量，停止...
Bardet-Biedl综合征（BBS）是一种与原发性纤毛功能障碍相关的常染色体隐性疾病，表现出视网膜营养不良和进行性视觉丧失，以及其他临床特征。bbs1是在BBS中发现的最常见的突变基因，而错义BBS1 M390R突变是最常见的等位基因。我们先前已经证明，在调节的Remodopsin激酶（AAV8-RK-BBS1）和巨细胞病毒（AAV8-CMV-BBS1）下表达野生型BBS1 cDNA的不同AAV8载体是安全且能够停止BBS1 Missense Youse BBBS Mode bbs1鼠标BBS1 MISSONSE BBS1 MORTENS MISSENSE MOLTENS MISTENS MORTANE DENINALION的促进剂（AAV8-CMV-BBS1）的启动子（M390R）（Freitas等人）。我们还介绍了BBS1的密码子优化版本的开发如何增加蛋白BBS1表达（De Castro等人）。在这项研究中，我们通过AXV-101（在CAG启动子（AAV9-CAG-HCOBB1）调节下表达人类密码子优化的BBS1 cDNA序列（HCOBBS1）（AAV9-CAGBB1），我们提高了AXV-101的视网膜下递送的功效和安全概况。在这里，我们单方面用单一的泡沫给了新生儿P7-9 M390R和野生型（WT）动物的5种不同的队列（n = 5-12）；用AXV-101配方缓冲液和磷酸盐缓冲盐水（PBS）和3个队列的两个对照组，以及增加剂量的AXV-101（1x10 9，5x10 9和1x10 10 10总病毒基因组（VG））。对侧眼被用作内部对照。我们使用光学相干断层扫描（OCT）和用电子图（ERG）的功能救援测量了6个月内的安全性和功效。
标题：AAV-DJ优于靶向大脑和脊髓的AAV9，并进行靶向
未通过同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本的版权持有人（本版本发布于2024年5月7日。; https：//doi.org/10.1101/2024.05.05.06.592798 doi：biorxiv Preprint
铬摩托运动指纹启用单个疾病生物标志物分子的多素数字计数
（未通过同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版的版权持有人于2025年2月4日发布。 https://doi.org/10.1101/2025.02.04.636515 doi：Biorxiv Preprint
AAV9 在小鼠和非人类灵长类动物模型中表现出优于 AAVrh.10 和 AAVrh.74 的体内心肌细胞转基因表达，并且介导
图 3。AAV9 介导小鼠心肌细胞转基因表达。我们使用心肌细胞报告基因测量了小鼠心脏中这三种血清型的病毒 DNA、RNA 和蛋白质水平。根据病毒基因组 DNA 载量测量，这三种血清型均显示出相似的心脏转导，但是，AAV9 产生的心肌细胞特异性报告 RNA 转录本和蛋白质产物的表达水平高于在同一平台上并行制造的其他两种血清型。对条形码合并和单独给药进行了测试，并产生了相似的结果。在此图中，具有相对定量的 DNA 和 RNA 数据来自条形码合并研究，具有绝对定量的蛋白质数据来自单独给药研究。每项研究招募了五只动物，并在该图中以单独的点表示。
AAV9 介导的 SGPL1 基因转移在 S1P 裂解酶小鼠模型中的功效
简介鞘氨醇-1-磷酸裂解酶 1 ( SGPL1 ) 的双等位基因功能丧失突变导致鞘氨醇-1-磷酸裂解酶功能不全综合征 (SPLIS)，这是一种与非溶酶体鞘脂储存相关的罕见代谢紊乱 (1, 2)。该综合征于 2017 年首次被描述 (3, 4)。迄今为止已报告约 50 例 (5–10)。大多数患者表现出类固醇抵抗性肾病综合征 (SRNS)，并迅速发展为终末期肾病。肾病最常与局灶节段性肾小球硬化病理有关，包括侵袭性塌陷型。原发性肾上腺功能不全是第二大常见特征。中枢神经系统和周围神经系统缺陷可能包括发育迟缓或退化，伴有磁共振成像的特征性发现，约一半的病例与其他疾病特征同时发生或独立发生（1, 11）。T 细胞淋巴细胞减少症似乎是一种普遍特征，尽管某种程度的 T 细胞功能通常会持续存在。观察到的严重程度范围很广，一些受影响的个体在子宫内死亡，另一些在婴儿期死亡，而还有一些人在生命的头十年后期出现症状，并在支持性护理下活到成年。尚未建立治疗 SPLIS 的特定疗法。SGPL1 编码鞘氨醇磷酸裂解酶 (SPL)，该酶负责鞘脂代谢的最后一步（12）。SPL 催化磷酸化鞘氨醇碱基的不可逆降解，产生两种产物：长链醛和乙醇胺磷酸盐。生物活性鞘脂鞘氨醇-1-磷酸酯 (S1P) 是主要的 SPL 底物。S1P 是 G 蛋白偶联 S1P 受体 (S1PR) 的配体，参与控制肌动蛋白细胞骨架组织、细胞迁移和细胞存活 (13)。S1P 信号传导调节淋巴细胞运输、血管生成、炎症和其他生理过程 (14)。体内 SPL 失活会导致组织 S1P 水平显著升高，并导致上游鞘脂中间体积聚，例如
使用生物Zen ...
为确定注射体积对聚集体的检测以及聚集体和单体之间的分辨率，分析了从0.5 µL到2.0 µl的四个AAV血清型（AAV2、5、5、8和9）之间的体积（图1-4）。在所有注射量下，AAV2和AAV8的单体和聚集体之间的分辨率≥2.0（图1和3）。AAV5和AAV9（图2和4）显示所有注射体积的分辨率在1.5至2.0之间。有趣的是，随着注射体积从0.5 µL增加到2.0 µL，AAV9的分辨率从1.6提高到2.0。在所有血清型中，在注射体积中的总百分比保持一致，这表明与高度敏感的荧光检测器耦合生物Zen DSEC-7色谱柱的高效率，可在低至0.5 µL的注射下提供准确的检测和分离。
文库组织处理，病毒DNA提取和NGS样品制备
对于成年果mo虫，请确保没有可检测到的AAV9中和抗体。这可以由宾夕法尼亚大学的Penn Vector Core（https://gtp.med.upenn.edu/intranethome/core-facilities-internalle/immunology）
病毒
摘要：腺相关病毒（AAV）在临床试验中被广泛用作体内基因治疗的递送向量，因为它们的独特特征。GöttingenMinipigs是多种疾病的良好动物模型，可用于基于AAV的基因疗法的功效和安全性测试。针对AAV的预先存在的抗体可能会影响测试结果，因此，应测试动物的抗体，以抗相关的AAV血清型。猪中AAV的检测对于异种移植的病毒安全性也可能很重要。在这项研究中，我们筛选了来自EllegaardGöttingenMinipigs A/S，Denmark和Marshall Bioresources的GöttingenMinipigs，用于针对AAV1，AAV1，AAV2，AAV6，AAV6，AAV9，AAV9 Serotypes的抗体。对所有测试的AAV没有中和抗体，没有一个针对AAV9的抗体，只有一种对AAV6具有抗体，针对AAV1和AAV2的抗体滴定剂量小于1：100，有两个除外。对于总结合IgG，越来越多的个体对所有测试的血清型都表现出阳性，但通常，水平较低或零。三只动物完全没有针对测试的AAV的抗体。因此，哥廷根小杂志可以被认为是用于基因治疗研究的有吸引力的动物模型。由于某些动物对所有测试的AAV均为阴性，因此可以选择并用作异种移植的供体动物。
AAV-BR1不靶向Sprague Dawley大鼠中的内皮细胞，与小鼠不同
在我们目前的工作中，我们需要一个针对Sprague-Dawley大鼠血脑屏障（BBB）内皮细胞（EC）的RAAV，但没有其他脑细胞。在系统地给药时，AAV血清型AAV9和AAV2可以在小鼠中转导BBB细胞和脑实质细胞（Dayton等，2012; Fu等，2003）。capsid变体（例如AAV9衍生的变体AAV PHP.B和AAV2衍生的变体AAV-BR1）已通过氨基酸插入进行设计，以改善小鼠的BBB转导（Hordeaux等，2018;Körbelin等，2016，2016）。尤其是，AAV2上限变体BR1在高度的小鼠BBB中转导EC，只有很少的非血管转导，并且在许多研究中使用了各种小鼠模型（Liu等，2019; Nikolakopoulou，nikolakopoulou等，2021; 2021; 2021; Rasmussen et al。，20223; Chao tan;据我们所知，目前尚无出版物在大鼠模型中测试AAV-BR1变体。