Biomek i 系列自动化工作站体现了 Biomek 工作站成为行业领先者的最佳优势,并结合了全球客户建议的增强功能,旨在优化中高通量实验室的可靠性和停机时间。
QIASEQ靶向DNA Pro面板可以简化样本到Insight®,靶向下一代测序(NGS)。目标富集技术通过使用户能够对特定的感兴趣区域(ROI)进行测序(而不是整个基因组)来增强DNA NG,从而有效地增加了测序深度和样本吞吐量,同时最小化了成本。QIASEQ靶向DNA Pro面板通过将独特的分子指数(UMI)纳入单个基因或ROI特异性的,基于引物的靶向富集过程中,利用高度优化的反应化学来克服偏见/伪像。通过结扎和目标富集步骤在酶促清理中更换珠子清理,QIASEQ靶向DNA Pro面板可以更有效,快速,一致,自动化 - 友好的工作流程。
QIAseq Targeted DNA Pro Panel 可简化 Sample to Insight® 的 DNA 靶向新一代测序 (NGS)。靶向富集技术增强了 DNA NGS,使用户能够对特定感兴趣区域 (ROI)(而不是整个基因组)进行测序,从而有效提高测序深度和样本通量,同时最大限度地降低成本。QIAseq Targeted DNA Pro Panel 利用高度优化的反应化学,将独特的分子指数 (UMI) 整合到单个基因或 ROI 特定的基于引物的靶向富集过程中,从而克服偏差/伪影。通过在连接和靶向富集步骤后用酶净化代替珠子净化,QIAseq Targeted DNA Pro Panel 可实现更高效、快速、一致且自动化友好的工作流程。
Illumina* DNA无PCR PREP应用模板使库的生成与Illumina测序平台兼容。应用模板允许用户在单个批处理中生产4至24个库之间。用户可以利用基因组DNA(GDNA)作为起始材料。血液和唾液输入。此应用程序支持具有GDNA输入范围内的标准输入协议。在25-99 ng范围内的输入不受此标准输入应用程序的支持。用户可以选择指定起始材料的浓度以实现归一化以及洗涤后的珠干时间。80%乙醇洗涤量已从180 µL减少到100 µL。在协议末尾的自动池不支持。
Illumina Trusight肿瘤学500 DNA自动化套件应用DNA仅允许创建与Illumina测序平台兼容的库。f it tollowing批处理,可以将Covaris剪切的DNA样品加载到库制备反应容器(RV)上,并通过末端修复/A-tailing,适配器连接和索引PCR制备到Illumina库中。感兴趣的区域与探针杂交,磁捕获和洗脱,并且富集的文库被杂乱无章。可选的荧光定量步骤可用于确保在基于珠子的归一化之前有足够的库。归一化后,库准备池进行测序。下面的图1详细介绍了工作流的特定自动化和手动步骤。
商标:Qiagen®,样本到Insight®(Qiagen Group)。注册名称,商标等。在本文档中使用的,即使没有明确标记,法律也不被认为不受保护。
•海洋基因组计划已在PACBIO Revio系统上建立了用于HMW DNA提取,自动化库制备和HIFI测序的优化的高通量工作流程。•通过Biomek i7自动化的效率提高,动手时间降低,并提高了各种DNA输入的样品一致性。•此工作流程导致了130多个海洋脊椎动物的HIFI数据,提供了无价的保护和研究工作的数据。
全基因组测序和分析 - 基于 Illumina Rhabdoid (RT) Illumina 基因组板的文库构建(350-450bp 插入大小):将 96 孔格式的 2ug 基因组 DNA 通过 Covaris E210 超声处理 30 秒进行碎裂,使用 20% 的“占空比”和 5 的“强度”。双端测序文库是按照 BC 癌症机构基因组科学中心 96 孔基因组 ~350bp-450bp 插入 Illumina 文库构建协议在 Biomek FX 机器人(Beckman-Coulter,美国)上准备的。简单来说,DNA在96孔微量滴定板中用Ampure XP SPRI 珠子纯化(每60uL DNA 40-45uL 珠子),在单一反应中分别用T4 DNA聚合酶、Klenow DNA聚合酶和T4多核苷酸激酶进行末端修复和磷酸化,然后用Ampure XP SPRI 珠子进行清理,并用Klenow片段(3'到5'外显子减去)进行3' A加尾。用Ampure XP SPRI 珠子清理后,进行picogreen定量以确定下一步接头连接反应中使用的Illumina PE接头的数量。使用 Ampure XP SPRI 珠子纯化接头连接产物,然后使用 Illumina 的 PE 索引引物组,用 Phusion DNA 聚合酶(美国赛默飞世尔科技公司)进行 PCR 扩增,循环条件为:98˚C 30 秒,然后 6 个循环,98˚C 15 秒,62˚C 30 秒,72˚C 30 秒,最后在 72˚C 延伸 5 分钟。使用 Ampure XP SPRI 珠子纯化 PCR 产物,并使用高灵敏度分析(美国珀金埃尔默公司)用 Caliper LabChip GX 检查 DNA 样本。所需大小范围的 PCR 产物经过凝胶纯化(在内部定制机器人中使用 8% PAGE 或 1.5% Metaphor 琼脂糖),并使用 Agilent DNA 1000 系列 II 检测和 Quant-iT dsDNA HS 检测试剂盒使用 Qubit 荧光计(Invitrogen)评估和量化 DNA 质量,然后稀释至 8nM。在使用 v3 化学法在 Illumina HiSeq 2000/2500 平台上生成 100bp 配对末端读数之前,通过 Quant-iT dsDNA HS 检测确认最终浓度。全基因组亚硫酸盐-Seq 文库构建和测序:使用 1-5 mg Qubit(Life Technologies,加利福尼亚州卡尔斯巴德)定量基因组 DNA 进行文库构建,如所述(Gascard 等人,2015 年)。为了追踪亚硫酸盐转化的效率,将 1 ng 未甲基化的 lambda DNA (Promega) 掺入使用 Qubit 荧光法定量的 1 µg 基因组 DNA 中,并排列在 96 孔微量滴定板中。使用 Covaris 超声处理将 DNA 剪切至 300 bp 的目标大小,并使用 DNA 连接酶和 dNTP 在 30o C 下对片段进行末端修复 30 分钟。使用 2:1 AMPure XP 珠子与样品比例纯化修复后的 DNA,并在 40 µL 洗脱缓冲液中洗脱以准备 A 尾;这涉及使用 Klenow 片段和 dATP 将腺苷添加到 DNA 片段的 3' 端,然后在 37o C 下孵育 30 分钟。用磁珠清理反应后,将胞嘧啶甲基化双端接头(5'-AmCAmCTmCTTTmCmCmCTAmCAmCGAmCGmCTmCTTmCmCGATmCT-3' 和 3'-GAGmCmCGTAAGGAmCGAmCTTGGmCGAGAAGGmCTAG-5')在 30oC 下连接到 DNA 20 分钟,并纯化接头两侧的 DNA 片段珠。在亚硫酸盐转化之前,用 10 个 PCR 循环扩增一份文库片段,并在 Agilent Bioanalyzer 高灵敏度 DNA 芯片上进行大小测定。扩增子的长度在 200-700 bp 之间。使用 EZ Methylation-Gold 试剂盒(Zymo Research)按照制造商的方案实现甲基化接头连接的 DNA 片段的亚硫酸盐转化。五次循环
用于使用........................................................................................................................................................................