这项研究的目的是开发纯化样品中AAV病毒基因组的DDPCR方案。未包装的污染物DNA,以及其他来自生产质粒和/或细胞系中的DNA,需要在准确量化病毒基因组之前被消除。我们测试了几个方案,以便它们去除未包装的DNA的能力,同时保持准确的包装病毒基因组滴度。为此,我们将质粒DNA刺激到纯化的AAV2载体中,并评估了以下样品处理条件:(a)仅与DNasei孵育; (b)DNAsei孵育,然后再灭活,72°C热灭活,蛋白酶K处理,最后95°C热灭活; (c)与条件B相同,但在72°C而不是95°C(d)无样品预处理时进行最终热灭活。质粒和AAV基因组拷贝通过双链DDPCR(QX200液滴数字PCR系统,Bio-Rad)量化。与条件D相反,在未进行样品处理的情况下,与条件A和C条件A和C相比,在条件B和条件B中观察到较低的AAV2 VG滴度的趋势在条件A,B和C中未检测到质粒DNA(图1)。有趣的是,在条件A和C中都会发现可比较的VG滴度。在重复使用纯化的AAV9实验时,进行了类似的观察结果。
布鲁格达综合征 (BrS) 是一种致命的心律失常,在高发地区约占所有猝死的 4%。SCN5A 编码心脏钠通道 Na V 1.5,并导致 25% 至 30% 的 BrS 病例。本文,我们报告了一种 BrS 敲入 (KI) 小鼠模型 (Scn5a G1746R/+)。杂合 KI 小鼠重现了 BrS 的一些临床特征,包括心电图上的 ST 段异常(明显的 J 波)和自发性室性心动过速 (VT)、癫痫发作和猝死。VT 是由心脏动作电位时限缩短和 3 期晚期早期后去极化引起的,同时伴有钠电流密度 (I Na) 降低以及 Kcnd3 和 Cacna1c 表达增加。我们开发了一种基因疗法,使用腺相关病毒血清型 9 (AAV9) 载体介导的 MOG1 递送来上调 MOG1,MOG1 是一种与 NaV 1.5 结合并将其运送到细胞表面的伴侣分子。之所以选择 MOG1 进行基因治疗,是因为 SCN5A 编码序列 (6048 个碱基对) 很大,超过了 AAV 载体的包装能力。AAV9-MOG1 基因疗法增加了 NaV 1.5 和心室 I Na 的细胞表面表达,逆转了 Kcnd3 和 Cacna1c 表达的上调,使心脏动作电位异常正常化,消除了 J 波,并阻断了 Scn5a G1746R/+ 小鼠的 VT。基因疗法还挽救了具有 SCN5A 突变 p.D1275N 的杂合人源化 KI 小鼠的心律失常和收缩功能障碍的表型。使用小型伴侣蛋白可能对于靶向超出 AAV 载体大小容量的致病基因具有广泛的意义。
作者贡献 CK、EW 和 WW 设计了猪研究。MK、VZ、NK、BK 和 EW 生成了 DMD 猪并饲养了该群体。LF、AB、KK、RH 和 CK 进行了猪的转导、结构和功能分析。PH、CJ 和 EM 进行了高分辨率电生理映射并分析了数据。TB、KK、RH、IJ、KV、VJ、FAR、SR 和 SK 进行了猪组织的表达测定和组织学分析。,. FG、WW 生成了 intein-split Cas9 和 gRNA,HB、AG、SK、GS 和 FG 对 DNA 样本进行了测序和分析以进行基因组编辑和脱靶研究。TB、TZ 和 AW 生成并饲养了 AAV9 载体。SL、TZ 和 MO 在体外和体内引入了 G2 优化。AS 生成并分析了 dTomato 猪以进行 AAV-Cre 转导。 AM 和 K.-LL 构思并监督了 iPSC 研究,并提供了资金支持。ABM、DS、TH 和 SS 使用 iPSC 及其肌肉衍生物进行了所有实验。BC 生成、表征和分化了 iPSC 系。ABM 生成同源 hDMDΔ51-52 hiPSC。DS、RD 和 TD 分析了数据。TF 和 FF 进行了质谱分析。CMS、AD 和 DS 在心脏切片上进行了体外实验并分析了数据。SK 和 MW 提供了人类患者血液用于重新编程和概念建议。CK 和 AM 撰写了论文。所有作者都对稿件进行了评论和编辑。
通过肌肉嗜性 AAV 衣壳和肌肉特异性启动子的双策略方法改进向骨骼肌的基因传递。作者:Annalucia Darbey 1、Wenanlan Jin 1、Linda Greensmith 1 James N. Sleigh 1,2*、John Counsell 3*、Pietro Fratta 1,4* 隶属关系:1 英国伦敦大学学院皇后广场神经肌肉疾病系和伦敦大学学院皇后广场运动神经元疾病中心,伦敦大学学院皇后广场神经病学研究所,伦敦 WC1N 3BG。2 英国伦敦大学学院英国痴呆症研究所,伦敦 WC1E 6BT。3 英国伦敦大学学院外科和介入科学部靶向干预研究系,查尔斯贝尔楼,伦敦,英国 4 弗朗西斯克里克研究所;伦敦,NW1 1AT,英国 * 通讯作者:Pietro Fratta ( p.fratta@ucl.ac.uk),John Counsell ( j.counsell@ucl.ac.uk) 和 James N. Sleigh ( j.sleigh@ucl.ac.uk)。摘要基于腺相关病毒 (AAV) 的病毒载体技术已展示出将基因货物运送到体内各种器官的良好能力,过去十年中,几种新型候选病毒在人体试验中显示出临床效果。然而,天然存在的 AAV 血清型在靶向骨骼肌方面的能力有限,而骨骼肌是许多神经肌肉疾病的重要基因治疗靶点。这意味着通常需要高剂量的 AAV 才能在肌肉中达到治疗有效剂量。为了克服这个问题,新型 AAV 载体衣壳已被设计成通过将靶向肽插入 AAV9 衣壳可变区 VIII (VRIII) 来实现更高的肌肉转导效率。我们在此描述了一种新报道的衣壳,称为 MyoAAV1A,与临床验证的肌肉特异性启动子相结合。我们分析了体内递送至小鼠骨骼肌的效率,发现 MyoAAV1A 衣壳与 MHCK7 启动子的最佳组合可维持骨骼肌中的转基因表达,并减少脱靶组织(尤其是肝脏)中的表达。这突出了一种有前途的衣壳-启动子组合,可在骨骼肌基因治疗的进一步临床前研究中取得进展。图形摘要
可以再现复杂组织结构的器官正在彻底改变基础研究和再生医学。人体器官是一种从患者干细胞生长的微型器官模型。类器官通常称为“迷你孔”,因为它们的外观和作用类似于实际器官中的组织。类器官保留其原产组织的重要特征和功能,可用于研究疾病的进展和对治疗的反应,例如核黄素和基因治疗。全世界的科学家一直在为各种组织种植三维器官,因为这些类器可以模仿菜肴中的人类发育和疾病。感谢CURE RTD资金,Anai Gonzalez-Cordero博士和Cecilia MEI正在使用悉尼大学的最先进的组织工程平台来开发和研究源自RTD患者细胞的活细胞(也称为诱导的多能干细胞或IPSC)。RTD 2类最常见的两个症状是肌肉无力和视力丧失。与RTD相关的肌肉无力主要是由脊髓和大脑中运动神经元损害引起的,而视力丧失主要是由视神经损害引起的。作为本研究的一部分,正在从RTD患者干细胞中生长活眼(视网膜)和脊柱类器官模型,以研究导致RTD损伤的各种因素和机制,以及它们对基因治疗治疗的反应。基因疗法近年来,科学家已经做出了重要的发现,以解锁基因治疗在治疗疾病方面的巨大潜力。基因疗法取代了引起RTD的突变基因(SLC52A2基因),是阻止RTD疾病进展的潜在治疗选择,并希望扭转已经发生的一些症状和损害。CURE RTD正在为RTD小鼠和IPSC衍生的人类运动神经元的基因治疗提供资金。在这个项目中,病毒载体(AAV9)将slc52a2基因的健康副本带到眼睛,并衍生自RTD患者干细胞的脊髓类器官,以显示治疗的安全性和有效性。所有这些基因疗法项目的总和都是为了证明基因治疗是RTD的有效治疗方法,从而提供了对RTD患者进行人类临床试验的理由。
经常询问的问题问:什么是基因治疗?A:基因治疗涉及将基因健康副本递送到体内,目的是恢复靶细胞的功能。jaguar的基因治疗计划使用基于腺相关的病毒(AAV)载体的传递,这意味着AAV充当了一种类型的车辆(或载体),以将功能基因传递到靶细胞中。aaV已被证明是有效的载体,因为它是非病毒的(这意味着它不能引起疾病),但在获得目标细胞方面非常有效。要用作基因递送的载体,AAV的病毒DNA被去除并用旨在为患有遗传疾病的患者具有治疗益处的基因代替。在AAV载体将其基因有效载荷传递给细胞核后,然后将基因转录并翻译成产生功能性蛋白质。该基因将与染色体分开地在核中持续存在。然后,患者的身体分解并处理AAV矢量。您可以查看Jaguar为年轻观众创建的简短动画视频,并在此处解释基因疗法。问:基因疗法会改变一个人的DNA吗?a:这取决于所使用的基因治疗的类型。我们特别选择了AAV作为载体,部分原因是它改变了患者的DNA的可能性很小。虽然AAV载体主要将基因传递给核与患者DNA分开存在的基因,但在某些情况下,基因将基因插入(与)患者DNA中的患者DNA在人类临床试验中。问:JAG201如何工作?问:JAG201如何工作?迄今为止,没有证据表明这导致了包括癌症在内的任何疾病的发展。问:AAV向量是否存在潜在的风险? a:在研究AAV基因疗法的动物和人类临床研究中,已经报道了与矢量相关的安全风险,以及批准的基因疗法的销售后经验。 有时,免疫系统对矢量过度反应会导致影响肝脏,大脑或身体形成凝块的能力的并发症。 为了降低免疫系统连接风险的可能性,临床试验可能会预先对AAV载体的抗体进行预筛选,并要求药物减少患者的免疫反应。 a:shank3单倍度不足会导致突触处的功能障碍,或神经元之间的相互作用点,破坏了神经细胞之间的通信。 它导致几种关键神经元受体和信号蛋白的降低,从而导致神经元之间的突触形成受损。 适当的突触功能对于神经元到神经元的通信至关重要,这是学习和认知功能的基础。 JAG201通过腺相关病毒血清型9(AAV9)向量提供功能性shank3 Minigene*,以靶向中枢神经系统中的神经元。 该疗法旨在提供适当的shank3水平,并持久恢复学习和记忆所需的突触功能,这是对认知,沟通,社交和运动技能的适当神经发育和维护的基础。 *小型基因是缩短基因的形式,它保留了遗传序列的关键功能成分。 问:JAG201如何管理?问:AAV向量是否存在潜在的风险?a:在研究AAV基因疗法的动物和人类临床研究中,已经报道了与矢量相关的安全风险,以及批准的基因疗法的销售后经验。有时,免疫系统对矢量过度反应会导致影响肝脏,大脑或身体形成凝块的能力的并发症。为了降低免疫系统连接风险的可能性,临床试验可能会预先对AAV载体的抗体进行预筛选,并要求药物减少患者的免疫反应。a:shank3单倍度不足会导致突触处的功能障碍,或神经元之间的相互作用点,破坏了神经细胞之间的通信。它导致几种关键神经元受体和信号蛋白的降低,从而导致神经元之间的突触形成受损。适当的突触功能对于神经元到神经元的通信至关重要,这是学习和认知功能的基础。JAG201通过腺相关病毒血清型9(AAV9)向量提供功能性shank3 Minigene*,以靶向中枢神经系统中的神经元。该疗法旨在提供适当的shank3水平,并持久恢复学习和记忆所需的突触功能,这是对认知,沟通,社交和运动技能的适当神经发育和维护的基础。*小型基因是缩短基因的形式,它保留了遗传序列的关键功能成分。问:JAG201如何管理?问:JAG201如何管理?shank3 Minigene是通过去除Shank3基因的不必要部分而创建的,以使DNA适合AAV载体。A:JAG201将通过脑室室(ICV)注射来给药。ICV给药是使用导管或管道直接注射到大脑中的,将其置于含有脑脊液(CSF)的侧心室的空间。
关键词:轨道式振荡生物反应器 (OSB)、禽类 AGE1.CR.pIX 悬浮细胞、流感病毒、动物疱疹病毒、腺相关病毒 (AAV)、人胚胎肾 (HEK) 293 细胞、一次性灌注至高细胞密度、制造。悬浮细胞的预培养在摇瓶中成功完成。特别是新开发的设计细胞在高摇动频率下在摇瓶中传代多达 100 次,然后完美适应在具有 pH 控制和最大氧气供应(通常高于 80% pO 2 )的 CO 2 培养箱中生长。当它们随后被转移到搅拌槽生物反应器进行扩大时,特定细胞生长率通常较低,并且细胞对通过酸/碱添加和由于潜水器放气(气泡)而产生的剪切应力的 pH 控制变得敏感。禽类 AGE1.CR.pIX 和人类 HEK 293 细胞也出现了这种情况。为了避免这些问题,评估了在振荡模式下的扩大规模。这里我们介绍了 SB10-X OSB 生物反应器在袋子设计和控制单元改进方面的最新进展。引入了一种新的控制策略,从而可以更快、更精确地控制 pH 和 DO。此外,还优化了灌注袋,以便可以轻松连接一个或两个 TFF ATF 系统。这两项发展都带来了更强大的 SB10-X 系统,可以轻松执行批量、补料分批或灌注运行。在 10 L 一次性标准袋中,在化学定义的培养基 CD-U3(Biochrom-Merck,德国)中以 70 rpm 的摇动频率培养 Avian AGE1.CR.pIX 细胞(ProBioGen AG,德国)。对于灌注,使用了交替切向流系统(ATF2,Repligen,500 kDa 截止值)。感染流感病毒 A/PR/8/34 (H1N1) 后,MOI 为 0.001,工作体积从 5 升增加到 9 升,同时保持灌注。使用不同的填充体积评估 25 和 50 x 10 6 细胞/毫升的细胞浓度,以了解顶部空间通气的影响。总体而言,可以获得 3500 个病毒体/细胞的非常高的细胞特异性病毒产量,导致 HA 滴度高达 3.7 log 10(HA 单位/100 µL),感染滴度高达 8.8 x 10 9 TCID 50 /毫升。基于重组 AAV 的载体不仅是基因治疗目的的合适载体,而且还能够诱导针对各种抗原的强烈、主要是细胞的免疫反应。到目前为止,AAV 生产主要使用瞬时转染的贴壁人类 HEK 293 细胞(例如在细胞堆栈中),这对大规模 AAV 生产来说是一个重大挑战。在这里,我们测试了内部适应悬浮生长的 HEK 293 细胞,以通过一种允许简单扩大规模的过程生产 AAV9 的能力。因此,HEK 293 悬浮细胞在 5 L 化学定义的无血清培养基中培养,细胞密度为 1 x 10 6 个细胞/毫升,使用 SB10-X OSB 生物反应器,摇动频率为 65 rpm。24 小时后以 70 rpm 的振荡频率进行聚乙烯亚胺 (PEI) 介导的三重转染(包括 GFP 报告基因)。最后,转染后 48 小时,收获细胞和上清液进行 AAV 分离,并测定裂解物中 DNase I 抗性载体颗粒 (DRP) 的数量。由于转染效率高(基于 GFP 报告基因的转染率 >90%)且 SB10-X 系统中整个批处理过程性能良好,因此达到了 1.4 x 10 12 DRP/ml 或 7 x 10 15 DRP/批(5 L)范围内的制造相关 AAV 滴度。总之,在轨道上生产病毒可能是创新疫苗制造的一种有吸引力的替代方案。
会议任务标题 主要作者名字 主要作者姓氏 城市 州/国家 PL1-1 STK-001(一种反义寡核苷酸 (ASO))对患有 Dravet 综合征的儿童和青少年的安全性和临床效果:第 1/2a 期研究结束和开放标签扩展 (OLE) 数据 Joseph Sullivan 旧金山 CA Pl1-2 描述癫痫 - 运动障碍综合征的分子和临床谱(癫痫 - 运动障碍谱研究) Vicente Quiroz 波士顿 MA PL1-3 定义儿童期遗传性痉挛性截瘫的锥体外系运动障碍谱:超过 500 例病例的横断面分析 Kathryn Yang 波士顿 MA PL1-4 围产期中风后耐药性癫痫的预测因素 Miles Fisher 纳什维尔 TN PL1-5确定对抽搐综合行为干预的反应预测因子和机制:TReC 研究方法 Sonya Wang 明尼阿波利斯 MN PL1-6 心肺旁路心脏手术后新生儿癫痫发作发生率低 Eleonore Valencia 波士顿 MA PL1-7 青少年和年轻人睡眠期间的 Delta 功率与 MRI 可见的血管周围容积有关 Seva Khambadkone 波特兰 OR PL2-1 极早产儿早期与足月等效 MRI:哪种方法更能预测 36 个月时的神经发育结果? Thiviya Selvanathan 加拿大不列颠哥伦比亚省温哥华 PL2-2 硫酸角质素:人类胎儿前脑神经母细胞迁移途径和轴突束的化学模板 Harvey Sarnat 加拿大阿尔伯塔省卡尔加里 PL2-3 新生儿 HIE 发育结果与种族、民族和社会经济关系:一项为期 10 年的回顾性队列研究。 Whitney Fitts 费城 PA PL2-4 唐氏综合症退化症中的免疫调节基因新生变异 Saba Jafarpour 洛杉矶 CA PL2-5 深入了解 MECP2 重复综合症:使用多组学和深度表型分析揭示疾病严重程度和表达变异性 Davut Pehlivan 休斯顿 TX PL2-6 SYNGAP1 脑病患者体外细胞模型的意外和新型线粒体表型 Melissa Greco 罗阿诺克 VA PL2-7 脑脊液限制性寡克隆带与儿童髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体病复发性疾病的关联 Ashley Bach 费城 PA PL3-1 GTX-102(一种用于治疗的在研反义寡核苷酸)的 1/2 期开放性试验的最新临床活性和安全性患有 Angelman 综合征的患者 Kimberly Goodspeed Novato CA PL3-2 儿童神经病学 ABC:通过基于文章的课程创造终身学习 Elizabeth Troy Aurora CO PL3-3 偏瘫性脑瘫 MRI 损伤模式和按出生胎龄划分的症状 Johanie Victoria Piché Montreal QC,加拿大 PL3-4 儿童多发性硬化症的全球流行病学:数据来自多发性硬化症国际联盟 MS 图集,第三版 Grace Gombolay 亚特兰大 GA PL3-5 CANaspire 全身 AAV9 介导的 Canavan 病基因治疗试验:低剂量组的生物标志物、影像学和临床发现 Genevieve Laforet 博尔顿 MA PL3-6 Eladocagene exuparvovec 基因疗法改善芳香族 L-氨基酸脱羧酶缺乏症患者的运动发育 Lauren Warn 南普莱恩菲尔德 NJ PL3-7 单干血斑测试的两步新生儿筛查算法识别出不成比例的女性杜氏肌营养不良症携带者 Stephen Chrzanowski 波士顿 MA
血浆病毒血症。CRISPR 和 LASER ART 协同作用将有效靶向储存位点并完全切断宿主的 HIV-1 前病毒 DNA。此外,CRISPR-Cas9 将用于从宿主基因组中切除 HIV-1 前病毒 DNA,使用 AAV9 进行递送并消除潜伏的 HIV-1 前病毒。小鼠将通过移植人类 CD34+ HSC 进行人源化并通过流式细胞术确认。研究中将使用四组 HIV 感染大鼠:CRISPR-Cas9 治疗组、LASER ART 治疗组、联合治疗组和对照组。联合疗法在啮齿动物试验中已证明在去除潜伏感染性储存器方面取得了一定程度的成功。通过体内切除 HIV-1 亚基因组 DNA 片段来去除整合的前病毒 DNA;接受联合疗法治疗的大鼠没有潜伏的 HIV-1 储存器。相反,仅用 LASER ART 或 CRISPR-Cas9 治疗的啮齿动物组没有消除 HIV-1 的证据。这一证据为进一步研究和进行非人类灵长类动物试验以开发治疗方法的可能性奠定了基础。使用 BLAST 通过宏基因组分析研究海星消耗病的病因 Samantha McGuinness,BSc NEUR [1],Kathryn Austin,BSc MFB [2],Emily Gibbons,BSc MBG [3] [1] 圭尔夫大学心理学系,加拿大安大略省圭尔夫 N1G 2W1 [2] 圭尔夫大学综合生物学系,加拿大安大略省圭尔夫 N1G 2W1 [3] 圭尔夫大学分子和细胞生物学系,加拿大安大略省圭尔夫 N1G 2W1 海星消耗病 (SSW) 是一种影响全球小行星的疾病。最严重的是,2013 年,东北太平洋超过 20 种物种大规模死亡。 SSW 的病因不明,但有 3 种理论:病毒感染、微生物作用于有机物 (OM) 导致动物与水界面的 O 2 耗尽,或两者结合形成一种综合症。本研究将通过确定来自含有 OM 诱发的萎缩性 Pisaster ochraceus 的水箱的水是否会在采用不同 OM 处理的水箱中诱发 P. ochraceus 的 SSW,来调查 SSW 是否是一种综合症。受影响水箱的水将通过管道输送到另外两个水箱中,这两个水箱中都有未感染的 P. ochraceus。这三个水箱被分为一个水箱中有受 OM 诱发的受影响 P. ochraceus,一个水箱中有灭菌 OM,一个水箱中没有 OM。将测量 SSW 的发病情况,并使用生物信息学技术 BLAST 在组织和水柱中检测先前确定的微生物的存在和组成。预计没有 OM 的水箱中 SSW 的发生率会较低,因为这种条件下病毒可以存活,而微生物则无法存活。该研究可以评估 SSW 是否是病毒病原体和微生物作用相互作用的结果。在评估每个水箱的致病性和微生物生长水平后,在未来研究中,可以进一步分析显示可见星病数量最多的水箱。由于 SSW 的病因仍然未知,评估病毒和微生物的关系和重要性对于找到可能的解决方案至关重要。尽管证据支持许多潜在的致病因素,但很少有研究研究 SSW 中病毒和微生物之间可能存在的相互作用。利用 CRISPR-Cas9 系统和农杆菌进行外壳蛋白研究,帮助作物产生双生病毒抗性 Kajisha Vijayakumar,食品学学士 [1],Iman Andrea Niyokindi shima,公共卫生学学士 [2] [1] 圭尔夫大学食品科学系,加拿大安大略省圭尔夫 N1G 2W1 [2] 圭尔夫大学物理系,加拿大安大略省圭尔夫 N1G 2W1 双生病毒已经给印度豆类和非洲木薯产业造成了数百万美元的损失,并引发全球粮食短缺。双生病毒是具有小基因组和少量编码蛋白质的 DNA 病毒。近年来,人们研究了成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR),试图开发出作物对这些病毒的抗性。Cas9(一种位点特异性 DNA 内切酶)和合成的单向导 RNA (sgRNA) 构成了 CRISPR-Cas9 机制。Cas9 通过 sgRNA 定向到其基因组靶区域,并通过两个核酸酶域切割噬菌体。Cas9-切口酶提高了切割准确性并允许更大的缺失。根据文献,CRISPR 可用于删除植物易感性 (S) 基因,以产生作物的抗病性。然而,尚未发现双生病毒的特定 S 基因。一个建议的解决方案是针对外壳蛋白 AV1/V1,这是双生病毒的唯一结构蛋白。这些蛋白质对其功能至关重要,因为它们负责病毒 DNA 往返于细胞核,并与 ssDNA 结合以实现有效复制。我们假设 CRISPR-Cas9 可以与 Cas9-nickases(以提高功效)和农杆菌一起递送到受影响的作物中。农杆菌是一种在植物细胞中产生肿瘤的病原体,但由于其具有转移 DNA 的能力,也用于转基因。农杆菌插入 T-DNA 的预期效果是外壳蛋白发生突变,这将损害外壳蛋白并使其失活。如果没有这种结构蛋白,病毒感染就不会有效,使双生病毒变得毫无用处。这将使农业受益,防止数十亿作物受到感染,从而提高生产力并减少全球粮食危机。很少有研究分析过 SSW 中病毒和微生物之间可能存在的相互作用。利用 CRISPR-Cas9 系统和农杆菌改造外壳蛋白,帮助作物产生双生病毒抗性 Kajisha Vijayakumar,食品学学士 [1],Iman Andrea Niyokindi shima,公共卫生学学士 [2] [1] 圭尔夫大学食品科学系,加拿大安大略省圭尔夫 N1G 2W1 [2] 圭尔夫大学物理系,加拿大安大略省圭尔夫 N1G 2W1 双生病毒给印度豆类和非洲木薯产业造成了数百万美元的损失,并引发全球粮食短缺。双生病毒是一种基因组较小、编码蛋白质较少的 DNA 病毒。近年来,人们研究了成簇的规律间隔的短回文重复序列 (CRISPR),试图让作物产生对这些病毒的抗性。 Cas9(位点特异性 DNA 内切酶)和合成的单向导 RNA(sgRNA)构成 CRISPR-Cas9 机制。Cas9 通过 sgRNA 定向到其基因组靶区域,并通过两个核酸酶域切割噬菌体。Cas9-切口酶可提高切割准确性并允许更大的缺失。根据文献,CRISPR 可用于删除植物易感性 (S) 基因,从而在作物中产生抗病性。然而,尚未发现双生病毒的特定 S 基因。建议的解决方案是针对外壳蛋白 AV1/V1,这是双生病毒的唯一结构蛋白。这些蛋白质对其功能至关重要,因为它们负责病毒 DNA 往返于细胞核,并结合 ssDNA 以实现有效复制。我们假设 CRISPR-Cas9 可以与 Cas9-切口酶(以提高功效)和农杆菌一起递送到受影响的作物中。农杆菌是一种在植物细胞中产生肿瘤的病原体,但由于其具有转移 DNA 的能力,因此也可用于转基因。农杆菌插入 T-DNA 的预期效果是外壳蛋白发生突变,这将破坏外壳蛋白并使其失活。如果没有这种结构蛋白,病毒感染就不会有效,从而使双生病毒变得毫无用处。这将使农业受益,防止数十亿农作物受到感染,从而提高生产力并减少全球粮食危机。很少有研究分析过 SSW 中病毒和微生物之间可能存在的相互作用。利用 CRISPR-Cas9 系统和农杆菌改造外壳蛋白,帮助作物产生双生病毒抗性 Kajisha Vijayakumar,食品学学士 [1],Iman Andrea Niyokindi shima,公共卫生学学士 [2] [1] 圭尔夫大学食品科学系,加拿大安大略省圭尔夫 N1G 2W1 [2] 圭尔夫大学物理系,加拿大安大略省圭尔夫 N1G 2W1 双生病毒给印度豆类和非洲木薯产业造成了数百万美元的损失,并引发全球粮食短缺。双生病毒是一种基因组较小、编码蛋白质较少的 DNA 病毒。近年来,人们研究了成簇的规律间隔的短回文重复序列 (CRISPR),试图让作物产生对这些病毒的抗性。 Cas9(位点特异性 DNA 内切酶)和合成的单向导 RNA(sgRNA)构成 CRISPR-Cas9 机制。Cas9 通过 sgRNA 定向到其基因组靶区域,并通过两个核酸酶域切割噬菌体。Cas9-切口酶可提高切割准确性并允许更大的缺失。根据文献,CRISPR 可用于删除植物易感性 (S) 基因,从而在作物中产生抗病性。然而,尚未发现双生病毒的特定 S 基因。建议的解决方案是针对外壳蛋白 AV1/V1,这是双生病毒的唯一结构蛋白。这些蛋白质对其功能至关重要,因为它们负责病毒 DNA 往返于细胞核,并结合 ssDNA 以实现有效复制。我们假设 CRISPR-Cas9 可以与 Cas9-切口酶(以提高功效)和农杆菌一起递送到受影响的作物中。农杆菌是一种在植物细胞中产生肿瘤的病原体,但由于其具有转移 DNA 的能力,因此也可用于转基因。农杆菌插入 T-DNA 的预期效果是外壳蛋白发生突变,这将破坏外壳蛋白并使其失活。如果没有这种结构蛋白,病毒感染就不会有效,从而使双生病毒变得毫无用处。这将使农业受益,防止数十亿农作物受到感染,从而提高生产力并减少全球粮食危机。成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 已被研究,以尝试开发作物对这些病毒的抗性。Cas9(位点特异性 DNA 内切酶)和合成的单向导 RNA (sgRNA) 构成 CRISPR-Cas9 机制。Cas9 通过 sgRNA 定向到其基因组靶区域,并通过两个核酸酶域切割噬菌体。Cas9-切口酶提高了切割准确性并允许更大的缺失。根据文献,CRISPR 可用于删除植物易感性 (S) 基因,以产生作物的抗病性。然而,尚未发现双生病毒的特定 S 基因。建议的解决方案是针对外壳蛋白 AV1/V1,这是双生病毒的唯一结构蛋白。这些蛋白质对其功能至关重要,因为它们负责病毒 DNA 往返于细胞核,并结合 ssDNA 以进行有效复制。我们假设 CRISPR-Cas9 可以与 Cas9-nickases(以提高功效)和农杆菌一起递送到受影响的作物中。农杆菌是一种在植物细胞中产生肿瘤的病原体,但由于其具有转移 DNA 的能力,也用于转基因。农杆菌插入 T-DNA 的预期效果是外壳蛋白发生突变,这将损害外壳蛋白并使其失活。如果没有这种结构蛋白,病毒感染就不会有效,使双生病毒变得毫无用处。这将使农业受益,防止数十亿作物受到感染,从而提高生产力并减少全球粮食危机。成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 已被研究,以尝试开发作物对这些病毒的抗性。Cas9(位点特异性 DNA 内切酶)和合成的单向导 RNA (sgRNA) 构成 CRISPR-Cas9 机制。Cas9 通过 sgRNA 定向到其基因组靶区域,并通过两个核酸酶域切割噬菌体。Cas9-切口酶提高了切割准确性并允许更大的缺失。根据文献,CRISPR 可用于删除植物易感性 (S) 基因,以产生作物的抗病性。然而,尚未发现双生病毒的特定 S 基因。建议的解决方案是针对外壳蛋白 AV1/V1,这是双生病毒的唯一结构蛋白。这些蛋白质对其功能至关重要,因为它们负责病毒 DNA 往返于细胞核,并结合 ssDNA 以进行有效复制。我们假设 CRISPR-Cas9 可以与 Cas9-nickases(以提高功效)和农杆菌一起递送到受影响的作物中。农杆菌是一种在植物细胞中产生肿瘤的病原体,但由于其具有转移 DNA 的能力,也用于转基因。农杆菌插入 T-DNA 的预期效果是外壳蛋白发生突变,这将损害外壳蛋白并使其失活。如果没有这种结构蛋白,病毒感染就不会有效,使双生病毒变得毫无用处。这将使农业受益,防止数十亿作物受到感染,从而提高生产力并减少全球粮食危机。病毒感染不会有效,使双生病毒变得毫无用处。这将使农业受益,防止数十亿农作物受到感染,从而提高生产力并减少全球粮食危机。病毒感染不会有效,使双生病毒变得毫无用处。这将使农业受益,防止数十亿农作物受到感染,从而提高生产力并减少全球粮食危机。
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