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靶向受体的衣壳工程方法...
图6。工程的衣壳表现出增强的过表达人，猕猴或小鼠直系同源物的细胞的转导增强。细胞用过表达质粒编码受体1。转染的细胞用每种AAV转导，并在72小时后通过RT-QPCR评估转基因mRNA表达。*处理过程中丢失的样本。（a）CAPSIDS 1-3单独评估并与父母血清型AAV9进行比较。受体靶向的衣壳在过表达受体1的细胞中表现出明显的转基因mRNA表达，但在转染控制条件下却没有明显增强。此外，这种功能的增益在受体的人，猕猴和小鼠直系同源物中得到了保守。（b）相对于对照的转基因表达的倍数增加。一个非线性回归模型用于每个衣壳受体条件的相对转基因表达值。然后将这些值缩放到每个衣壳的转染控制值。（C）在过表达人，猕猴或小鼠受体1的细胞中，工程上的衣壳介导更高的转基因表达。
开发三体一步RT-DDPCR方法作为VMIX™平台的定量效力测定
参考：Becker La等。自然2017; 544：367–71。缩写：AAV9：腺相关病毒血清型9； ALS：肌萎缩性侧索硬化； atxn2：ataxin 2; AVB-205：AAV9-MIR-ATXN2; CB7：鸡β-肌动蛋白启动子；简历：变异系数； HKG：家政基因； HPRT1：低黄嘌呤 - 瓜氨酸磷酸贝糖基转移酶； ITR：反向终端重复； KD：敲除； mirna：microRNA； MOI：感染的多样性； mRNA：Messenger RNA； RNA：核糖核酸； RPP30：核糖核酸酶P蛋白亚基P30； RT-DDPCR：逆转录液滴数字聚合酶链反应； TDP-43：TAR DNA结合蛋白43; VG：病毒基因组。致谢和披露：这项研究由Aviadobio Ltd. RL，JK，LR，RJ，RJ，LL，IB，IB，JI，JI，AB，AM，AM，HC，HC，MM，PB是Aviadobio Ltd. RJ的雇员和/或股东，与VMIX™Platform and aviaDobio Ltd.RJ命名为AVIADOBIO LTD。根据国际医学杂志编辑委员会（ICMJE）的建议，作者符合作者身份标准。医学写作和社论支持由英国Costello Medical的Calum Suggett提供，并由Aviadobio Ltd.
促进基因疗法的表达：更多并不总是更好
脊柱肌肉萎缩（SMA）是由SMN1的功能丧失引起的自身隐性神经肌肉疾病。SMA的特征是脊髓中运动神经元的变性，导致肌肉无力和萎缩。当前可用的三种可用治疗方法之一是基于AAV9的基因替代疗法的Abeparvovec。尽管它在改善SMA患者的运动功能方面有效，但其长期安全性仍然不清楚，诸如肝脏毒性等不良事件很常见。这可能是由高矢量剂量或超级生理水平的SMN引起的，这是由于其强，无处不在的启动子驱动的。在本期EMBO分子医学问题中，Xie等人通过内生SMN1启动子代替基准病毒的启动子（等效于Ona-emnogene Abeparvovec）来解决这一问题。在常见的SMA小鼠模型中，使用该第二代载体的治疗恢复了跨组织的生理水平的SMN表达，从而提高了安全性和有效性。这种方法对SMA和其他疾病的更安全，更有效的AAV基因疗法有希望。
心脏的细胞RNA-seq揭示了细胞间交流...
抽象的心肌纤维化是糖尿病引起的心肌病的特征病理学。因此，对心脏异质性和细胞间相互作用的深入研究可以帮助阐明糖尿病心肌纤维化的发病机理，并确定治疗该疾病的治疗靶标。在这项研究中，我们研究了小型触发/链霉菌素诱导的单细胞分辨率的小鼠心脏心脏心脏心脏纤维化的细胞间通信驱动因素。间膜和蛋白质 - 蛋白质相互作用网络揭示了配体 - 受体相互作用的关键变化，例如PDGF（S）–pDGFRA和EFEMP1 – EGFR，在促进熟悉熟悉的启发型熟悉熟悉的过程中，促进了熟练的启发，以促进锻炼的发展。 PDGFRA轴的特定抑制作用可以显着改善糖尿病心肌纤维化。 我们还鉴定了与病理外基质基质重塑相关的表型不同的HRC HI和HI成纤维细胞亚群，其中发现HRC HI成纤维细胞在糖尿病条件下是最有成熟的。 最后，我们验证了ITGB1中心基因介导的HRC HI成纤维细胞中糖尿病性心肌纤维化的细胞间通信驱动因素，并通过AAV9介导的ITGB1敲低糖尿病小鼠心脏确认了结果。 总而言之，心脏细胞图提供了对糖尿病心肌纤维化过程中参与病理细胞外基质重塑的细胞间通信驱动因素的新见解。间膜和蛋白质 - 蛋白质相互作用网络揭示了配体 - 受体相互作用的关键变化，例如PDGF（S）–pDGFRA和EFEMP1 – EGFR，在促进熟悉熟悉的启发型熟悉熟悉的过程中，促进了熟练的启发，以促进锻炼的发展。 PDGFRA轴的特定抑制作用可以显着改善糖尿病心肌纤维化。我们还鉴定了与病理外基质基质重塑相关的表型不同的HRC HI和HI成纤维细胞亚群，其中发现HRC HI成纤维细胞在糖尿病条件下是最有成熟的。最后，我们验证了ITGB1中心基因介导的HRC HI成纤维细胞中糖尿病性心肌纤维化的细胞间通信驱动因素，并通过AAV9介导的ITGB1敲低糖尿病小鼠心脏确认了结果。总而言之，心脏细胞图提供了对糖尿病心肌纤维化过程中参与病理细胞外基质重塑的细胞间通信驱动因素的新见解。
基于低音模型的新能源行业中领先技术的扩散机制
在原始文章中，我们不准确地引用了Sun等人的报告。（2019）。作者没有显示出总应用程序蛋白的50％降低，如我们的评论所示。相反，他们表明编辑的应用程序将处理后的C末端片段（CTF）的水平降低了一半，而对总应用程序蛋白的影响没有或最小。对中枢神经系统疾病，阿尔茨海默氏病的基因组编辑进行了纠正，第1段。校正后的段落如下所示。阿尔茨海默氏病（AD）是痴呆症的主要原因，在全球范围内影响了数百万的人（Winblad等，2016； Dos Santos Picanco等，2018）。AD的标志之一是由于淀粉样β（aβ）在大脑中的积累而存在散射的细胞外年龄斑块。aβ是通过淀粉样蛋白前体蛋白（APP）通过β-分泌酶1（BACE1）加工产生的二级代谢产物。另外，可以通过涉及α-分泌酶的非淀粉样蛋白生成途径来处理APP，从而导致神经保护产物的产生（Richter等，2018）。在研究由APP的瑞典突变（APPSW）引起的家族形式的AD的治疗研究中，使用CRISPR介导的NHEJ灭活突变体App（György等，2018）。这可以通过设计靶向单核苷酸多态性（SNP）的SGRNA（基于不匹配的选择性）或PAM（基于PAM的选择性）中的单核苷酸多态性（SNP）。相比之下，Sun和同事使用了非等位基因CRISPR介导的NHEJ策略来将应用程序处理推向非淀粉样蛋白生成途径（Sun等，2019）。györgy及其同事在海马基于不匹配的选择性CRISPR/CAS9系统分为两个AAV9矢量后，在Appsw等位基因中发现了1.3％的Indels（由于AAV矢量的有限≈4.8kb）在TG2576小鼠中（Gyöörgy等）。基于证据表明，删除APP的C末端可以减轻β的产生（Koo and Squazzo，1994），并减少与BACE-1酶的APP相互作用（Das等，2016），作者使用CRISPR使用CRIS来实现C-终端触发应用程序，从而产生了Appsprocessing（Appecte and app）。在这项研究中，WT和杂合的APP-london人IPSC衍生的神经元中的APP截断增加了神经保护性SAPPα的产生，并减少了β40/42和SAPPβ片段的分泌。对于成年小鼠体内研究，CRISPR-APP系统被分为两个AAV9矢量，并传递到WT小鼠大脑的牙齿回旋中。CRISPR-APP的注入可将处理后的C末端片段（CTF）的水平降低一半，而对总应用程序蛋白没有或最小影响。未进行其他体内测试以评估AD背景下的治疗效率（György等，2018； Sun等，2019），但是这些针对APP的C末端部分的治疗策略是感兴趣的，因为其目的是使潜在的病理学特性（β产生）降低了β的生成β的
Zolgensma
糖皮质类固醇应在输注前后的所有患者中施用。 肝功能应在输注后至少3个月监测（1）。 建议的Zolgensma剂量为1.1 x 10 14体重（VG/kg）体重的载体基因组（1）。 在输注Zolgensma之前：应评估患者的肝功能；应测量血小板计数和肌钙蛋白-I；应进行抗AAV9抗体的基线测试； Zolgensma输注前一天，应以每公斤体重1毫克口服泼尼松酮等效的全身性皮质类固醇的给药，总共开始30天。 Zolgensma通过静脉导管作为单剂量静脉输注（1）。 不建议在达到足月胎龄之前对Zolgensma进行过早的新生儿，因为与皮质类固醇的同时治疗可能会对神经系统发育产生不利影响。 延迟Zolgensma输注，直到达到相应的完整胎龄（1）。 研究了Zolgensma的安全性，这些儿科患者在0.3至7.9个月的Zolgensma输注（体重范围为3.0 kg至8.4 kg）中。 在0.5至7.9个月的Zolgensma输注的儿科患者中研究了Zolgensma的功效（体重范围为3.6 kg至8.4 kg）（1）。 相关政策Evrysdi，Spinraza糖皮质类固醇应在输注前后的所有患者中施用。肝功能应在输注后至少3个月监测（1）。建议的Zolgensma剂量为1.1 x 10 14体重（VG/kg）体重的载体基因组（1）。在输注Zolgensma之前：应评估患者的肝功能；应测量血小板计数和肌钙蛋白-I；应进行抗AAV9抗体的基线测试； Zolgensma输注前一天，应以每公斤体重1毫克口服泼尼松酮等效的全身性皮质类固醇的给药，总共开始30天。 Zolgensma通过静脉导管作为单剂量静脉输注（1）。不建议在达到足月胎龄之前对Zolgensma进行过早的新生儿，因为与皮质类固醇的同时治疗可能会对神经系统发育产生不利影响。延迟Zolgensma输注，直到达到相应的完整胎龄（1）。研究了Zolgensma的安全性，这些儿科患者在0.3至7.9个月的Zolgensma输注（体重范围为3.0 kg至8.4 kg）中。在0.5至7.9个月的Zolgensma输注的儿科患者中研究了Zolgensma的功效（体重范围为3.6 kg至8.4 kg）（1）。相关政策Evrysdi，Spinraza
当前提高 CRISPR 敲入效率的策略
摘要：自 2012 年发现以来，成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 和 CRISPR 相关蛋白 9 (Cas9) 系统为开发新型、高精度的基于基因组编辑的基因治疗 (GT) 替代方案提供了广阔的前景，从而克服了与经典 GT 相关的挑战。经典 GT 旨在通过慢病毒 (LV) 或腺相关病毒 (AAV) 将转基因随机整合到基因组中或以游离形式持续进入细胞核，从而将转基因递送到细胞中。尽管使用 LV 或 AAV 可以实现高转基因表达效率，但它们的性质可能会对人类产生严重的副作用。例如，基于 LV（NCT03852498）和 AAV9（NCT05514249）的 GT 临床试验分别表明，用于治疗 X 连锁肾上腺脑白质营养不良症和杜氏肌营养不良症的 GT 出现了骨髓增生异常综合征和患者死亡。与经典 GT 相比，基于 CRISPR/Cas9 的基因组编辑需要细胞的同源直接修复 (HDR) 机制才能将转基因插入基因组的特定区域。这种复杂且受良好调控的过程在哺乳动物细胞的细胞周期中受到限制，而非同源末端连接 (NHEJ) 则占主导地位。因此，寻找提高 HDR 效率的方法，使其优于 NHEJ，至关重要。本文全面回顾了当前用于改进基于 CRISPR/Cas9 的 GT 的 HDR 的替代方案。
2024年11月13日，亲爱的右病人倡导领袖，...
•高剂量的TSHA-102通常耐受性良好。TSHA-102通常在前两个青少年/成年患者中，最多20周，在最高六个星期的第一批儿科患者中，在前两个青少年/成年患者中，没有严重的不良事件（SAE）或剂量限制性毒性（DLT）。对第三个高剂量的成人/青春期患者进行了给药，并招募了第二个高剂量儿科患者。•持续入学高剂量队列。独立数据监测委员会（IDMC）审查了来自两个高剂量的成人/青少年参与者的可用临床数据，以及第一个高剂量的儿科参与者，并批准了在高剂量水平的青少年/成人和儿科研究中招收的程序。•完成了阳性再生医学高级治疗（RMAT）B型会议。与食品药品监督管理局（FDA）一致，在该机构对可用数据的审查之后，关于TSHA-102的持续开发方法以及B部分试验设计，端点以及既定自然历史数据集的潜在使用。•提出的生物分布数据进一步支持鞘内递送的临床潜力。在2024年10月在欧洲欧洲基因和细胞疗法欧洲欧洲基因和细胞治疗学会的第31届年度大会上，介绍了评估AAV9基因治疗递送的五项非人类灵长类动物（NHP）研究的分析的数据。请在下面找到一些常见问题的答案列表。揭示青少年和成人（12岁以上）的目标是什么？
2023; 19(1): 137-155。doi: 10.7150/ijbs.77469 研究论文 N-糖基化介导的 CD147 积累诱导糖尿病心脏纤维化
越来越多的证据表明纤维化在糖尿病性心肌病 (DCM) 中起着重要作用，但其潜在机制仍不清楚。考虑到分化簇 147 (CD147) 在纤维化疾病发病机制中的作用不同且重叠，我们旨在研究 CD147 在 DCM 纤维化中的作用并探索其潜在机制。AAV9 介导的心脏特异性 CD147 沉默减轻了糖尿病小鼠的心脏纤维化和心脏功能。CD147 敲低显著抑制了高糖 (HG) 诱导的 CFs 活化。从机制上讲，CD147 直接与 I 型转录生长因子 β (TGF- β ) 受体 I (ALK5) 结合，促进 ALK5 活化和内吞作用从而诱导 SMAD2/3 磷酸化和核易位。此外，HG 通过促进 GNT-V 介导的 N-糖基化阻止了 CD147 的泛素蛋白酶体依赖性降解。因此，对照小鼠中心脏特异性 CD147 过表达模仿了糖尿病引起的心脏纤维化，加重了心脏功能。重要的是，与非糖尿病患者相比，糖尿病患者的血清和心肌标本中的 CD147 也上调，并伴有心脏功能障碍和胶原沉积过多的超声心动图指标。我们的研究首次证明 CD147 是促进糖尿病心脏纤维化的关键因素，并可能有助于未来基于 CD147 的 DCM 治疗策略的发展。
去泛素酶mysm1驱动心肌缺血/ ... div>
理由：心肌缺血/再灌注（I/R）损伤导致不可逆的心肌细胞死亡并加剧心肌梗塞。去泛素化酶（DUB）对于维持底物蛋白质稳定性和功能性，在心脏病理生理学中起着重要作用。在这项研究中，我们旨在阐明在心肌I/R损伤中，类似DUB，类Myb样，SWIRM和MPN结构域1蛋白（MYSM1）的调节作用，并探索背后的分子机制。方法和结果：首先，发现MySM1的表达与心肌I/R损伤呈正相关。MySM1的遗传敲低可显着赋予心脏中I/R伤害的保护。相应地，AAV9介导的MySM1的心肌细胞特异性敲低对心肌I/R损伤具有治疗作用。通过全面的蛋白质组定量分析，我们将转录1（STAT1）的信号传感器和激活因子确定为MySM1的直接底物。从机械上讲，MySM1通过其MPN金属蛋白酶结构域介导了K63连接的STAT1的K63连接去泛素化和稳定。此外，MySM1通过促进STAT1的转录因子函数来启动与坏死相关的基因的表达。结论：这项研究说明了调节心肌I/R损伤的MySM1-Stat1轴，并将MySM1确定为心肌I/R损伤的药理靶标。