CBPCR

Physcomitrium开放CSLD功能分析 div>

由于其小基因组和主要的单倍体生命阶段，Physcomitrium Patens（以前是Physcomitrella Patens）已成为研究植物遗传学的模型生物。这项研究的重点是P.patens的纤维素合酶基因超家族，特别是纤维素合酶样DS（CSLD）基因家族。使用RNA干扰（RNAi）预先形成了对CSLD基因的先前研究，以预先对整个PPCSLD基因家族的功能分析丧失。CSLD基因家族的功能丧失导致抑制质子尖端的生长，表明CSLD基因家族可能调节质子会的形成。使用CRISPR/CAS9转换预先形成了CSLD5和CSLD8基因的CSLD基因在P.patens基因基因敲除（KO）中的功能。在对SG1和SG2切割位点的夏季分析中，对两个不同变换的潜在CSLD5/8双敲除击中了，总共筛选了140个潜在突变体。 使用基于竞争的PCR（CBPCR）预筛选。 当对野生型P. patens进行预知时，CBPCR引物会导致向前内引物产物（约564bps）与向前的外部引物产品（约840bps）的前进，从而可以通过在琼脂糖上运行CBPCR产品来筛选突变体，并通过降低了最终的PCR量，将CBPCR筛选为摩洛群的碱基量，并确定了降级量的降低量。 的80个潜在PPCSLD5/8 T2 KO样品筛选为16/80具有缺失基因型，因此可能是突变体，而其他64个具有WT基因型或没有扩增。，总共筛选了140个潜在突变体。使用基于竞争的PCR（CBPCR）预筛选。当对野生型P. patens进行预知时，CBPCR引物会导致向前内引物产物（约564bps）与向前的外部引物产品（约840bps）的前进，从而可以通过在琼脂糖上运行CBPCR产品来筛选突变体，并通过降低了最终的PCR量，将CBPCR筛选为摩洛群的碱基量，并确定了降级量的降低量。的80个潜在PPCSLD5/8 T2 KO样品筛选为16/80具有缺失基因型，因此可能是突变体，而其他64个具有WT基因型或没有扩增。的60 t1 ppcsld5/8 ko突变体被筛选为5/60具有缺失基因型，而55/60则是WT或无法放大的。