XiaoMi-AI文件搜索系统
World File Search SystemCYBB
EN-374恢复
图3 a）在EN-374中，MGMT P140K蛋白的表达是由无处不在的启动子驱动的，并且通过使用抗人MGMT特异性抗体，可以评估泛元素中的基因标记。在这项研究中，通过流式细胞仪评估了在循环中性粒细胞中测量MGMT基因标记。cybb在末端分化的中性粒细胞中表达，二氢二胺（DHR）测定是一种基于流式细胞仪的方法，用于测量刺激的循环中性粒细胞中NADPH氧化酶活性。纵向b）Cybb蛋白和C）循环外周中性粒细胞中的DHR活性。垂直虚线表示富集的周期。研究结束d）循环中性粒细胞中的Cybb蛋白和e）DHR活性。水平虚线表示10％的治疗阈值。恢复超过10％的具有NADPH氧化酶活性的中性粒细胞已显示出X-CGD患者的感染结果的临床意义改善。f）散装骨髓中有效载荷的研究矢量拷贝数（VCN）。这些数据共同证明了HSC的有效体内工程的概念概念证明，从而导致X-CGD疾病模型小鼠的治疗水平上功能性CYBB的表达。
使用 CRISPR/Cas9 和 53BP1 抑制技术通过靶向 CYBB cDNA 插入来修复 X-CGD 患者的 HSPC，从而增强同源性定向修复
蛋白质。我们在此报告了通过同源定向修复在患者造血干细胞/祖细胞 (HSPC) 中进行基因校正，使用 CRISPR/Cas9 将腺相关病毒供体的 CYBB 外显子 1-13 或 2-13 cDNA 靶向插入内源性 CYBB 外显子 1 或外显子 2 位点。外显子 1-13 cDNA 的靶向插入不会恢复生理 gp91 phox 水平，这与 CYBB 表达对内含子 1 的要求一致。然而，外显子 2-13 cDNA 的插入完全恢复了吞噬细胞分化时 gp91 phox 和 ROS 的产生。添加土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件不会进一步增强外显子 2-13 校正细胞中的 gp91 phox 表达，表明保留内含子 1 足以实现最佳 CYBB 表达。使用 i53 mRNA 暂时抑制非同源末端连接，靶向校正增加了约 1.5 倍。在 NSG 小鼠中植入后，校正后的 HSPC 产生了吞噬细胞，并恢复了 gp91 phox 和 ROS 的产生。我们的研究结果证明了