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基因表达的抽象调节是细胞生物学的重要组成部分。转录因子蛋白经常结合旋转启动位点上游的调节DNA序列,以促进RNA聚合酶的激活或抑制。研究实验室已经专门用于了解转录因子的转录调节网络,因为这些受调节的基因为宿主生物的生物学提供了重要的见解。各种体内和体外测定已被开发,以阐明转录调节网络。包括SELEX-SEQ和CHIP-SEQ在内的几种测定法捕获了结合DNA结合的转录因子,以确定首选的DNA结合序列,然后可以将其映射到宿主有机体的基因组以鉴定候选调节基因。在此方案中,我们描述了一种使用限制性核酸内切酶,保护,选择和放大式(REPSA)来确定兴趣转换因子的DNA结合序列的替代性迭代选择方法。与基于传统抗体的捕获方法相反,REPSA通过用IIS型限制性核酸内切酶来挑战结合反应来选择转录因子结合的DNA序列。耐裂解的DNA物种通过PCR扩增,然后用作下一轮REPSA的输入。重复此过程,直到通过凝胶电泳观察到受保护的DNA物种,这表明成功的REPSA实验。随后的REPSA选择的DNA的高通量测序以及伴随基序发现的epsa选择的DNA,可以使用扫描分析来确定转录因子共识结合序列和潜在的调节基因,并在确定生物体的转录调节网络方面提供了关键的第一个步骤。
■产品描述。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。5■系统组件。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>6■兼容套件。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>7■甲板布局。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。7■hidnimbus®系统提供的材料。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。7■未提供所需材料。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。8
摘要:循环肿瘤DNA(ctDNA)检测已被认为是一种有前途的癌症诊断液体活检方法,各种ctDNA检测用于早期检测和治疗监测。基于可分散磁性纳米粒子的电化学检测方法已被提议作为基于检测性能和平台材料的特点的ctDNA检测的有前途的候选方法。本研究提出了一种纳米粒子表面局部基因扩增方法,将Fe3O4-Au核-壳纳米粒子整合到聚合酶链式反应(PCR)中。这些高度分散且磁响应的超顺磁性纳米粒子充当纳米电极,在PCR扩增后在纳米粒子表面原位扩增和积累目标ctDNA。随后捕获这些纳米粒子并进行重复的电化学测量以诱导重构介导的信号放大,以实现超灵敏(约3aM)和快速(约7分钟)的体外转移性乳腺癌ctDNA检测。该检测平台还可以检测体内样本中的转移性生物标志物,凸显了其临床应用的潜力,并可进一步扩展到对各种癌症进行快速、超灵敏的多重检测。关键词:循环肿瘤DNA、液体活检、基因扩增、电化学检测、磁性纳米粒子、表面功能化、超顺磁性
(未经同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可不得重复使用。此预印本的版权所有者此版本于 2023 年 5 月 30 日发布。;https://doi.org/10.1101/2023.05.30.542412 doi:bioRxiv preprint
特征选择、层次聚类和差异表达分析确定了细胞类型标记基因。将其他感兴趣的目标与细胞类型标记列表相结合,得到总共 500 个基因。BD WTA-to- poly( A ) 流程选择了基因列表的主要转录本变体,并创建了终止于 poly( A ) 位点的转录本最后 1,000 个碱基的 FASTA 文件。FASTA 文件输入到 BD Genomics Resource 上的引物设计工具中。引物设计流程通过评估各种因素(例如熔化温度、扩增子长度、引物兼容性和目标特异性)输出一组引物。由此产生的定制 500 基因面板包含细胞类型标记和与肾脏生理学和器官重塑有关的感兴趣的基因的组合。
核酸测试是现代分子诊断的基石。This review describes the current status and future directions of molecular diagnostics, focusing on four major techniques: polymerase chain reaction (PCR), next-generation sequencing (NGS), isothermal amplification meth- ods such as recombinase polymerase amplification (RPA) and loop-mediated isothermal amplification (LAMP), and clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)基于基于检测方法。我们探索每种技术的优点和局限性,描述每个技术如何与其他技术重叠或补充,并检查当前的临床产品。本综述为分子诊断的景观提供了广泛的观点,并突出了这个快速发展的领域的潜在未来方向。
是作者/资助者,已授予 medRxiv 永久展示预印本的许可。 (未经同行评审认证)预印本此版本的版权持有者于 2021 年 11 月 20 日发布。;https://doi.org/10.1101/2021.11.15.21266335 doi:medRxiv 预印本
表2。JAB-23425抑制KRAS突变/扩增的癌细胞的生长。A. JAB-23425 IC 50 data in KRAS-dependent cancer cell lines harboring multiple KRAS mutations, by pERK T202/Y204 HTRF assays (2 h) and CTG viability assay (6 days).ND, not detected.* 2D CTG生存力测定。B. JAB-23425 IC 50 data in KRAS WT cell lines with or without KRAS amplification, by pERK T202/Y204 HTRF assay (2 h) and CTG viability assay (6 days).Viability of cancer cell lines having KRAS WT amplification (KRAS-dependent) was significantly inhibited by JAB-23425, while there is no obvious inhibitory effect of JAB-23425 on cancer or normal cell lines without KRAS mutation or amplification (KRAS-independent).SK-MEL-2和KU-19-19 NRAS Q61R突变和A375 Harbors BRAF V600E突变。ND, not detected.* 2D CTG生存力测定。