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大肠杆菌 BL21 对 D-木糖的有效厌氧消耗...
比较了在含有 D-葡萄糖 (12.5 mM) 和 D-木糖 (12.5 mM) 的发酵培养基中生长的野生型和适应性进化的 BL21(DE3) 菌株的 xylA 和 xylF 基因 (分别编码木糖异构酶和木糖 ABC 转运蛋白) 的表达水平。与 BL21(DE3) 相比，JH001 菌株中 xylA 和 xylF 基因的表达分别上调了 11 倍和 3 倍。同样，在 JH019 菌株中，xylA 和 xylF 基因的表达水平与野生型菌株相比分别增加了 5 倍和 2 倍 (图 4A)。当每种菌株在仅含有 D-木糖 (25 mM) 的发酵培养基中生长时，JH001 和 JH019 细胞的 xylA 和 xylF 基因转录水平显著升高，至少比野生型 BL21(DE3) 菌株高出 5 倍（图 4B）。这些结果表明，D-木糖运输和代谢酶在携带 xylR 适应性突变的适应性 BL21(DE3) 细胞中高度表达。
高通量筛选与实验鉴定...
系统和JAVA Codon Adaptation Tool 进行密码子适配。优化后的序列由上海生工生物工程有限公司通过 BamH1 和 XhoI 酶切位点合成并克隆到来自 pGEX-6p-1 质粒（美国 Novagen）的表达载体中。将重组质粒 pGEX-6p-1-Mpro 转化的 E. coli BL21（DE3）细胞（美国 Invitrogen）在 2 L Luria-Bertani 培养基中于 37 ℃ 下生长至 OD600 达到 0.6 后，加入 0.2 mM IPTG，16 ℃ 诱导重组蛋白表达过夜。将菌体悬浮在 PBS 中，超声波破碎。离心收集上清液并与谷胱甘肽 Sepharose 4B 琼脂糖（美国 GE Healthcare）混合，4 ℃ 下孵育 3 h。然后用 PBS 清洗珠子，并加入 preScission 蛋白酶 (GE) 以切割 GST 标签。含有
用于特定细胞靶向和药物输送的多功能淀粉样蛋白寡聚纳米粒子
116 试剂和酶。除非另有说明，试剂和酶均从 Sigma-Aldrich（英国）购买。碳网格（400 平方目铜）从 Micro to Nano（荷兰）购买，醋酸铀酰溶液由巴塞罗那自治大学的显微镜服务部门提供。Sup35- 121 SAC 肽从 CASLO ApS（Scion 丹麦技术大学）购买。122 蛋白质的表达和纯化。克隆到带有 His6 标签的质粒 pET28(a) 中的 Sup35- 123 5aa-DHFR 的 cDNA 是从 GenScript 获得的。通过在 128 质粒 pET28(a)/Sup35-5aa-DHFR 上进行诱变，获得了构建体 pET28(a)/Sup35-8aa- 126 DHFR、pET28(a)/野生型 DHFR (DHFR-wt) 和 pET28(a)/ 127 Sup35-5aa-DHFR-Z。用相应的质粒转化大肠杆菌 BL21 (DE3)- 129 感受态细胞。130 然后，将转化细胞在 10 mL 溶源性肉汤 (LB) 中培养
重组青霉素G的定点诱变...
以往用化学方法生产抗生素的方法已经被一种更安全、更环保的方法所取代，即利用微生物作为宿主表达系统生产重组蛋白。为开发PGA的潜力，人们进行了不同阶段的研究，包括重组、基因表达、酶的分离纯化以及利用不同重组宿主进行酶活性测试。有报道称，从大肠杆菌和巨大芽孢杆菌中克隆和通过宿主细胞E. coli BL21(DE3)和DH5α生产重组PGA，并进行了许多优化。PGA的基因表达和分离是令人满意的，但该酶在酶促反应中的活性较低且尚未达到最佳[3]。PGA的低酶活性可能是由酶和底物的结合力较弱引起的。这一假设使我们找到了进一步提高酶活性的方法，即通过提高酶和底物之间的结合强度。
安捷伦 2024 定价
价格 200123 TG1 电穿孔感受态细胞 5 x 0.1 毫升 279.00 美元 200129 XL1-红色感受态细胞 5 x 0.2 毫升 511.00 美元 200130 XL1-蓝色亚克隆级感受态细胞 8 x 0.5 毫升 105.00 美元 200131 BL21(DE3) 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 141.00 美元 200132 BL21(DE3) pLysS 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 202.00 美元 200133 BL21 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 202.00 美元 200134 TKB1 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 471.00 美元200150 XL2-Blue 超感受态细胞 10 x 0.1 毫升 209.00 美元 200151 XL2-Blue MRF' 超感受态细胞 10 x 0.1 毫升 299.00 美元 200152 SURE 2 超感受态细胞 10 x 0.1 毫升 188.00 美元 200154 BJ5183 电穿孔感受态细胞 5x 100 微升 321.00 美元 200157 BJ5183-AD-1 电穿孔感受态细胞 5x 100 微升 411.00 美元 200158 XL1-Blue MRF' 电穿孔感受态细胞 5 x 0.1 毫升 279.00 美元 200159 EletroTen-Blue电穿孔感受态细胞 5 x 0.1 毫升 280.00 美元 200160 ABLE 电穿孔感受态细胞试剂盒 1 套 480.00 美元 200172 ABLE K 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 303.00 美元 200207 Gigapack III XL 包装提取物 4 次反应 441.00 美元 200209 Gigapack III XL 包装提取物 11 次反应 881.00 美元 200221 Transpack 包装提取物，100 次反应 100 次反应 4,234.00 美元 200227 SURE 电穿孔感受态细胞 5 x 0.1 毫升 278.00 美元 200228 XL1-Blue 电穿孔感受态细胞 5 x 0.1 毫升 195.00 美元200229 XL1-Blue MR 超级感受态细胞 5 x 0.2 毫升 179.00 美元 200231 SCSI 超级感受态细胞 5 x 0.2 毫升 258.00 美元 200232 AG1 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 186.00 美元 200234 JM101 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 186.00 美元 200235 JM109 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 186.00 美元 200236 XL1-Blue 超级感受态细胞 5 x 0.2 毫升 179.00 美元 200238 SURE 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 269.00 美元 200239 JM110 感受态细胞5 x 0.2 mL 219.00 $ 200247 SCS110 感受态细胞 5 x 0.2 mL 219.00 $ 200249 XL1-Blue 感受态细胞 5 x 0.2 mL 124.00 $ 200314 XL10-Gold 超感受态细胞，5 x 100 ul 5 x 0.1 mL 148.00 $ 200315 XL10-Gold 超感受态细胞，10 x 100 ul 10 x 0.1 mL 212.00 $ 200415 脱氧核苷酸混合物，PCR 级 400 ul 151.00 $ 200435 10x Taq DNA 聚合酶缓冲液 10 mL 119.00 $ 200436 AffinityScript 多温度 cDNA 合成试剂盒 50 次反应 242.00 美元 200473 RAT 抗 DYKDDDDK 标签抗体，200 ug 200 ug 235.00 美元 200474 RAT 抗 DYKDDDDK 标签抗体，1 mg 1 mg 399.00 美元 200514 QuikChange 多位点定向诱变试剂盒 30 次反应 1,188.00 美元 200515 QuikChange 多位点定向诱变试剂盒 10 次反应 465.00 美元 200516 QuikChange XL 位点定向诱变试剂盒 30 次反应 855.00 美元 200517 QuikChange XL 位点定向诱变试剂盒 10 次反应 239.00 美元200518 QuikChange 定点诱变试剂盒 30 次反应 608.00 美元 200519 QuikChange 定点诱变试剂盒 10 次反应 239.00 美元 200521 QuikChange II XL 定点诱变试剂盒 10 次反应 239.00 美元 200522 QuikChange II XL 定点诱变试剂盒 30 次反应 608.00 美元 200523 QuikChange II 定点诱变试剂盒 10 次反应 239.00 美元 200524 QuikChange II 定点诱变试剂盒，30 次反应 608.00 美元 200550 GeneMorph II 随机诱变试剂盒 1 套 566.00 美元 200552 GeneMorph II EZClone 域诱变试剂盒 1 套 425.00 美元 200555 QuikChange II-E（电穿孔）定点诱变试剂盒 10 次反应 239.00 美元 200600 DNA 提取试剂盒 1 套 371.00 美元 200820 AccuScript 高保真第一链 cDNA 合成试剂盒 1 套 359.00 美元 201115 Kb DNA Ladder 250 ug 214.00 美元 201190 鲑鱼精子 DNA 1 套 273.00 美元 201222 MiracleHyb高性能杂交溶液，250 mL 250 mL 160.00 $ 204130 GeneJammer 转染试剂，1 mL 1 mL 366.00 $
模拟引导的工程使Selinadiene合酶中的功能开关降低羟基化
摘要：倍半萜烯合酶形成预定义的替代产品是一个重大挑战，因为它们在环化机制方面的多样性以及我们对氨基酸变化如何影响这些机制的方向的有限理解。在这里，我们将原子模拟和位于定位的诱变的组合来设计A Selina-4（15），7（11） - Diene合酶（SDS），因此其最终的反应性碳分配被捕获的活性现场水淬灭，从而形成了复杂的羟基羟基甲氧酯（11）-EL（11）-4-4-4-4-4-4-4-4（11）。最初，SDS G305E变体产生20％SELIN-7（11）-EN-4-OL。通过建模酶 - 碳化络合物复合物所建议的，可以通过改变pH来进一步改善Selin-7（11）-EN-4-OL产生，从而导致Selin-7（11）-EN-4-OL成为pH 6.0时的主要产物（48％）。我们将SDS G305E变体与来自甲戊酸酯途径的基因合并到细菌BL21（DE3）细胞中，并以10 mg/l的量表为10 mg/l批量发酵。这些结果凸显了萜烯合酶模拟引导的工程的机会，以产生预定义的复杂羟基化倍半萜。关键字：Terpenoids，MD模拟，水捕获，酶工程，Selin-7（11）-EN-4-OR■简介
具有异型的全细胞筛选方法
由于其直接电子传输到电极的能力，稀土金属作为辅因子的利用及其周质定位，吡咯烷二酚奎诺酮依赖性的醇dehydroge- nases（pqqq-adhs）代表了一类有趣的生物催化剂，用于各种生物技术应用程序。对于大多数生物催化剂而言，蛋白质稳定性是库的，要么在给定的过程条件下提高蛋白质的性能，要么最大程度地提高蛋白质对突变操纵的鲁棒性，通常需要增强或引入感兴趣的功能。在这项研究中，我们描述了一个全细胞筛选测定法，适用于探测Escherichia Coli BL21（DE3）细胞中的PQQ-ADH活动，并使用此测定法筛选智能突变库，以提高PQQ-ADH PEDE的热稳定性（PP_2674）（PP_2674）（ppseudomonas putida putida ktida KT22440）。在连续三轮筛选时，我们确定了三个不同的氨基酸位置，这显着改善了酶的稳定性。The subsequent combination of the bene fi cial mutations fi nally results in the triple mutant R91D/ E408P/N410K, which not only exhibits a 7 ° C increase in thermal stability but also a twofold increase in residual activity upon incubation with up to 50% dimethyl sulfoxide (DMSO), while showing no signi fi - cant difference in enzymatic ef fi ciency ( k cat / k m）。
茶厂中的丝氨酸乙酰转移酶（SAT）基因家族（Camellia sinensis）：盐胁迫下的识别，分类和表达分析
摘要：半胱氨酸在植物的硫代谢网络中起关键作用，密切影响有机硫的转化率以及植物承受非生物胁迫的能力。在茶厂中，丝氨酸乙酰转移酶（SAT）基因出现是半胱氨酸代谢的关键调节剂，尽管显然缺乏全面的研究。利用隐藏的马尔可夫模型，我们确定了茶叶基因组中的七个CSSSAT基因。生物信息学分析的结果表明，这些基因的平均分子量为33.22 kd，簇分为三个不同的组。关于基因结构，CSSSAT1在十个外显子中脱颖而出，比其家庭成员高得多。在启动子区域中，与环境反应性和激素诱导相关的顺式作用元素占主导地位，分别占34.4％和53.1％。转录组数据显示，在各种应力条件下（例如PEG，NaCl，Cold，Meja）及其在茶厂中的组织特异性表达模式，CSSSAT的复杂表达动力学。值得注意的是，QRT-PCR分析表明，在盐应力下，CSSSAT1和CSSSAT3表达水平显着增加，而CSSSAT2表现出下调趋势。此外，我们克隆了CSSSAT1 -CSSSAT3基因，并构造了相应的原核表达载体。产生的重组蛋白在诱导后显着增强了大肠杆菌BL21的NaCl耐受性，这表明CSSSATS潜在的应用在增强植物抗性抗性的抗性中。这些发现丰富了我们对CSSSATS基因在压力耐受性机制中扮演的多方面角色的理解，为未来的科学努力和研究追求奠定了理论基础。
细菌转化.pdf
DNA质粒的转化可能对克隆和蛋白质表达有益。在DNA克隆的初始步骤涉及质粒和基因插入物的限制消化，然后连接到质粒上的插入片段后，在细胞复制质粒的复制之前，仍然存在单链DNA尼克斯，必须由宿主细胞的DNA修复机器修复。细菌菌株（例如常见克隆菌株DH5α）已开发具有特定于克隆应用的特征。3已生成其他细菌菌株，例如BL21菌株，以促进靶基因在纯，完整，转化的质粒上受控的蛋白质表达。4这些细胞应变修饰的例子包括淘汰非必需的蛋白酶以最大化靶基因的蛋白质表达。请记住，可以在转化中使用许多不同类型的细菌菌株，所有这些菌株对不同的应用都有不同的修改。由于转化技术利用了细菌接受基因组DNA的能力，因此已经建立了特定的方法来最大程度地提高基因转移效率。通常，这些技术涉及某种形式的刺激，这些刺激使细菌外膜在短时间内更可渗透，从而可以摄取DNA。当前使用的两种最常见的转化技术是电击细菌菌株的化学胜任细菌菌株的热冲击（电击）。这些细胞的热休克在细胞膜中打开孔，允许进入质粒DNA。在前者中，用氯化钙处理细胞，以使细胞膜更可渗透，并促进质粒DNA附着在细菌细胞膜上。5电穿孔在细菌细胞壁中产生孔，并通过溶液中细胞的电脉冲进入质粒DNA。6平均而言，相对于热震动的转化，电穿孔在质粒摄取中产生较高的效率，并且不需要对细胞的任何化学处理。但是，电穿孔更昂贵，因为它使用电氧化器和专门的比色皿将电荷传递给溶液中的电池。必须根据可用资源和实验的所需转换效率做出方法的选择。转化后，细胞必须在营养丰富培养基中短暂生长（通常使用SOC培养基）中从冲击中恢复过来，然后可以将细胞粘贴在包含适当抗生素的LB琼脂平板上，以选择成功接受的细胞