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World File Search SystemCRISPR
产品表BuňkyHK-Crispr-CAP-H2-MEGFP | 301569
亚培养从Adher细胞中去除旧培养基，并在没有钙和镁的情况下洗净PBS。用于T25烧瓶使用3-5 ml PBS和T75 5-10 ml烧瓶。然后，使用1-2 mL对T25和2.5 mL烧瓶完全覆盖细胞，用于T75烧瓶。让细胞在室温下孵育8-10分钟以分开。孵育后，将细胞与10 ml培养基再次悬浮，然后在300xg洒3分钟。丢弃上清液，将细胞溶解在新鲜培养基中，然后将其转移到已经包含新培养基的新瓶中。
cRISPR靶向H3K4ME3激活基因表达并解锁拟南芥中的丝粒跨界重组
。cc-by-nc-nd 4.0国际许可证。根据作者/资助者提供了预印本（未经同行评审的认证）提供的，他已授予Biorxiv的许可证，以在2025年2月8日发布的此版本中在版权所有者中显示预印本。 https://doi.org/10.1101/2025.02.07.636860 doi：Biorxiv Preprint
CRISPR-CAS9编辑和转录组的联合单细胞分析揭示了广泛的脱靶事件及其对基因表达的影响
具有CRISPR-CAS9的基因组工程中的长期障碍一直无法衡量Cas9编辑结果及其在单细胞分辨率下的功能效应。在这里，我们提出了Superb-Seq，这是一种利用T7原位转录和单细胞RNA测序的新技术，以共同测量靶向靶标Cas9编辑及其对基因表达的影响。我们在10,000 k562细胞上进行了高级seq，靶向了四个用七个引导RNA的染色质重塑基因。Superb-Seq在所有七个目标站点和其他36个非目标位点上确定了11,891个编辑事件。尽管选择了七个指南的高特异性，但其中有六个导致靶向脱靶编辑，频率从0.03％到18.6％的细胞范围不等。在USP9X的第一个内含子中，明显的脱靶编辑破坏了该基因的表达和超过150个下游基因。总而言之，由于罕见和常见的编辑事件的结合，CAS9非目标是普遍存在的，主要发生在靶向基因的内含子内，并且可以对基因表达产生广泛的影响。Superb-Seq使用现成的套件，标准设备，并且不需要病毒，这将使全基因组CRISPR屏幕能够在不同的细胞类型中以及与临床相关的指南的功能表征。
精确牙科：口腔健康中的CRISPR
随着技术革命的发展，精密医学已成为当前的可能实体。基因组编辑是一种基因工程工具，为医疗保健中的诊断和治疗学增添了新的维度。在基因组编辑工具中，CRISPR（群集定期间隔短篇小说重复序列）的效率，多功能性和精度都脱颖而出。crispr是指一个遗传剪刀，可以准确地精确编辑DNA的特定部分，并包括三个步骤：识别，编辑和修复。CRISPR在医学中看到了从治疗遗传和传染病到癌症治疗的各种应用。在牙科中，CRISPR技术处于初始阶段，并且在牙周炎，龋齿，头颈癌，正畸，颅面缺陷和病毒感染方面已经显示出潜力。crispr提供个性化的牙周护理，抑制生物膜形成，以防止龋齿，通过靶向负责的基因，提供有关颅面畸形病学的遗传信息，并有助于理解病毒感染和靶向疗法。这种自定义的精确方法为改善治疗结果开辟了新的途径。CRISPR技术并没有缺乏挑战，它具有道德挑战，免疫原性和脱离目标效果，但是，如果谨慎实施，它将作为一种未来的诊断和治疗方法，将其作为一种前景。
精确牙科：口腔健康中的CRISPR
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精确牙科：口腔健康中的CRISPR
随着技术革命的发展，精密医学已成为当前的可能实体。基因组编辑是一种基因工程工具，为医疗保健中的诊断和治疗学增添了新的维度。在基因组编辑工具中，CRISPR（群集定期间隔短篇小说重复序列）的效率，多功能性和精度都脱颖而出。crispr是指一个遗传剪刀，可以准确地精确编辑DNA的特定部分，并包括三个步骤：识别，编辑和修复。CRISPR在医学中看到了从治疗遗传和传染病到癌症治疗的各种应用。在牙科中，CRISPR技术处于初始阶段，并且在牙周炎，龋齿，头颈癌，正畸，颅面缺陷和病毒感染方面已经显示出潜力。crispr提供个性化的牙周护理，抑制生物膜形成，以防止龋齿，通过靶向负责的基因，提供有关颅面畸形病学的遗传信息，并有助于理解病毒感染和靶向疗法。这种自定义的精确方法为改善治疗结果开辟了新的途径。CRISPR技术并没有缺乏挑战，它具有道德挑战，免疫原性和脱离目标效果，但是，如果谨慎实施，它将作为一种未来的诊断和治疗方法，将其作为一种前景。
CRISPRSCORE：CRISPR grnas
getAziMuthScores。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。2 getCasrxrfScores。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。3 GetCfdsCores。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。5 GetCrispraiscores。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。6 getCrispraterscores。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。7 GetCrisprScanscors。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。8 GetDeepCPF1Scores。 。 。 。 。 。 。 。8 GetDeepCPF1Scores。。。。。。。。。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>9 GetDeepShoscores。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>10 GetDeepCas9Scores。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>11 GetThpamgScores。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。12 GetLindelsCores。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。13 GetMitscores。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。14 getRuleset1scores。。。。。。。。。。。。。。。。。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>15个DatulseT3Scores。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>16得分Mehodingfo。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>17 sgraxamplcrispra。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。。。。。。。。。。。。。。。18 sgrnaexamplecrispri。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。18 tssexamplecrispra。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。19 tssexamplecrispri。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。19
CRISPR/CAS9基于杂交瘤细胞中免疫球蛋白基因座的工程。加尔，C.M。 le; F.L. Fennemann； Schoot，J.M.S。 van der; Scheeren，F.A。； Verdo
Köhler和Milstein（1975）对杂交瘤技术的开发通过在研究和开发工作中的常规使用单克隆抗体（MAB）来彻底改变了免疫学领域，从而导致了他们今天在诊所的成功应用。 尽管需要重组良好的制造实践生产技术来生产临床级别的mAB，但学术实验室和生物技术公司仍然依靠原始的杂交瘤系列来稳定而轻松地以适度的价格生产高抗体产量。 在我们自己的工作中，我们在使用杂交瘤衍生的mAB时面临着一个主要问题：无法控制产生的抗体形式，这是重组产生确实允许的灵活性。 我们着手通过直接在杂交瘤细胞的免疫球蛋白（IG）基因座中的基因工程抗体来消除这一障碍。 我们使用了簇状的定期间隔短的短膜重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白9（CAS9）和同源指导修复（HDR）来修改抗体的格式[mAb或抗原结合片段（FAB'）]和同型。 本协议在几乎没有动手的时间内描述了一种直接的方法，导致稳定的细胞系分泌高水平的工程抗体。 亲本杂交瘤细胞保持在培养中，并用针对IG基因座感兴趣的指导RNA（GRNA）转染了IG基因座和HDR模板，以敲击所需的插入物和抗生素耐药性基因。 通过施加抗生素压力，在遗传和蛋白质水平上扩展并表征抗性克隆，以产生改良的mAb而不是亲本蛋白。Köhler和Milstein（1975）对杂交瘤技术的开发通过在研究和开发工作中的常规使用单克隆抗体（MAB）来彻底改变了免疫学领域，从而导致了他们今天在诊所的成功应用。尽管需要重组良好的制造实践生产技术来生产临床级别的mAB，但学术实验室和生物技术公司仍然依靠原始的杂交瘤系列来稳定而轻松地以适度的价格生产高抗体产量。在我们自己的工作中，我们在使用杂交瘤衍生的mAB时面临着一个主要问题：无法控制产生的抗体形式，这是重组产生确实允许的灵活性。我们着手通过直接在杂交瘤细胞的免疫球蛋白（IG）基因座中的基因工程抗体来消除这一障碍。我们使用了簇状的定期间隔短的短膜重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白9（CAS9）和同源指导修复（HDR）来修改抗体的格式[mAb或抗原结合片段（FAB'）]和同型。本协议在几乎没有动手的时间内描述了一种直接的方法，导致稳定的细胞系分泌高水平的工程抗体。亲本杂交瘤细胞保持在培养中，并用针对IG基因座感兴趣的指导RNA（GRNA）转染了IG基因座和HDR模板，以敲击所需的插入物和抗生素耐药性基因。通过施加抗生素压力，在遗传和蛋白质水平上扩展并表征抗性克隆，以产生改良的mAb而不是亲本蛋白。最后，修饰的抗体在功能测定中的表征。To demonstrate the versatility of our strategy, we illustrate this protocol with examples where we have (i) exchanged the constant heavy region of the antibody, creating chimeric mAb of a novel isotype, (ii) truncated the antibody to create an antigenic peptide-fused Fab' fragment to produce a dendritic cell–targeted vaccine, and (iii) modified both the constant heavy (CH)1 domain of the heavy chain （HC）和恒定的Kappa（Cκ）轻链（LC）引入位点选择性修饰标签，以进一步衍生纯化的蛋白质。仅需要标准的实验室设备，这有助于其在各种实验室中的应用。我们希望该协议能够进一步传播我们的技术并帮助其他研究人员。
通过计算设计的聚合物纳米颗粒（PNP）递送质粒DNA
（未通过同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版的版权持有人于2025年2月23日发布。 https://doi.org/10.1101/2025.02.22.639634 doi：Biorxiv Preprint
CRISPR-CAS9编辑和转录组的联合单细胞分析揭示了广泛的脱靶事件及其对基因表达的影响
具有CRISPR-CAS9的基因组工程中的长期障碍一直无法衡量Cas9编辑结果及其在单细胞分辨率下的功能效应。在这里，我们提出了Superb-Seq，这是一种利用T7原位转录和单细胞RNA测序的新技术，以共同测量靶向靶标Cas9编辑及其对基因表达的影响。我们在10,000 k562细胞上进行了高级seq，靶向了四个用七个引导RNA的染色质重塑基因。Superb-Seq在所有七个目标站点和其他36个非目标位点上确定了11,891个编辑事件。尽管选择了七个指南的高特异性，但其中有六个导致靶向脱靶编辑，频率从0.03％到18.6％的细胞范围不等。在USP9X的第一个内含子中，明显的脱靶编辑破坏了该基因的表达和超过150个下游基因。总而言之，由于罕见和常见的编辑事件的结合，CAS9非目标是普遍存在的，主要发生在靶向基因的内含子内，并且可以对基因表达产生广泛的影响。Superb-Seq使用现成的套件，标准设备，并且不需要病毒，这将使全基因组CRISPR屏幕能够在不同的细胞类型中以及与临床相关的指南的功能表征。