先进的光纤解决方案一种直接且不显眼地编织到织物中的基于光纤的条形码可以通过自动分拣设备中的传统光谱仪快速读取,从而完成从初始制造到重复使用的整个循环。为了实现这种光纤条形码,林肯实验室国防织物发现中心和密歇根大学的研究人员设计了一种光子光纤,其可调整的周期性可以提供织物组成材料的光学特征。开发过程使用由交替层市售聚合物(即聚碳酸酯和聚甲基丙烯酸甲酯)薄膜组成的预制件,将这些层热拉伸成层厚度小于 5 微米的微纤维。可以通过拉伸过程控制光纤的光子反射和吸收特性,以创建不同织物特有的聚合物组合。
在细菌中,天然转座子动员可以驱动自适应基因组重排。在这里,我们以这种能力为基础,并开发了一个可诱导的,自传播的转座子平台,用于整个基因组诱变和细菌中基因网络的动态重新布线。我们首先使用该平台研究转座子功能对平行大肠杆菌种群进化对各种碳源利用和抗生素耐药性表型的影响。然后,我们开发了一个模块化,组合装配管道,用于用合成或内源基因调节元素(例如,诱导型启动子)以及DNA条形码的转座子功能化。我们可以在交替的碳源上进行平行的发展,并证明了诱导性,多基因表型的出现,并且可以持续地跟踪条形码的转座子的易于性,以识别基因网络的致病性重新旋转。这项工作建立了一个合成的转座子平台,可用于优化工业和治疗应用的菌株,例如,通过重新布置基因网络来改善各种原料的增长,并有助于解决有关已雕刻出了极端基因网络的动态过程的基本问题。
p53 通路的激活,阻止细胞生长并扭曲筛选结果 17 – 21,37,38 。然后我们 208
Compatible with single - stranded AAV (ssAAV ) and self - complementary AAV (scAAV ) • AAV DNA sample extraction is performed using third - party methods• Multiplexing is performed using SMRTbell barcoded adapter plate 3.0 (102 - 009- 200)• A total of 1 μg of pooled AAV DNA is required for SMRTbell library preparation.每个单个AAV样本的输入DNA需求取决于多重水平,并且范围从
图 3。AAV9 介导小鼠心肌细胞转基因表达。我们使用心肌细胞报告基因测量了小鼠心脏中这三种血清型的病毒 DNA、RNA 和蛋白质水平。根据病毒基因组 DNA 载量测量,这三种血清型均显示出相似的心脏转导,但是,AAV9 产生的心肌细胞特异性报告 RNA 转录本和蛋白质产物的表达水平高于在同一平台上并行制造的其他两种血清型。对条形码合并和单独给药进行了测试,并产生了相似的结果。在此图中,具有相对定量的 DNA 和 RNA 数据来自条形码合并研究,具有绝对定量的蛋白质数据来自单独给药研究。每项研究招募了五只动物,并在该图中以单独的点表示。
•用条形码凝胶珠划分的细胞•cDNA末端的细胞条形码和唯一分子标识符(UMI)•〜2000的中位基因平均检测到每个细胞的平均测序读数〜50,000个平均测序读数•基因级数数据
• KingFisher Apex 使用带条形码的 96 深孔样品板(Thermo Fisher 95040450B)。如果仪器未检测到条形码,它将显示错误消息。点击“确定”将允许脚本继续(它仍将适用于非条形码版本的板)。如果检测到错误的板或尖端梳条形码,仪器将显示错误消息(例如,如果插入的是 24 深孔板而不是 96 深孔板)。
为了充分发挥基因编辑技术在临床治疗中的巨大潜力,需要彻底评估靶向编辑和非预期编辑的后果。然而,目前缺乏一种全面、流水线化、大规模且经济的工作流程来检测基因组编辑结果,特别是插入或删除大片段。在这里,我们描述了一种通过对条形码长距离 PCR 产物进行纳米孔池测序来有效准确地检测 CRISPR-Cas9 编辑后的多个基因变化的方法。为了克服纳米孔测序的高错误率和插入缺失,我们开发了一种流程,通过对纳米孔扩增子测序 (GREPore-seq) 的读取进行 grepping 来捕获条形码序列。GREPore-seq 可以检测 NHEJ 介导的双链寡脱氧核苷酸 (dsODN) 插入,其准确度与 Illumina 下一代测序 (NGS) 相当。GREPore-seq 还可以识别 HDR 介导的大基因敲入,这与 FACS 分析数据高度相关。还检测到了 HDR 编辑后的低水平质粒骨架插入。我们建立了一个实用的工作流程来识别遗传变化,包括量化 dsODN 插入、敲入、质粒骨架插入和 CRISPR 编辑后的大片段缺失。该工具包用于对汇集的长扩增子进行纳米孔测序,在评估靶向 HDR 编辑和超过 1 kb 的意外大插入缺失方面应具有广泛的应用。GREPore-seq 可在 GitHub 上免费获取(https://github.com/lisiang/GREPore-seq)。