图 1:PDE4C1 检测试剂盒原理图解。该检测使用荧光素标记的环状鸟苷酸(PDE4C1 为 cAMP-FAM),其中磷酸基团与环状核苷酸结合。这是一种旋转速度快(低 FP)的非常小的分子。PDE4C1 催化环状核苷酸中磷酸二酯键的水解并释放磷酸基团。在第二步中,游离磷酸基团被特定的磷酸结合纳米珠(结合剂)识别,从而形成大型复合物,运动受限(高 FP)。FP 与 PDE4C1 活性成正比。该检测需要荧光微孔板读数仪,该读数仪能够测量荧光偏振 (FP),并配备读取 FP 信号所需的部件。有关 FP 技术的更多信息,请访问我们的技术说明:FP、检测原理和应用。注意:截至 2025 年 1 月,此协议已重新优化性能。可根据要求提供此试剂盒的早期版本。背景磷酸二酯酶 (PDE) 通过水解第二信使 cAMP (环磷酸腺苷) 和 cGMP (环磷酸鸟苷) 信号,在动态调节这些信号传导中起重要作用。PDE 超家族由 11 个家族组成,其中 PDE4、7 和 8 是 cAMP 特异性水解酶,因此可调节对其的正向和负向反应。PDE4 是心血管组织中第二丰富的 PDE。PDE4 是一种 cAMP 特异性 PDE,也是最大的 PDE 亚家族,具有超过 35 种不同的同工型,因此也是特征最广泛的 PDE 同工酶。它是大多数炎症细胞和气道平滑肌中的主要同工酶,与炎症性气道疾病有关。PDE4 抑制剂罗氟司特已被批准用于治疗慢性阻塞性肺病 (COPD)。
应该通过使用松弛的质粒进行对照反应来检查超涂层质粒,以表明该化合物不仅可以作为托波斯I的抑制剂,如果有可能。如果使用PBR322的松弛形式,这将显示化合物是否为介导器,但如果它也抑制了topo I(即假阴性是可能的:下面原理图的左手部分中的第5巷)。如果使用了PBR322的超涂层形式,则该化合物是否为介导器,但如果它是Topo I的抑制剂(即假阳性是可能的:下面原理图的右手部分中的泳道6)。但是,如果与化合物相比,小麦细菌topo I的过量是过量的,使得与存在的酶的量相比,任何抑制活性都是无关紧要的,那么任何插入都将显而易见。这假定任何抑制活性是由于与酶的相互作用而不是预防酶活性的插入。
描述:PRMT1 化学发光检测试剂盒旨在测量 PRMT1 活性,用于筛选和分析应用。PRMT1 化学发光检测试剂盒采用方便的形式,8 孔试纸条预涂有组蛋白 H4 肽底物、针对组蛋白 H4 甲基化精氨酸残基的抗体、HRP 标记的二抗、S-腺苷甲硫氨酸、甲基转移酶检测缓冲液和纯化的 PRMT1 酶,可进行 96 种酶反应。PRMT1 化学发光检测试剂盒的关键是一种高度特异性的抗体,可识别组蛋白 H4 甲基化的 R3 残基。使用此试剂盒,只需三个简单的步骤即可检测甲基转移酶。首先,将 S-腺苷甲硫氨酸与含有检测缓冲液和甲基转移酶的样品一起孵育。接下来,添加一抗。最后,用 HRP 标记的二抗处理试纸条,然后添加 ELISA ECL 底物以产生化学发光,然后可以使用化学发光读数仪进行测量。组件:
现已明确,环氧合酶有两种不同的亚型。COX-1 在多种细胞类型中组成性表达,并参与正常细胞稳态。各种有丝分裂刺激物(如佛波醇酯、脂多糖和细胞因子)可诱导第二种 COX 亚型 COX-2 的表达。COX-2 负责急性炎症条件下前列腺素的生物合成。3 这种可诱导的 COX-2 被认为是非甾体抗炎药抗炎活性的靶酶。
用途:EpiNext™ CUT&LUNCH 检测试剂盒是一套完整的优化试剂,旨在快速从细胞中直接富集蛋白质(组蛋白或强结合转录因子)特异性 DNA 复合物,以通过 qPCR 或使用 Illumina 平台的下一代测序分析蛋白质与 DNA 之间的相互作用。起始材料:起始材料可以包括各种哺乳动物细胞样本,例如来自烧瓶或培养皿的培养细胞、原代细胞或从血液、体液、新鲜/冷冻组织中分离的稀有细胞群,以及从整个细胞群和胚胎细胞中分选的特定细胞等。细胞输入量:每个反应的细胞量可以是 2 x 10 3 到 5 x 10 5 个细胞。为了获得最佳制备效果,细胞输入量应为 2 x 10 5 ,尽管只需 500 个细胞即可获得修饰组蛋白的结果。抗体:抗体应为 ChIP 级,以识别与 DNA 或其他蛋白质结合的蛋白质。如果您使用的抗体尚未经过 ChIP 验证,则应使用适当的对照抗体(例如抗 RNA 聚合酶 II、抗 H3K4me3 或抗 H3K9me3)来证明这些抗体适合 ChIP。
DNA甲基化在发展和分化中的基因表达中起着至关重要的作用,以及多发性硬化症,糖尿病,精神分裂症,衰老和癌症等疾病。能够访问大量基因或整个基因组的表观遗传信息的能力,应极大地促进对细胞中基因调节的性质以及细胞与环境之间相互作用的表观依赖性机制的理解。这种能力对于人类表观遗传疾病和辅助繁殖的研究也应具有重要意义。基于微阵列的DNA甲基化分析技术已开发出来以实现这一目标。这些甲基化的OD可以分为三个主要类别的甲基化状态询问:(1)歧视甲基诱导的C至T过渡,(2)通过甲基化敏感限制酶裂解基因组DNA,以及(3)用甲基结合的蛋白质或抗甲基甲基甲基甲基化的甲基甲基甲基化的甲基甲基化蛋白质。这些方法中的每一种都有其自身的局限性。例如,甲基化敏感的限制酶不能询问每个CpG位点,而免疫原理方法无法以任何靶向序列以单碱基分辨率提供甲基化信息。对于基于亚硫酸盐的方法,挑战在于基因组DNA的亚硫酸盐转化后基因组复杂性的降低。特定于目标的探针选择和杂交特异性仍然是主要技术障碍。
描述 EIF2AK2 激酶检测试剂盒旨在测量 EIF2AK2(真核翻译起始因子 2 α 激酶 2)激酶活性,以使用 ADP-Glo™ 作为检测试剂进行筛选和分析应用。该检测试剂盒采用方便的 96 孔格式,含有足够的纯化重组 EIF2AK2 激酶(氨基酸 252 端)、激酶底物、ATP 和激酶检测缓冲液,可用于 100 次酶反应。背景 EIF2AK2(真核翻译起始因子 2 α 激酶 2,也称为 PKR)是一种蛋白激酶,已证实参与 HIV/gp120 相关神经变性。1 EIF2AK2 是 gp120 神经毒性的关键介质,也是对各种形式的环境压力作出反应的蛋白激酶家族的底物。EIF2AK2 在 mRNA 翻译、细胞增殖和细胞凋亡中起着关键作用。 EIF2AK 和 p53 之间的新型串扰可能对细胞增殖和肿瘤发生有影响。应用