saci smai bshii paci sbfi sbfi ecoi访问acci的bamhi xbai xbai xbai sali sali psti psti psti psti hindii agtgaattcgicgtccccccggggggggggggcggcgtcitatatagtagtcightgtgtgtgtgtgtgtgtgtggtggcsggctggctgctctscats。。。。。。。。。。4o
限制性酶使您可以将DNA与称为palindromic的特定序列相对应,即,可以在两个互补丝上以两种感觉读取;例如,BAMHI酶识别以下序列(斜线 /表示切割点;颜色突出了每个细丝和两个互补丝上的序列中的对称性):< / bub>
抽象简介。单纯疱疹病毒1型(HSV-1)是一种导致严重人类疾病并建立长期潜在感染的病毒。该病毒的潜在形式已证明对抗病毒药物有抗性。群集定期间空间短质体重复序列(CRISPR)是基因组工程中的重要工具,由指导RNA(GRNA)和Cas9核酸酶组成,它使RNA蛋白质复合物使RNA蛋白复合物可以消化GRNA的独家目标序列实现。此外,CRISPR-CAS9系统通过敲除某些病毒基因的敲除有效抑制了HSV-1感染。材料和方法。为了调查CAS9系统对HSV-1基因组破坏的功效,我们设计了所有包装在一个载体中的指南RNA(GRNA)。此外,我们使用BAMHI和ESP3I酶进行了一步限制。结果。CRISPR/CAS9系统被转染到HEK-AD细胞中,该细胞显示通过斑块测定和实时PCR对HSV-1感染显着降低。结论。PCAS指南-EF1A-GFP CRISPR载体可以通过限制酶(ESP3I(BSMBI)和BAMHI)创建一种快速有效的GRNA克隆方法。因此,CRISPR/CAS9系统可用于筛选对HSV-1感染至关重要的基因,并为HSV-1引起的病毒感染的靶向治疗制定新的策略。(Folia Histochemica et cytobiologica 2020,vol。58,编号3,174–181)
您的转弯读数在框架中您有一系列蛋白质的一部分,您希望使用虚构的GST质粒克隆到称为谷胱甘肽S转移酶(GST)的融合蛋白中。•您使用哪些PGSTPLASTID?a,b还是C?•您将与Bamhi和Ecori一起切入。•确保您具有正确的读取框架,可以在插入序列的末尾停止。请记住,GST的插入为5'。That is where the “ #1 bp ” is located • Google search for “ Restriction Sequence Translator ” to find a program to map for where the RE cuts sites are • Sequence GGATCCTGTAGATCTGCTGGCAGTTAAGAAGAAGCAGGAAACCAAACGTAGCATCAATGAGGA gattcatacccagttcctggatcatctgctgctgactggcatgaggacatctgcggcggtcactatgg tcaccatcaccacgaate•vdllavkkkkkkq etkrsineei htqfldhllt htqfldhllt giedicghyg hhh•找到地图并保留您的选择!•GST和C端的插入物在哪里?- 使用DNA到氨基酸翻译器在DNA序列中找到编码的氨基酸序列。
There are no restriction sites for the following enzymes: AarI(x), Acc65I, AcuI, AfeI, AgeI, AlwI, AlwNI, ApaI, AscI, AsiSI, AvrII, BamHI, BanII, BclI, BglI, BglII, BlpI, BmgBI, BmrI, BmtI, BsaI, BsaXI, BsgI, BsmBI, BspDI, BspEI, BsrFI, BsrGI, BstBI, BstEII, BstYI, BstZ17I, Bsu36I, ClaI, DpnI, DpnI, EagI, EcoN, EcoO1 FseI, FspAI(x), HindIII, I-CeeI, I-SceI, CPNI,MBOI,MSCI,NEI,NCOI,NDEI,NGOMIV,NHEI,NENI,NSSII,NSSII,NSPI,PFLI,PFLI,PMMI,PMLI,PMLI,P; PMLI,P; PMLI,P; PMLI,PPUTMI,PPHMI,PPHMI,PPHMI,PPHMI,PPHMI,P; PSPOME,PSPXI,PVI,PVII,RSRII,SACI,SALI,SALI,SANDI(X),SAU3AI,SBFI,SFII,SFII,SFII,SGRI,SGRI,SGRI,SMAI,SMAI,SMAI,SNABI,SPEI,SPEI,SPEI,SPHI,SPHI,SPHI,SRFMI(SRFMI(X)
There are no restriction sites for the following enzymes: AarI(x), Acc65I, AcuI, AfeI, AgeI, AlwI, AlwNI, ApaI, AscI, AsiSI, AvrII, BamHI, BanII, BclI, BglI, BglII, BlpI, BmgBI, BmrI, BmtI, BsaI, BsaXI, BsgI, BsmBI, BspDI, BspEI, BsrFI, BsrGI, BstBI, BstEII, BstYI, BstZ17I, Bsu36I, ClaI, DpnI, DpnI, EagI, EcoN, EcoO1 FseI, FspAI(x), HindIII, I-CeeI, I-SceI, CPNI,MBOI,MSCI,NEI,NCOI,NDEI,NGOMIV,NHEI,NENI,NSSII,NSSII,NSPI,PFLI,PFLI,PMMI,PMLI,PMLI,P; PMLI,P; PMLI,P; PMLI,PPUTMI,PPHMI,PPHMI,PPHMI,PPHMI,PPHMI,P; PSPOME,PSPXI,PVI,PVII,RSRII,SACI,SALI,SALI,SANDI(X),SAU3AI,SBFI,SFII,SFII,SFII,SGRI,SGRI,SGRI,SMAI,SMAI,SMAI,SNABI,SPEI,SPEI,SPEI,SPHI,SPHI,SPHI,SRFMI(SRFMI(X)
我们报告了一系列适用于检测和克隆翻译控制信号和外源基因 5' 编码序列的质粒载体的构建和使用。在这些质粒中,乳糖操纵子 β-半乳糖苷酶基因 lacZ 的氨基末端的前八个密码子被去除,并在 lacZ 的第八个密码子附近插入独特的 BamHI、EcoRI 和 SmaI (XmaI) 内切酶切割位点。将含有适当调节信号和 5' 编码序列的脱氧核糖核酸片段引入此类 lac 融合质粒导致产生由 β-半乳糖苷酶残基的羧基末端片段和含有外源脱氧核糖核酸序列编码的氨基末端氨基酸的肽片段组成的混合蛋白。这些杂合肽保留了 1,8-半乳糖苷酶的酶活性,并产生了 Lac' 表型。此类杂合蛋白可用于纯化由外源脱氧核糖核酸片段编码的肽序列,以及用于研究特定肽片段的结构和功能。
nzy-A快速的PCR克隆试剂盒设计用于对含有3´-A悬垂的PCR产物进行快速有效的克隆,这是由于使用非卫生读取DNA聚合酶具有末端转移酶活性的扩增,例如TAQ DNA聚合酶。这种方法结合了改进的连接缓冲液的效率与快速连接酶的速度,以在室温(20-25°C)的仅10分钟内在10分钟内进行快速连接。通过将NZYTECH的PNZY28与ECORV切割NZY-A快速克隆试剂盒提供的克隆载体,并在两端添加3´-末端胸苷。这些单一的3´-T突出者不仅通过为包含PCR产品的3'-A提供兼容的悬垂性,还可以通过防止向量的重新循环。在PNZY28矢量的多个克隆区域中引入了多个限制位点。使用ECORI或BAMHI的矢量消化允许释放PCR产物,因为矢量克隆区域侧翼是两种酶的识别位点。
甲基化不敏感的ISSCHIZOMER(市售)Aflii Cttaag 1 5 Asei Attaat 2 4 Avrii CCTAGG 1 5 BAMI GTATCC 1 5是的是-Bcli GCCNC TGTACA 1 5 BCLI GCCNC TGTACA 1 5 BSTEIIIIC 5 econnnagg ii aagctt 1 5是kpni ggtac 5 1是是msci tggcca 3 3 muni/mfei caattg 1 5是Ncoi Cctggg 1 5是Ndei catatg catatg catatg ctgcag 5 1 ctgcag 5 1 yes pvuii is是的Sphi xbai stuit stuig 5是xmni gaannttc 5 5是是
关于端粒区的结构,一个共同的主题正在出现。染色体末端带有多个串联重复的简单卫星状 DNA(2)。除了染色体末端的简单序列外,端粒附近的区域通常还带有长段中间重复 DNA(1、10、13、15、18、24)。在酿酒酵母中,染色体以 200 到 600 个碱基对的不规则序列 C1_3A 结束(17、23;图 1)。此外,在 DNA 末端附近发现了两个中间重复元素,称为 X 和 Y'(8、9)。Y' 是一个高度保守的元素,长度为 6.7 千碱基(kb)(8、9)。 X 是一种比 Y' 保守性更低的元件,大小范围为 0.3 至 3.75 kb,位于 Y' 的着丝粒附近(8, 9)。C1_3A 重复序列的内部序列以及 DNA 复制的推定起点(自主复制序列)与 X 和 Y' 相关(7, 21)。这些特性与端粒相关序列在复制、重组或端粒区域修复中发挥作用相一致。已经开发出凝胶系统,可以分离完整的酵母染色体 DNA 分子(4, 16)。已记录了菌株 YNN281、A364a、DCO4 和 AB972(5)中每条染色体在一个系统(正交场交替凝胶电泳 [OFAGE])中的行为。通过改良的凝胶插入法 (16) (5) 从这些菌株中制备 DNA,并进行 OFAGE 处理。将 DNA 转移到硝酸纤维素上并与 X 和 Y' 特异性探针杂交 (20)(图 2)。通过琼脂糖凝胶分离 1.7 kb NcoI 片段,从 YRp12O (9) 制备 X 特异性探针。通过分离 1.7 kb BglII 片段,从 YRpl31b (9) 制备 Y' 特异性探针,该片段被亚克隆到 BamHI 消化的 M13 mpl8 中。从 pYtl03 (17) 切下 125 碱基对 HaeIII-MnlI 片段,其中包含 82 碱基对 C1_3A 重复序列。杂交探针来自据报道不含 C1_3A 重复序列的 X 和 Y' 区域。这一点已通过以下事实得到证实:源自 pYtl03 的真正的 C1_3A DNA 既不与 X 也不与 Y' 探针杂交。为探针选择的 X 区域在不同的 X 元素中是保守的 (8, 9)。表 1 中显示的数据是从 17 种不同的凝胶中汇编而来的,这些凝胶的切换间隔范围为 20 到 80 秒。每个菌株的 X 和 Y' 分布模式不同(图 2 和 3)。每个菌株中至少有三条最小染色体中有一条不与 Y' 探针杂交,在三个菌株中,五条最小染色体中的两条不与 Y' 探针杂交