亚培养从粘附细胞中去除旧培养基,并用无钙和镁的PBS洗涤它们。使用3-5毫升PBS进行T25瓶,T75瓶子使用5-10毫升。然后用电池完全覆盖电池,用1-2 mL盖住T25瓶,T75瓶的2.5毫升。让细胞在室温下产生8-10分钟,以松开它们。孵育后,将细胞与10 ml培养基仔细混合,以重悬于它们,然后以300xg离心3分钟。扔掉上清液,将细胞重悬于新鲜培养基中,然后将其转移到已经包含新鲜培养基的新瓶中。
由于其NUP96-MEGFP合并蛋白的表达稳定,并保持U-2 OS系列的典型特性,包括在与癌细胞迁移和转移有关的研究中至关重要的稳健细胞骨架结构,因此选择了该特定克隆的数字195。使用CRISPR技术可确保精确的基因编辑,从而最大程度地减少了可以削弱实验结果完整性的外观作用。这确实会做U-2 OS-CRISPR-NUP96-MEGFP KLON No.195对于高分辨率成像技术和细胞结构的详细研究特别有用,这有助于细胞生物学,癌症研究和核转运现象的高级研究。
该工具在Tulane开发的工具与大学卫生网络/多伦多大学,肺炎儿童健康研究(PERCH)研究的样品进行了测试,以及国际Mycose预防,研究,研究,实施,网络和培训(Imprint)联盟(Impint)。
废水包含许多不同的ARG与来自人类,病毒和细菌在内的各种来源的遗传物质混合在一起。因为ARG仅占总DNA含量的很小比例,因此在废水样品中发现它们需要敏感的检测方法。最常见的技术是定量聚合酶链反应(QPCR)。此方法使用称为引物的RNA指南来识别已知ARG的特定DNA序列,然后将其放大以进行检测。
亚培养从粘附细胞中去除旧培养基,并用无钙和镁的PBS洗涤它们。使用3-5 mL PBS进行T25烧瓶,T75烧瓶使用5-10 mL。然后用ACCUTASE完全疲倦,T25 Colber用1-2 mL和T75烧瓶的2.5 mL静止。让细胞在室温下孵育8-10分钟以松开它们。孵育后,将细胞与10 ml培养基轻轻混合以使其恢复它们,然后以300xg离心3分钟。丢弃上清液,将细胞重悬于新培养基中,然后将其转移到已经包含新培养基的新瓶中。
亚培养消除了粘附细胞的古老介质,并用缺乏钙和镁的PBS洗涤它们。 div>对于T25烧瓶,使用3-5毫升PBS,对于T75烧瓶,使用5-10毫升。 div>然后用1-2 mL对T25和2.5 mL烧瓶进行T75烧瓶的作用覆盖细胞。 div>让细胞在室温下孵育8-10分钟以释放它们。 div>孵化后,将细胞与10 ml培养基轻轻混合,以重悬于它们,然后离心至300xg 300倍。 div>丢弃上清液,将细胞重悬于凉爽的介质中,然后将其转移到已经包含新鲜手段的新瓶中。 div>
亚培养物从粘附细胞中去除旧培养基,并用不含钙和镁的PBS洗涤它们。将T25活塞3-5毫升PBS和T75活塞使用5-10毫升。然后将细胞完全用ACCUTASE覆盖,其中T25活塞的1-2 mL和T75活塞的2.5 mL。让细胞在室温下孵育8-10分钟以更换它们。孵育后,将细胞与10 ml培养基仔细混合以使它们共振,然后以300xg离心3分钟。丢弃上清液,在新鲜培养基中产生共鸣,并将其转换为已经包含新鲜培养基的新活塞。
I.简介香蕉(Musa spp。)是全球消耗量最多的水果之一,对数百万人的饮食产生了重大贡献,尤其是在热带和亚热带地区。在生产和消费方面,他们在全球五大主食中都排名榜首。根据粮食和农业组织(FAO),全球香蕉的产量在2022年达到了约1.53亿吨,其中包括印度,中国,菲律宾和厄瓜多尔在内的主要生产商。香蕉营养丰富,甚至可以携带美国医学协会在20世纪初期认可的第一个“超级食品”的头衔,作为儿童的健康食品和腹腔疾病的治疗方法。一份或一种中等成熟的香蕉,可提供约110卡路里的卡路里,0-克脂肪,1克蛋白,28克碳水化合物,15克糖(天然发生),3克纤维和450 mg钾。除了饮食重要性外,香蕉还为许多国家(尤其是拉丁美洲,非洲和亚洲的经济体)做出了重大贡献。例如,在厄瓜多尔,香蕉是主要出口商品之一,约占该国农业出口收入的30%(粮农组织,2022年)。同样,印度是最大的香蕉生产国,依靠农作物来用于国内消费,也是小农户的生计来源。香蕉的社会和经济相关性强调了改善香蕉生产和收获后管理以最大程度地减少损失的必要性。
许多炎症关节疾病与CD10蛋白的表达相关,CD10蛋白在炎症和疼痛传播信号中起很大作用。这种促炎性机制是人类肌肉骨骼组织中各种关节的关节软骨降解的主要指标。CD10在间充质干细胞(MSC)中的表达与其免疫调节和软骨保护作用直接相关。因此,该项目着重于开发基于适应性的生物传感器,该生物传感器将检测CD10表达而不会扰动样品。适体是一个小的单链核酸分子,可以折叠成独特的结构,从而使它们能够高特异性与各种分子蛋白靶标结合。这使他们能够检测出大量的高和低丰度分子。该项目的第一步是使用称为SELEX(指数富集对配体的系统演变)的过程为CD10开发高亲和力适体。我们从一个初始的单链RNA库开始,该库包含大约10 14个不同的序列。将RNA文库与溶液中的CD10蛋白一起孵育。然后使用硝酸纤维素滤光片将蛋白-RNA复合物与未经膜的RNA分离。然后,在对RNA进行逆转录和PCR之前,我们将蛋白质与RNA分开。第一轮之后的最终产物包含与CD10蛋白结合的ssRNA分子。我已经完成了2轮SELEX,并有令人鼓舞的结果。此过程将重复大约10次,使我们能够识别与CD10高亲和力结合的RNA适体。这是开发适体CRISPR传感器的关键步骤,因为某些样品的CD10表达较低。