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农杆菌介导的多重 CRISPR/...
摘要：在巴基斯坦，棉花作物占国内生产总值的 23%，其大量出口为贸易业务提供了 60% 的总利润。不幸的是，双子病毒以惊人的速度摧毁了棉花作物。现在，CLCuV 导致棉花作物发生棉花卷叶病毒病并降低其产量。这种病毒对棉花植物的攻击给巴基斯坦造成了 50 亿美元的损失。在这方面，使用了一些传统方法，如植物育种和特定的 RNA 编辑。同时，生物技术引入了一些非常有吸引力的技术，这些技术具有根除这种疾病的巨大潜力。这些技术包括 ZFN、TALEN 和 CRISPR/Cas9。在我的研究中，采用 CRISPR 方法是因为其具有出色的位点特异性诱变效率。不同 CLCuV 的 rep 基因的保守位置被确定为靶位点。这些特定位点为 3 个 gRNA 的建立提供了信息。克隆了具有多个引导RNA和1Cas9的单一表达载体pHSE-401。使用了特定的棉花品种coker-312。通过切除棉花植株的下胚轴并通过农杆菌EHA-105菌株进行传递感染来进行载体的转化。然后，将1000个感染性下胚轴转移到具有各自抗生素的MSB上，然后转移到将下胚轴边缘转化为愈伤组织的再生培养基上。仅获得两个转基因愈伤组织，转基因愈伤组织的百分比为0.02％，通过PCR筛选并在凝胶上进行电泳。200bp的条带证实了棉花愈伤组织中存在CRISPR/Cas9构建体。关键词：CRISPR/Cas9，多重载体，3gRNA和Cas9，农杆菌，转化，愈伤组织。版权所有 © 2020 作者：这是一篇开放获取的文章，根据知识共享署名 4.0 国际许可（CC BY-NC 4.0）分发，允许在任何媒体中无限制地使用、分发和复制，用于非商业用途，前提是注明原作者和出处。 1. 引言 巴基斯坦的经济主要依靠农业部门。其在 GDP 中的百分比为 19.82%，但农业部门的参与度从 1950 年的 50% 下降到 2014 年的 21% 左右。农产品、林业劳动力、牲畜养殖和农作物转化所赚取的收入养活了巴基斯坦 64% 的乡村人口。据统计，66% 的巴基斯坦人在农业部门就业。在 20 世纪的十年里，农产品的年增长率为 2.5%。在 1997 年的农业一揽子计划中，农作物产量增长了 5.9%。为了提高农业生产力，年产量从 2010 年的 0.2% 增加到 2015 年的 2.9%（匿名，2014-2015 年）。
布巴内斯瓦尔·普拉丹 (Bhubaneswar Pradhan) 博士
1. Chandrasekhar, K.、Pradhan, B.、Roychowdhury, R.、Dubey, VK 2021. 通过基因操作改良小麦（Triticum spp.）；在：转基因作物的现状、前景和挑战，由 Kishor, PB Kavi, Rajam, MV、Pullaiah, T. 编辑。Springer Singapore（已接受出版），ISBN 978-981-15-5897-9_3。https://doi.org/10.1007/978-981-15-5897-9_3 2. Chakraborty, K.、Mondal, S.、Ray, S.、Samal, P.、Pradhan, B.、Chattopadhyay, K.、Kar, MK、Swain, P.、Sarkar, RK 2020。组织耐受性与离子鉴别相结合可以最大程度地降低水稻耐盐性的能量成本。植物科学前沿：11。265 https://www.frontiersin.org/article/10.3389/fpls.2020.00265。3. Pradhan, B., Chakraborty, K., Prusty, N., Deepa, Mukherjee, A., Chattopadhyaya, K., Sarkar, RK 2019。高分辨率叶绿素荧光成像系统证明了耐盐和部分淹没复合胁迫的水稻基因型的区分和表征。功能植物生物学：46 (3), 248-261。https://doi.org/10.1071/FP18157。 4. Pradhan, B., Jangid, K., Sarwat, M., Bishi, SK 2019 . 组蛋白在叶片衰老过程中的作用：在：植物衰老信号传导，作者：Sarwat M 和 Tuteja N. Academic Press，第 187-197 页，ISBN 9780128131879。https://doi.org/10.1016/B978-0-12-813187-9.00011-1。5. Prusty, N # ., Pradhan, B # ., Deepa., Chattopadhyaya, K., Patra, BC, Sarkar, RK 2018 . 耐洪水和盐分胁迫综合影响的新型水稻（Oryza sativa L.）种质。印度植物遗传资源杂志：31 (3), 260-269。（# 共同第一作者，同等贡献）。6. Vijayan, J.、Senapati, S.、Ray, S.、Chakraborty, K.、Molla, KA、Basak, N.、Pradhan, B.、Yeasmin, L.、Chattopadhyay, K. 和 Sarkar, RK 2018。转录组学和生理学研究确定了水稻发芽阶段耐受缺氧的线索。环境与实验植物学：147，234-248。doi.org/10.1016/j.envexpbot.2017.12.013。7. Pradhan, B.、Tien VV、Dey, N.、Mukherjee, SK 2017。双生病毒 DNA 复制的分子生物学：病毒复制中。 Avidscience 出版物。第 2-34 页。http://www.avidscience.com/book/viral-replication/。8. Pradhan, B.、Naqvi, AR、Saraf, S.、Mukherjee, SK、Dey, N. 2015 年。番茄卷叶新德里病毒 (ToLCNDV) 反应性新型微小 RNA 在番茄中的预测和表征。病毒研究。195，183-195。doi：10.1016/j.virusres.2014.09.001。
声音与“音乐和思想”连接起来Nina Kraus
我发现自己越来越多地思考联系。人们告诉我，他们很难建立和保持联系。甚至在大流行使我们内向的情况下，与人的身体联系正在减弱。当您可以在社交媒体上跟上他们的工作时，为什么会与朋友见面？当您可以用Xbox卷曲并通过耳机谈谈垃圾时，为什么要在拐角法院拍摄篮球？然而抑郁和疏远正在上升。在他的书失去联系中，约翰·哈里（Johann Hari）告诉我们，抑郁症的增加超出了诊断1的简单增加。他将抑郁症的上升归因于与他人的联系下降。在某些情况下，药物会有所帮助。但是，药物不会治疗孤独感。它不会治疗越来越普遍的归属感。传统的归属方式（例如宗教和教会成员）与看到您并重视您的人以及您，以及您又看到和重视的人的联系。他们将您的生活和未来定位为有意义的部分的一部分。但是，这种归属和联系不仅是宗教，而且是保龄球团队或驼鹿洛奇的成员资格，都在消失。儿童随着年龄的生活而倾向于分散。长期的代际社区很少见。当您小时候没有人（包括您的兄弟姐妹）仍然住在那里的地方，您长大的地方的概念就没有什么意义。关系可能比社交媒体联系人，我们遵循的Twitter帐户或我们的Facebook喜欢的重要性变得不那么重要。越来越普遍的是与您不认识的人，例如对名人，运动员或政治家的亲和力。那么，我们如何 - 在这个较不连接的时刻建立连接？无论是亲自或通过电话，缩放还是Skype，我发现声音是我建立和保持连接的根源。在我的声音书中，我将声音的思想定义为从一生中发出声音的经历演变而来的大脑。健全的思想是巨大的 - 与我们每个感官的神经系统相互联系：运动系统，边缘（情感）系统和认知（记忆，注意）系统。我表明，健全的思想会影响我们的感受，感受，移动和思考的影响。声音连接我们。它是连续的，综合的，并且具有范围。它塑造了我们的身份以及我们如何与世界建立联系。我们感到脱节是因为我们已经摆脱了声音根源。声音是由以视觉为中心的社会力量来种植的。细微的聆听会因噪音的增加而阻碍。然而，在健全的思想中体现的深度神经相互联系给了我希望。听力不是一个孤立的感官过程，也是解释感官世界的齿轮，而是我们每个部分的主要参与者。当世界崩溃时，声音就可以联系起来。声音是培养我们想要的社区感的一个关键。
动态热身练习 - MyNavyHR
1. 胸肌飞鸟和过顶平举：肘部弯曲至 90 度，将肘部抬高至肩部高度，然后向后移动，使其与身体成一线（手臂应看起来像球门柱）。这是您的起始姿势。像做胸肌飞鸟一样将肘部并拢。当肘部/拳头接触（身体中线）时，轻轻将双臂举过头顶。反向练习以回到起始姿势。（目的：此练习用于热身胸部肌肉，并在做过顶动作时增加手臂的活动范围。解释大多数举重运动员的胸部和肱三头肌运动为何紧张，这也是在举重室进行的一项很好的练习。它还将为俯卧撑做好胸部和手臂的准备。）2. 胸部推举/肩部推举：模拟您在身体前方的空中做俯卧撑。回到起始姿势后，继续做过顶肩部推举。确保在肩部推举过程中使用窄手位并保持肘部内收，以确保您锻炼到肱三头肌（后臂）。（目的：此练习用于为俯卧撑和过顶动作（如军事推举）做好准备。确保学生了解肘部必须保持内收。CFL 经常会伸出肘部，用双手的拇指和食指形成三角形。如果他们这样做，他们就不会锻炼到肱三头肌。）3. 小腿提举和颈部旋转：进行站立式小腿提举并旋转头部以查看右肩。向右重复 10 次，然后换位并向左重复 10 次（查看左肩）。 （目的：这项练习用于热身小腿，并提供颈部活动范围。不要让学生将脖子从一侧转到另一侧，否则他们会头晕。他们应该向一侧做 5 次，向另一侧做 5 次）。 4. 脚尖向前轻点：双脚分开与肩同宽站立。逐渐抬起左膝，向外旋转臀部，这样你就可以用右手轻点左脚内侧（你的下半身应该处于“4 字形”位置）。用左手触摸左脚内侧，重复此动作至另一侧。继续左右交替进行此练习。 （目的：这项练习将用于增加臀部的运动范围（尤其是髋部屈曲和外旋）。一定要告诉学生，大多数水手的臀部都很紧，尤其是跑步者，这将提高表现。如果你不这么说，这项练习对他们来说似乎没有效果。）脚尖向后轻拍：双脚分开与肩同宽站立。逐渐将左脚抬到身后（像腿筋弯举一样），用右手轻拍脚。用左手和右脚重复另一侧的动作。（目的：这项练习用于热身腿筋，同时增加股四头肌的活动范围。）5. 向侧面/前方拉线：双脚稍微向外伸开，与肩同宽，半蹲。保持下蹲姿势很重要，这样在练习过程中才能锻炼腿部肌肉。模拟从船上拉线（重复“拔河”动作），重复 4 次，重复一定次数。从左侧、前方和右侧改变位置。（目的：这项练习模拟了水手需要学习的重要技术，尤其是舰队水手。用线
教学大纲
机械工程工程数学线性代数：矩阵代数，线性方程系统，特征值和特征向量。微积分：单个变量，极限，连续性和不同性，平均值定理，不确定形式的功能；评估确定和不当积分；双重和三个积分；部分衍生物，总导数，泰勒序列（一个和两个变量），最大值和最小值，傅立叶序列；梯度，差异和卷曲，矢量身份，方向衍生物，线，表面和体积积分，高斯的应用，Stokes和Green定理。微分方程：一阶方程（线性和非线性）；具有恒定系数的高阶线性微分方程； Euler-Cauchy方程；初始和边界价值问题；拉普拉斯转变；热，波和拉普拉斯方程的解决方案。复杂变量：分析函数； Cauchy-Riemann方程；库奇的整体定理和整体公式；泰勒和洛朗系列。概率和统计：概率的定义，采样定理，条件概率；卑鄙，中位数，模式和标准偏差；随机变量，二项式，泊松和正常分布。数值方法：线性和非线性代数方程的数值解；通过梯形和辛普森的规则进行集成；微分方程的单步和多步法。应用力学和设计工程机制：自由图和平衡；摩擦及其应用，包括滚动摩擦，Belt-Pulley，刹车，离合器，螺丝千斤顶，楔子，车辆等。;桁架和框架；虚拟工作；平面运动中刚体的运动学和动力学；冲动和动量（线性和角度）以及能量配方；拉格朗日方程。材料力学：应力和应变，弹性常数，泊松比； Mohr的圆圈，用于平面应力和平面应变；薄缸；剪切力和弯矩图；弯曲和剪切应力；剪切中心的概念；梁的挠度；圆形轴的扭转；欧拉的专栏理论；能量方法；热应力；应变仪和玫瑰花结；通过通用测试机对材料进行测试；测试硬度和影响力。机器理论：平面机制的位移，速度和加速度分析；链接的动态分析；凸轮；齿轮和齿轮火车；飞轮和州长；往复和旋转质量的平衡；陀螺仪。振动：单个自由系统的自由和强迫振动，阻尼的效果；振动隔离；谐振;轴的关键速度。机器设计：用于静态和动态加载的设计；失败理论；疲劳强度和S-N图；机器元素的设计原理，例如螺栓，铆接和焊接接头；轴，齿轮，滚动和滑动接触轴承，刹车和离合器，弹簧。流体力学和热科学流体力学：流体特性；流体静态，淹没物体的力，浮动物体的稳定性；质量，动量和能量的控制体积分析；流体加速度；连续性和动量的微分方程；伯努利方程；维度分析；不可压缩的流体，边界层，基本湍流，流过管道，管道损失，弯曲和配件的粘性流动；可压缩流体流量的基础。传热：传热模式；一维热传导，抗性概念和电类比喻，通过鳍的传热；不稳定的热传导，集总参数系统，Heisler的图表；热边界层，自由和强制对流传热中的无量纲参数，扁平板上流动和通过管道的传热相关性，湍流的影响；热交换器性能，LMTD和NTU方法；辐射传热，Stefanboltzmann定律，WIEN的位移定律，黑色和灰色表面，视图因素，辐射网络分析热力学：热力学系统和过程；纯物质的特性，理想和真实气体的行为；零和热力学的第一定律，在各种过程中的工作和热量计算；热力学的第二定律；热力学特性图表和表，可用性和不可逆性；热力学关系。
实体编号业务名称地址线路1地址线2城市邮政编码594268 CADDY，LLC C/O Corporation Servive Company PA 3725828
实体编号商务名称地址线1地址线2城市州邮政编码594268 CADDY，LLC C/O公司服务公司PA 3725828烹饪菜肴公司6155 Putter Drive Wescosville wescosville wescosville wescosville PA 18106 2869900 Culinary Edge。 212蝗虫法院哈里斯堡PA 17112 3828590 The Culinary Learning Center，LLC 235 South 8th Street Philadelphia PA 19106 3162294 The Cuculinary Palette，LLC 9 Manor Rd Newtown PA 18940 326640 3266480 The Culinary Penguin，L.L.C.10 LLANDAFF RD HAVERTOWN PA 19083 2906653 THE CULLINAN LIMITED PARTNERSHIP 100 WOODSHIRE DR PITTSBURGH PA 15215 85312 THE CULLURA, INC. 120 MILL ST BRISTOL PA 0 85317 THE CULMERVILLE COAL COMPANY NULL PA 0 706549 THE CULTURAL AND HISTORICAL CENTER OF WASHINGTON CO447 WASHINGTON TRUST BLDG WASHINGTON PA 15301 690149 THE CULTURAL CLUB OF INDIA OF GREATER BERKS COUNTY, IN408 WALNUTTOWN RD FLEETWOOD PA 19522 3065972 THE CULTURAL COTERIE 3045 COMFORT RD NEW HOPE PA 18938 1622173 THE CULTURAL COUNCIL OF LUZERNE COUNTY 69 PUBLIC SQ STE 600 WILKES-BARRE PA 18701-2586 2882294 THE CULTURAL SYMPHONY ORCHESTRA OF THE特拉华州VA2033 Plum St Philadelphia PA 19124 2828356文化，环境和工程集团，595 Bennett St Luzerne PA 18709 7187842培养的犬类L.L.L.C.2520 Hillcrest Road Quakertown PA 18951 648946 Cumberbunds 801 Shaw Ave。 S第四圣贝伍德PA 0 640799坎伯兰卫队7th PA。储备卷。