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金属蛋白酶1的组织抑制剂过表达介导三阴性乳腺癌细胞中的化学抗性
摘要：三阴性乳腺癌（TNBC）是最具侵略性的乳腺癌亚型之一。尽管最初对化学疗法有反应，但患者仍会发展耐药和转移性。金属蛋白酶-1（TIMP-1）的组织抑制剂（TIMP-1）是一种分泌的蛋白质，由于其抗蛋白质溶解活性，具有肿瘤抑制功能。尽管如此，证据表明TIMP-1与CD63受体结合，并激活多种癌症中的非规范致癌信号传导，但其在甲培养的TNBC化学耐药性中的作用仍然很大程度上尚未探索。在这里，我们表明间充质样的TNBC细胞表达TIMP-1，其在对顺铂（CIS-PT-R）和阿霉素（DOX-R）产生的细胞中的水平进一步升高。此外，公共数据集分析表明，高TIMP-1水平与接受化学疗法的TNBC预后较差有关。在顺式-PT-R和DOX-R细胞中，TIMP-1敲除了通过抑制AKT激活来逆转其阻力。始终如一，从化学细胞中暴露于重组TIMP-1或富含TIMP-1的培养基的TNBC细胞获得对顺铂和阿霉素的抗性。重要的是，释放的TIMP-1通过与CD63结合而与质膜重新定位，并且在没有CD63表达的情况下，TIMP-1介导的化学抗性被阻断。因此，我们的结果将TIMP-1识别为TNBC化学抗性的新生物标志物，并为评估TIMP-1信号的封锁是否是可行的治疗策略奠定了基础。
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图2。外泌体的生物发生（A）和组成（B）。质膜内吞作用或内部萌芽会导致形成早期分类内体（ESE）。然后，ESE产生晚期分类内体（LSE），并通过LSE中的另一个内陷产生肺内囊泡（ILV）。在ILV积累后，LSE成熟到MVB中。 MVB与质膜的膜融合导致外泌体分泌到细胞外环境中。 MVB与溶酶体或自噬体融合后也可以降解[40，41]。 外泌体可以携带各种类型的生物分子，例如蛋白质，脂质，DNA，RNA和代谢物。 蛋白质，例如CD9，CD63，CD81，氟列蛋白-1和TSG 101，通常被用作外泌体的标记[42，43]。在ILV积累后，LSE成熟到MVB中。MVB与质膜的膜融合导致外泌体分泌到细胞外环境中。 MVB与溶酶体或自噬体融合后也可以降解[40，41]。 外泌体可以携带各种类型的生物分子，例如蛋白质，脂质，DNA，RNA和代谢物。 蛋白质，例如CD9，CD63，CD81，氟列蛋白-1和TSG 101，通常被用作外泌体的标记[42，43]。MVB与质膜的膜融合导致外泌体分泌到细胞外环境中。MVB与溶酶体或自噬体融合后也可以降解[40，41]。外泌体可以携带各种类型的生物分子，例如蛋白质，脂质，DNA，RNA和代谢物。蛋白质，例如CD9，CD63，CD81，氟列蛋白-1和TSG 101，通常被用作外泌体的标记[42，43]。
Piezo1激活增加了治疗性...
图1。使用不同培养方法的EV产生具有不同的特征（A）在2D，3D和MSC的HS培养物的条件培养基中，进行了六个独立实验。bars代表五个独立重复的结果（*** p <0.001，** p <0.01）（b）主成分分析（PCA）的MSCS细胞的蛋白质组学数据和EV从2D，3D和HS中分离的MSC分离的EV，分析了三个独立的样品。（c）Venn图描绘了从2d 3D和HS中从MSC分离的EV中显着表达的蛋白质独特或剪切应力。（d）在2D，3D和HS中从MSC分离的EV中差异表达的剪切应力相关蛋白的数量。（E）在2D，3D和HS中从MSC分离的MSC和EV的细胞裂解物（Cl）中CD63的表达水平。Bars represent results from three independent replicates (* p < 0.05) (F Expression of Piezo1 protein in cell lysate (CL) of MSCs and EVs isolated from MSCs in 2D, 3D and HS Bars represent results from three independent replicates (* p < 0.05) (G) Western blot analysis o tetraspanin EV markers (CD63, CD9, CD81) in 3D and HS cultures, with no群体之间的可观察差异（h）MSC中的压电1和B-肌动蛋白表达的蛋白质印迹分析。
图S8：RAB10定位的确定
要检查RAB10的定位是否在SMAD4损失的设置中发生变化，我们在SW620和HT29的SMAD4中存在或不存在的HT29同源细胞上进行了免疫荧光实验。将带有诱导质粒PSMAD4的SMAD4阴性细胞系HT29和SW620在第0天接种，在第1天用强力霉素处理72H。rab10（＃ab237703 1：400）随后与早期（EEA1，＃BD 610456 1：400）和迟到（CD63，＃AB1318 1：400）共同染色。用Zeiss Axio观察者荧光显微镜拍摄的图片。
多路复用DNA-Paint成像晚期/溶酶体蛋白组成的异质性
晚期内体/溶酶体（LELS）对于许多生理过程至关重要，它们的功能障碍与许多疾病有关。蛋白质组学分析已经鉴定出数百种LEL蛋白，但是，这些蛋白是否均匀地存在于每个LEL上，或者是否存在具有独特蛋白质组成的细胞类型依赖性LEL亚群，尚不清楚。我们采用了定量的多重DNA-油漆超分辨率方法来检查单个LELS上六种关键LEL蛋白（Lamp1，Lamp2，CD63，TMEM192，NPC1和LAMTOR4）的分布。虽然LAMP1和LAMP2在LEL中含量丰富，但标志着公共种群，大多数分析的蛋白质与特定的LEL亚群有关。我们的多重成像方法基于其独特的膜蛋白组成，最多鉴定出多达八个不同的LEL亚群。此外，我们对这些亚群和线粒体之间的空间关系的分析表明，NPC1阳性LELS的细胞类型特异性趋势与线粒体紧密地位。我们的方法将广泛适用于在许多生物学环境中用单细胞器分辨率来确定细胞器异质性。
过敏反应中细胞外囊泡的蛋白质组织及其在血管通透性中的作用
fi g u r e 1表征，蛋白质组学分析以及对ANEV和BEV的差分分析。（a）来自代表性循环BEV和ANEV的透射电子显微镜图像。比例尺：200 nm。图像描绘了来自两个样本的代表性电动汽车。（b）通过NTA分析了每个实验条件的七种不同的EV制剂。代表性的NTA直方图显示BEV和ANEVS的平均粒径为200 nm。（c）Anevs的特征是Western blot。面板显示三名代表性患者的免疫印迹。真正的EV标记，例如CD63，TSG101，Syntenin-1和CD9。（d）通过基于质谱的定量蛋白质组学获得的蛮数据的维恩图代表了BEV和ANEVS中检测到的蛋白质之间的相交。（e）火山图显示了所有鉴定的蛋白质。在ANEVS（右侧）和BEVS（左侧）中的统计学上显着差异（p> .05）以蓝色出现。访问数字（uniprot）显示了感兴趣的蛋白质（cdc42，ficolin-2，s100a9）。主成分分析（F）和血浆衍生EV的无监督分层聚类（G）
鉴定多能胚胎干细胞生物学的钥匙细胞 - 细胞相互作用
上下文细胞间交流对于多细胞生物的发展和维护至关重要。最近的研究强调了哺乳动物胚胎中胚外细胞（滋养剂和低纤维细胞）和多能胚胎细胞（epiblast）之间通信的重要性[1,2,3]。具体而言，由小细胞产生的细胞外基质在控制多脂蛋白层状干细胞的细胞增殖中起关键作用。我们对猪胚胎干细胞的研究已经证实了细胞外基质在影响调节层细胞多能性的信号通路和转录因子中的重要性[4]。我们最原始的观察结果之一依赖于四叠蛋白CD9，CD81和CD63表达的检测主要是在滋养剂中（未发表）。这些四翼烷蛋白是细胞外囊泡（EV）的已知标记，它们是各种细胞类型的小脂质囊泡[5]。evs参与将信号蛋白，细胞因子和转录因子转运到受体细胞，影响各种过程，包括免疫反应，肿瘤进展和胚胎发育[6,7]。尽管已经在小鼠胚胎中研究了胚胎和胚外细胞之间的EV介导的细胞对细胞通信，但焦点主要是由小鼠多能干细胞分泌的电动汽车[8,9]。这项研究旨在研究EVS在促进交流和影响这些细胞类型的生物学的促进性滋养剂细胞和多能细胞分泌的电动汽车的作用。这项研究由ANR STEM4PIGS（2025-2028）资助，并将支持从2025年9月开始的博士生。