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气候行动路线图
虽然欧盟（EU）和爱尔兰政策建立了我们的工作监管环境，但2023年3月的“综合”报告是由国际上在气候变化范围内致力于气候变化范围内部工作的科学家发表的，警告说，人类引起的气候变化现在是广泛的，快速的，迅速的，强化的领域，现在具有不利影响的领域。在将报告描述为“人类的红色代码”时，联合国秘书长谈到需要采取行动以避免气候灾难。此信息在爱尔兰的2023年气候行动计划中反映在全国范围内，这是为了实现解决气候变化所需的减少排放目标，“所需的系统和行为变化的规模是变革性和“前所未有的”。tu tu Bulin承认所有发达国家实施重大变革并提出长期目标的紧迫性和呼吁行动。为此，都柏林tu已承诺在2040年完全脱碳，在适当的参与，培训和投资下，我们将迅速降低在组织边界领域内的影响。
背景 基于免疫检查点抑制剂 (ICI) 的治疗方案已成为 NSCLC 一线治疗的标准。一旦出现进展，不建议继续使用 ICI 单药治疗，且化疗的疗效有限（使用 doc 的 ORR ~10%），1 因此存在很大的未满足临床需求。Plin 是一种选择性免疫调节微管结合剂，可促进树突状细胞成熟并增强抗肿瘤 T 细胞反应，并且有可能作为与 pemb 和 doc 联合的新方案克服免疫治疗耐药性。2 这项 2 期研究旨在评估 pemb 加 plin 和 doc 对 ICI 后出现进展的转移性 NSCLC 患者的疗效和安全性。方法 在这项由研究者发起的单组开放标签 II 期试验中，招募了 ICI 治疗后获得耐药的转移性 NSCLC 患者（临床试验信息：NCT05599789）。参与者接受 pemb 200 mg D1、plin 30 mg/m 2 D1 和 doc 75 mg/m 2 D1 静脉注射，持续 21 天。主要终点是根据 RECIST 1.1 得出的基于研究者的 ORR。次要终点包括 PFS、OS、DoR 和毒性。使用 Kaplan-Meier 方法进行 OS、PFS 和 DOR 分析。该研究计划招募 47 名患者，并在招募 19 名患者后进行正式的中期分析。结果 截至 2024 年 8 月 29 日数据截止时，共招募了 36 名患者，并分析了 30 名可评估的 ITT 人群。中位随访时间为 11.5 个月 (M)，中位年龄为 68.0 (50 – 77) 岁，其中 73.3% 为男性，26.7% 为女性。60% 为当前或以前吸烟者。组织学包括 57% 为非鳞状细胞癌，43% 为鳞状细胞癌。确认的 ORR 为 21.4%。DCR 为 89.3%（定义为 PR 和 SD > 4 个月），中位 DoR 为 11.4 个月，中位 PFS 为 8.6 个月（目前 6 个月 PFS 率为 71.3%，12 个月 PFS 率为 41.9%），尚未达到 OS。48.3% 的患者出现 G3 或更高级别的治疗相关不良反应。结论 pemb 联合 plin 和 doc 疗法耐受性良好，对于接受 ICI 治疗后出现进展的转移性 NSCLC 患者，与化疗的历史对照相比，ORR 增加了一倍，PFS 增加了一倍，DCR 增加了三倍，显示出良好的疗效。 致谢 本研究由北京默沙东研发（中国）有限公司和辽宁大连万春步林制药有限公司资助。我们感谢所有患者、他们的家人以及支持本研究的机构。 试验注册临床试验信息：NCT05599789。
干细胞研究
转基因株系采用第二代 CRISPRa 系统，该系统携带与异源三聚体 VPR 反式激活因子融合的核酸酶缺陷型 dCas9，该异源三聚体 VPR 反式激活因子由 VP64、p65 和 RTA 结构域组成。该系统可用于解释任何所需细胞类型的内源性调控机制。使用基于 CRISPR/Cas9 的基因组编辑方法，我们以 AAVS1 人类基因组位点为目标，分别引入先前描述的 dCas9VPR-tdTomato（Schoger 等人，2020 年）和嘌呤霉素盒，这些盒受 CAG 和 EF1a 启动子的控制（图 1 A）。采用优化的核转染方案转染 LhiPSC-GR1.1 细胞。转染后，选择具有 tdTomato 表达的细胞并通过 PCR 进行基因分型（图 1B，引物结合如图 1A 所示，黑色引物仅扩增野生型 (WT) 片段；绿色引物扩增插入的构建体）。随后，扩增、分析和冷冻保存两个阳性克隆（#2 和 #3）。DNA 测序数据证实了 AAVS1 基因座中的正确和纯合敲入转基因整合（图 1C，显示为克隆#2）。PCR 结果显示，在筛选的 15 个克隆中，11 个克隆含有纯合插入（命名为 CRISPRa 细胞），1 个克隆是杂合的，3 个克隆不含有插入而是含有 WT 完整基因座（用作对照细胞）（数据未显示）。通过分析 PCR 和测序预测的前五个脱靶位点进行脱靶分析；在这些位点中均未发现任何编辑事件。对照电穿孔和非电穿孔 (参考) 系用于比较 (补充图 1A)。所有系的支原体检测均为阴性。通过基于 SNP 的核型分析和标准 G 带证明了 CRISPRa 克隆 #2 和 #3 以及对照细胞的基因组完整性。未检测到数值或结构异常的证据 (图 1D)。与核转染 (图 1Ei) 和非核转染对照相比，细胞生长和形态正常。与对照 hiPSC 相比，CRISPRa 中的 dCas9 和 tdTomato 表达证实了转基因表达，如 Western blot (补充图 1B，显示克隆 #2 和 #3) 和共聚焦显微镜 (图 1Eii，显示克隆 #2，n = 3 个不同传代) 所示。通过免疫荧光分析干性标记 OCT4 的表达（图 1 Eiii）和流式细胞术分析（显示 94.2% OCT4 和 99.9% TRA1-60 阳性细胞（图 1 Eiv）（显示克隆 #2））来评估多能性。通过在 CRISPRa 和对照系中形成胚状体 (EB) 和定向分化来测试向所有三个胚层的自发分化能力。免疫荧光分析证实了 AFP、β-III-Tu bulin 和 α-平滑肌肌动蛋白 (ACTA2) 的表达，进一步支持内胚层、外胚层和中胚层的命运（图 1 F，显示克隆 #2 和 #3）。转录水平分析表明配对盒 3 ( PAX3 ) 和微管相关蛋白 2 ( MAP2 ) 的表达表明外胚层分化；T-box 转录因子 T ( TBXT ) 表明中胚层命运，而 α-Feto-Protein ( AFP ) 表明内胚层分化（补充图 1 C，显示克隆 #2 和 #3）。我们研究了 CRISPRa 系用于研究通过定向 2D 分化产生的心肌细胞的适用性，这种分化产生了自发跳动的细胞（视频作为补充材料提供），具有强大的 α-辅肌动蛋白 2 (ACTN2) 和心脏肌钙蛋白 T (TNNT2) 心脏标志物表达（（补充图 1D，显示为克隆#2）。最后，我们通过确定与心脏肥大和代谢稳态有关的 KLF15 表达的诱导来测试 CRISPRa 系的功能。我们发现，与转染了非靶向 gRNA 的各自亲本系相比，设计用于结合 KLF15 转录起始位点 (TSS) 的 44 bp 5'-上游序列的单个指导 RNA 能够显着增强 CRISPRa 系（克隆#2 和#3）中 KLF15 的转录。对照细胞没有显示独立于转染的 gRNA 的活化（图 1G）。总之，使用完全表征的 hiPSC 系，我们生成了具有纯合靶向插入、正常核型和多能性的人类 CRISPRa 系，并显示出其激活