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无CIRSPR基因组编辑时代的曙光
在1953年，沃森（Watson）和克里克（Crick）阐明了DNA的结构（双螺旋），并了解了如何保留遗传信息以及如何从该信息蛋白中产生遗传信息。从那以后，研究进展了，兴趣转移到了生物体（尤其是人类基因组）基因组的解码。2003年人类基因组解码的完成提出了预期，即根据需要对遗传信息（基因）进行编辑，并用于研究活动，例如研究疾病的原因和阐明生命现象。是对所有人类遗传信息的澄清，这导致了有用的研究结果。例如，由于遗传异常而导致的疾病如何发展，哪些基因对于维持重要活性及其功能至关重要。最初，以确切形式更改遗传信息是困难，昂贵且辛苦的，但是在2012年，“在自适应细菌免疫中的可编程双RNA引导的DNA核酸酶” 11本在《科学在线》上发表了11”，在Online上发表了11条，揭示了一种可以通过简单方法操纵遗传信息的技术。这是基因组编辑技术CRISPR-CAS9。
Emilie Narri -Mancinelli，PhD，CR1，Inmermer -Ciml dimp3
她以博士后研究员的身份搬到了马赛的Luminy免疫学中心，并加入了Vivier教授的团队，在那里她开发了NKP46ICRE/+小鼠模型，该模型可以在NKP46+细胞中专门删除基因。她还表征了NK细胞在适应性免疫中的调节作用。在过去的10年中，她领导了一组，该组发现了一种新型的配体，用于由NK细胞表达的天然细胞毒性受体NKP46，并证明了其在控制侵入性细菌感染中的作用。她随后致力于在稳态和癌症中从组织和血液中NK细胞的转录组分析。近年来，她的小组参与了旨在发现调节NK细胞肿瘤细胞识别和杀死的分子机制的泛基因组CIRSPR筛选的发展。
在Witloof（cichorium intybusvar。Floiosum）中建立CRISPR/CAS9基因组编辑
cichorium intybus var。叶子（witloof）是一种经济上重要的作物，由于许多专门的代谢产物，例如多酚和萜类化合物，其营养价值很高。然而，Witloof植物富含倍半萜烯内酯（SL），这对于植物防御很重要，但也具有苦味的味道，从而限制了工业应用。SL生物合成途径中的特定基因灭活可能会导致SL代谢物含量的变化，并导致苦味改变。在这项研究中，从witloof实施了CRISPR/CAS9基因组编辑工作流量，从聚乙烯乙二醇（PEG）介导的原生质体转染开始，用于CRISPR/CAS9载体递送，然后进行全植物再生和突变分析。原生质体转染效率范围为20％至26％。将靶向植物去饱和酶（CIPDS）基因的第一个外显子的CRISPR/CAS9载体转染到witloof protoplasts中，并导致了CIPDS敲除，从而在23％的再生植物中引起了白化表型。进一步实施我们的方案，SL生物合成途径基因生物氨基烯A合酶（GES），生殖A氧化酶（GAO）和Costunolide合酶（COS）在独立实验中靶向。在基因组靶点基因座的高度多重（Hiplex）扩增子测序中揭示了用CIRSPR/CAS9载体靶向CIGA，CIGAO和CICOS转染的再生植物中的植物突变频率为27.3、42.7和98.3％。这些结果证明了基于转染和witloof protoplasts的再生和随后的Hiplex扩增子测序的基因组编辑的直接工作流。我们观察到整个基因座的不同突变光谱，范围从独立的突变线跨CICOS中的相同 + 1个核苷酸插入到跨独立突变线的CIGAO中的20种突变类型的复杂集。我们的CRISPR/CAS9工作流可以使基因功能研究和更快地纳入精英Witloof系列中，从而促进了Witloof的新型工业应用的发展。