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使用 SPR 生物传感器针对具有挑战性的药物靶标进行片段库筛选的多重实验策略
表面等离子体共振 (SPR) 生物传感器方法非常适合基于片段的先导化合物发现。然而，缺乏普遍适用的实验程序和详细方案，尤其是对于结构或物理化学上具有挑战性的靶标或当工具化合物不可用时。成功取决于考虑靶标和化学库的特征，有目的地设计筛选实验以识别和验证具有所需特异性和作用方式的命中物，以及能够确认片段命中物的正交方法的可用性。通过采用多路复用策略、使用多个互补表面或实验条件，可以大大扩展适合基于 SPR 生物传感器的方法识别命中物的目标和库的范围。在这里，我们说明了使用基于流的 SPR 生物传感器系统筛选不同大小（90 和 1056 种化合物）的片段库以针对一系列具有挑战性的靶标的原理和多路复用方法。它展示了识别与下列相互作用的片段的策略：1) 大型和结构动态靶标，以乙酰胆碱结合蛋白 (AChBP) 为代表，AChBP 是一种 Cys 环受体配体门控离子通道同源物；2) 多蛋白复合物中的靶标，以赖氨酸脱甲基酶 1 和辅阻遏物 (LSD1/CoREST) 为代表；3) 结构可变或不稳定的靶标，以法呢基焦磷酸合酶 (FPPS) 为代表；4) 含有内在无序区域的靶标，以蛋白酪氨酸磷酸酶 1B (PTP1B) 为代表；5) 易于聚集的蛋白质，以人类 tau 的工程形式 (tau K18 M ) 为代表。重点介绍了考虑蛋白质和文库特性并提高稳健性、灵敏度、通量和多功能性的实际考虑和程序。研究表明，解决这些类型的目标的挑战不在于识别潜在有用的片段本身，而在于建立验证它们并演变为线索的方法。
希腊兽医学会杂志
摘要：本研究旨在评估在正常（NSD）和高（HSD）饲养密度下饲养的肉鸡日粮中添加益生菌发酵脱脂黄粉虫幼虫粉作为新型抗菌饲料添加剂对生长性能、血液和屠宰参数、回肠微生物含量和形态以及盲肠短链脂肪酸含量的影响。将 450 只一日龄 Ross 308 肉鸡随机分成平均体重相似的 6 组，每组 5 个重复。实验处理采用 2 x 3 因子排列，具有两个饲养密度水平（NSD 为 12 只/平方米，HSD 为 18 只/平方米）和三种不同的饲料混合物：CONT- 以玉米-豆粕为基础的饮食，不含发酵脱脂黄粉虫幼虫粉（FDM）（0%）； FDMLP-在CONT日粮中添加经植物乳杆菌发酵的DM（0.4%）；FDMLB-在CONT日粮中添加经短乳杆菌发酵的DM（0.4%）。与NSD相比，HSD显著降低了肉鸡的生长性能，但饲料转化率（FCR）、胴体产量（CYs）、乳酸杆菌属含量和回肠绒毛高度（VH）和绒毛表面积（VSA）以及盲肠短链脂肪酸（SCFAs）浓度除外，但增加了血液异嗜性/淋巴细胞（H/L）比率和大肠杆菌含量以及回肠隐窝深度（CD）。FDMLP和FDMLB日粮显著提高了FCR，增加了最终体重（BW）、体重增加量、乳酸杆菌属。然而，与 CONT 饮食相比，回肠中 VH 和 VSA 含量以及盲肠中 SCFAs 浓度降低了肉鸡血液 H/L 比值以及回肠中大肠杆菌含量和 CD。总之，无论饲养密度如何，FDMLP 和 FDMLB 都可以用作肉鸡饮食中的新型抗菌饲料添加剂。
对糖和氨基酸信号在植物-微生物相互作用中的调节作用的新见解
由于人口不断增长，粮食安全问题变得十分重要。作为固着生物，植物已经进化出复杂的机制来应对病原体。植物的生长发育需要营养物质的获取和运输，这些营养物质介导植物细胞信号传导并激活促生长和/或抗病原体基因的表达。营养物质，包括糖和氨基酸，是高产作物生产所必需的，但也与植物-微生物相互作用密切相关。微生物利用多种策略来适应植物，包括增强根细胞表面以吸收营养、竞争环境营养、劫持植物营养以及改变细胞营养运输和信号传导。这些有益或有害的影响会导致植物微生物群的转变。因此，分析营养物质在植物防御中的作用对于提高施肥效率至关重要。镰刀菌穗枯病 (FHB) 严重威胁小麦的质量和产量。赵等人。对抗性基因型苏麦3号和感病基因型山农20接种禾谷镰刀菌后代谢产物进行了分析，结果表明，不同品种间部分氨基酸含量发生了明显变化，外源施用脯氨酸(Pro)和丙氨酸(Ala)可增强小麦对禾谷镰刀菌的抗性，而外源施用半胱氨酸(Cys)则加重小麦的感病性，说明小麦的氨基酸代谢与抗性密切相关。尖镰孢菌是引起烟草根腐病的主要病原菌，严重影响烟草的生长。200F 的毒力测定 . oxysporum 菌株的鉴定以及表达模式的鉴定表明基因与毒力水平呈正相关，并表明 ATP 合成酶基因通过抑制烟草中糖最终输出转运蛋白 (SWEETs) 的表达水平对 F. oxysporum 的毒力很重要 [Gai et al.]。根结线虫 Meloidogyne incognita 感染显著改变了拟南芥中 SWEETs 的表达水平。组织学和遗传分析表明，M. incognita 感染诱导 AtSWEET1 在瘿中特异性表达，突变
药物靶标的结构研究和药物代谢酶
本文中介绍的工作描述了如何获取有关蛋白质的结构信息，以及如何使用它来回答有关蛋白质功能，动态行为以及与其他蛋白质或配体的相互作用的科学问题。嘧啶降解，药物代谢酶β-尿肽酶（βUP）的催化功能取决于寡聚态之间的变化。在二聚体二聚体界面中的氨基酸H173和H307在活性位点取代，表明这些对于βup激活至关重要。对基材和产物类似物的抑制作用研究允许假设与F205相互作用的能力可以将激活因子与抑制剂区分开。使用低温电子显微镜确定了激活的较高低聚物状态的第一个结构，并确认封闭的入口环构象和二聚体二聚体接口在HSβUP和DMβUP之间保守。研究了表观遗传药物靶标与含有蛋白3（SMYD3）的MYND结构域与可能的抑制剂之间的相互作用。晶体结构证实了在SMYD3的活性位点，合理设计的靶向抑制剂的共价键。使用具有阻塞活性位点的生物传感器屏幕发现了一个新的变构结合位点。晶体结构揭示了新结合位点的位置，以及变构抑制剂的（s） - （r）对映异构体的结合模式。最后，采用了一种基于碎片的药物发现方法，并通过碎片屏幕上的命中进行共结晶和浸泡Smyd3。这导致四个晶体结构在酶的几个位置的碎片密度弱。动态乙酰胆碱结合蛋白（ACHBP）是Cys环型配体离子通道的同源物。从各种生物传感器筛选中进行命中，其中一些表明构象变化与ACHBP共结晶。确定了来自生物物理筛选的命中化合物的复合物中ACHBP的七个晶体结构。在几个晶体结构中检测到Cys-loop的小构象变化，与生物传感器筛选的结果一致。在这些研究中，我们探讨了研究与药物发现和优化相关的蛋白质功能和调节的新策略。
MM11815 - 临床实验室收费表和实验室服务（需支付合理费用）的季度更新
• 因私人付款人费率实施而导致的付款减少的法定分阶段延长，即延长至 2024 日历年 (CY)。2021 日历年减少 0.0%，2022 年至 2024 日历年付款减少不得超过 15%。冠状病毒 19 (COVID-19) 政策更新 • 为 COVID-19 检测目的而收集样本的费用在 COVID-19 大流行的公共卫生紧急情况 (PHE) 期间，为了在当前当局的范围内尽可能广泛地为需要的医疗保险受益人提供诊断测试，在带有评论期的临时最终规则 (IFC) 中，CMS-1744-IFC，“医疗保险和医疗补助计划；在“应对 COVID-19 公共卫生紧急事件的政策和监管修订”中，CMS 更改了医疗保险支付规则，在某些情况下，向独立实验室支付从居家或未在医院接受 COVID-19 检测的受益人那里收集样本的费用。有关此政策更新的更多信息，请参阅 https://www.cms.gov/files/document/covid-final-ifc.pdf 。• 对临床实验室诊断测试订购要求的修订在带有评论期的临时最终规则 CMS-5531-IFC、医疗保险和医疗补助计划、基本健康计划和交易所中；为应对 COVID-19 公共卫生紧急事件和延迟专业护理机构质量报告计划的某些报告要求而做出的其他政策和监管修订，在 COVID-19 疫情 PHE 期间，CMS 临时取消了某些临床诊断实验室测试必须由治疗医生或非医生执业者 (NPP) 下令的要求。这将允许任何根据州法律授权的医疗保健专业人员下令进行 COVID-19 诊断实验室测试（包括血清学和抗体测试）。由于冠状病毒、流感和呼吸道合胞病毒 (RSV) 的症状通常相同，因此有必要同时检测这三种病毒，因此这项临时政策也适用于流感和 RSV 测试，但前提是这些测试与医学上必要的 COVID-19 诊断实验室测试一起进行，以确定或排除 COVID-19 诊断或确定对 SARS-COV-2 的适应性免疫反应。有关此政策更新的更多信息，请参阅 https://www.cms.gov/files/document/covid-medicare-and-medicaid- ifc2.pdf 。 • COVID-19 血清学检测覆盖范围 在具有评论期的临时最终规则 CMS-5531-IFC“医疗保险和医疗补助计划，
副教授
1. Sahoo J、Mishra R、Joshi RK (2024) 批量分离 RNA 测序 (BSR-Seq) 结合 SNP 基因分型对洋葱 (Allium cepa L.) 紫斑抗性基因进行定位和表征。植物分子生物学报告。https://doi.org/10.1007/s11105-024-01466-1 (IF-1.6)。2. Mahanty B、Mishra R、Joshi RK (2023) 洋葱 (Allium cepa L.) 对镰刀菌基底腐病感染的 miRNome 动态的全球研究。生理和分子植物病理学。https://doi.org/10.1016/j.pmpp.2023.102157。(IF-2.89)。 3. Sahoo J、Mishra R、Joshi RK (2023) 开发与紫斑病抗性相关的 SNP 标记，用于洋葱 (Allium cepa L.) 育种中的标记辅助选择。3 生物技术。https://doi.org/10.1007/s13205-023-03562-7 (IF-2.89)。4. Mahanty B、Mishra R、Joshi RK (2023) 尖镰孢菌 f.sp cepae 小 RNA (Foc-sRNA) 通过跨界 RNA 干扰促进洋葱 (Allium cepa L.) 的疾病易感性。生理和分子植物病理学。125: 102018。https://doi.org/10.1016/j.pmpp.2023.102018。(IF- 2.74)。 5. Sahoo J、Mahanty B、Mishra R、Joshi RK (2023) 开发与紫斑病抗性相关的 SNP 标记，用于洋葱 (Allium cepa L.) 育种中的标记辅助选择。3 Biotech。13: 137。https://doi.org/10.1007/s13205-023-03562-7。（影响因子 2.89）。6. Mahanty B、Mishra R、Joshi RK (2023) 植物与真菌病原体之间的跨界小 RNA 通讯 - 最新更新和未来农业的前景。RNA 生物学。https://doi.org/10.1080/15476286.2023.2195731。（影响因子：4.77）。 7. Mahanty B、Mishra R、Joshi RK (2023) 雌雄异株葫芦科植物的性别分化——分子视角。生物技术研究杂志。18(2): 118-126。https://doi.org/10.25303/1802rjbt1180126 (IF-0.35)。8. Mahanty B、Mishra R、Joshi RK (2022) Zn(II) 2 Cys 6 簇基因家族的分子表征及其与洋葱基腐病病原菌 Fusarium oxysporum f. sp. cepae 致病性的关联。生理和分子植物病理学。https://doi.org/10.1016/j.pmpp.2021.101782。 (影响因子 - 2.74) 9. Mallick T、Mishra R、Mohanty S、Joshi RK (2022) 马铃薯软腐病原菌 Pectobacterium carotovorum 菌株 ICMP 5702 的全基因组分析，以预测其遗传特征的新见解。Plant Pathol J. 38(2): 102-114。https://doi.org/10.5423/PPJ.OA.12.2021.0190 (影响因子：2.32)。10. Nanda S、Kumar G、Mishra R、Joshi RK (2022) 微生物辅助缓解马铃薯中重金属毒性
利用合成细菌孢子进行细胞特异性货物运输
图 1. 通过靶向 HER2 阳性细胞的 SSHEL 递送阿霉素可减轻小鼠肿瘤异种移植模型中的肿瘤负担。 (A) SSHEL 粒子组装示意图。 1 µm 直径的介孔二氧化硅珠 (灰色，SiO 2 ) 装载货物 (阿霉素，红色)，然后将脂质双层 (磷脂酰胆碱) 应用于表面 (黄色) 以创建货物包裹的球形支撑脂质双层 (SSLB)。 然后将 SSLB 与 SpoVM 肽 (蓝色) 和 SpoIVA 蛋白 (绿色) 和 ATP 一起孵育以促进 SpoIVA 聚合。 插图：SpoIVA 含有与反式环辛烯 (TCO) 结合的工程 Cys。与同源点击化学分子四嗪结合的抗 HER2 亲和体 (蓝色星号) 孵育会形成共价二氢哒嗪键，从而导致亲和体显示在 SSHEL 表面。(B) 显示用 Alexa Fluor 488 (AF488) 荧光染料标记的共价连接亲和体的 SSHEL 的荧光显微照片。左图：使用 DIC 可视化的 SSHEL；右图：来自 AF488 的荧光。(C) 使用流式细胞术测量显示抗 HER2 AF488 (绿色) 的 SSHEL 的荧光，并与显示已知数量的等效可溶性荧光染料分子 (MESF) 的珠子产生的荧光进行比较，以计算每个 SSHEL 颗粒显示的抗 HER2 AF488 的数量。(D) 用 SpoIVA AF488 制成的载阿霉素 SSHEL 的荧光显微照片。左上：DIC；右上：SpoIVA AF488 的荧光；左下：阿霉素的荧光；右下：叠加，阿霉素和 SpoIVA AF488 。B 和 D 中的比例尺：1 µm。（EF）无胸腺裸鼠皮下（sc）接种 SKOV3 HER2 阳性卵巢癌细胞。当肿瘤体积达到 ~100 mm 3 时，在异种移植后的几天内，用 PBS（黑色圆圈）、(E) 60 µg 或 (F) 120 µg 阿霉素（红色方块）、含有等效剂量阿霉素的载阿霉素 SSHEL（绿色三角形）或不含货物的等效数量 SSHEL（蓝色倒三角形）对小鼠进行静脉内 (iv) 治疗，箭头所示（试验 1 为 18、21、25、28、32、35、39、43、46、50、54；试验 2 为 13、16、20、23、27、30、34、37），并测量肿瘤体积。数据点代表平均值；误差为 SD；n=7 只小鼠。P 值：*<.05；****<.001。 (GH) 分别在 (G) 第 60 天、(H) 第 41 天 (H，左) 或第 47 天 (H，右) 从 (EF) 小鼠体内切除的肿瘤。红色星号：溃疡肿瘤；蓝色星号：肿瘤 >1500 mm 3 ；橙色星号：从体重减轻 >10% 的小鼠体内切除的肿瘤。比例尺：10 mm。
诺克斯堡家庭倡导计划 - 美国陆军驻地
第 1 章 概述 1-1. 目的 规定诺克斯堡家庭倡导计划（FAP）实施方案的程序。 1-2. 参考文献 必需和相关出版物以及规定和参考的表格列于附录 A。 1-3. 适用范围 本规定的程序和责任适用于诺克斯堡社区人员及其家庭成员，包括现役士兵、退役士兵、国防部（DoD）和陆军部（DA）文职雇员和承包商，以及在当地医疗机构（MTF）获得授权治疗的家庭成员。 根据陆军总部对事件判定委员会（IDC）和临床病例人员会议（CCSM）的实施指示，家庭暴力是指家庭暴力或导致情感/心理虐待、经济控制和/或干涉人身自由的行为模式，针对的是前任或现任配偶；与施虐者共同抚养孩子的人；施虐者与之共享或曾经共享共同住所的现任或前任亲密伴侣 (IP)；或与被告有或曾经有恋爱或亲密性质的社会关系并被确定为亲密伴侣的人。 发生在配偶或 IP 关系中的性侵犯将根据 FAP 政策进行管理。作为约会对象的 IP 性侵犯受害者现在包括在扩大的 IP 定义中，并将获得 FAP 临床服务，并可利用 FAP 或 SHARP 进行受害者辩护服务。 1-4. 使命 通过建立信息和教育计划以及支持强大、自力更生的士兵和家庭的康复服务，减少家庭虐待/忽视儿童和家庭暴力事件并促进有效的家庭功能。 为高危家庭提供服务；确保及时报告、评估和调查虐待事件；并为所有受影响的家庭成员提供治疗。 1-5. 协调的社区响应 与 FAP 有关的机构之间和内部的沟通至关重要。将强调多学科方法，并尽可能在需要了解的人之间共享信息。被分配到诺克斯堡社区的家庭的安全是重中之重。所有机构将共同努力，确保服务不重复，并在发现差距时采取适当措施。第 2 章 安装人员职责 2-1. 一般单位指挥官/一级军士/高级士兵顾问；家庭和士气、福利和娱乐主任 (DFMWR)；陆军社区服务 (ACS) 主任；安装 FAP 经理 (FAPM)；医疗治疗设施 (MTF) 指挥官/首席、家庭宣传计划 (FAP)；牙科活动指挥官，牙科服务主管；主管官员 (OIC)；参谋军法官 (SJA)；安装牧师；公共事务官 (PAO)；陆军药物滥用项目临床主任 (ASAP)；当地美国陆军刑事调查司令部 (USACID)；紧急服务主任 (DES)；儿童和青少年服务 (CYS) 协调员将阅读并遵守 AR 608-18 中概述的所有要求。2-2. 紧急服务局将：a. 充当所有不受限制的家庭虐待报告以及所有虐待和忽视儿童报告的报告联络点 (RPOC)。DES 将确保诺克斯堡的响应能力
季节性气候前景一月-Pagasa公共文件
laNiña条件存在于热带太平洋地区。大多数气候模型表明，目前的LaNiña条件将至少至少至1月至1月3月（JFM）2025季节。预计将在JFM 2025季节的正常降雨量高于正常降雨的可能性更高，这可能会导致洪水，闪流量和降雨引起的滑坡。此外，在此期间，菲律宾责任领域（PAR）内的热带气旋活动的机会增加了。1月至2025年3月，这一时期的气候仍然受到正在进行的LaNiña条件的影响。可能影响本季节国家的天气系统是东北季风（NEM），剪切线，额叶系统，东方人，地球，跨热收敛区（ITCZ），局部雷暴，低压区域（LPA），高压区域（HPAS）和Zero（HPAS）和零（0）至3（3）的（3）Trop cys（tc）（TC） （par）。但是，TC通常在一年中的这个时候频繁，轨道大多在登陆，弯腰或穿过米沙ya岛前往巴拉望岛地区的轨道。仍然有望影响该国，带来较低的温度，尤其是在该国北部地区。Jan-Feb-Mar（JFM）季节的降雨量预计在该国大部分地区的降雨量将比正常水平远高。同样，本赛季的概率预测也表明，该国大多数地区的正常降雨条件的机会更高。在此期间，尤其是在一月和2月，仍然会影响该国。仍然会影响该国。表面空气温度通常在该国大部分地区都接近高于平均水平，除了很少的区域可能比平均水平（Coron和Romblon）凉爽（Coron和Romblon），并且比平均温度温暖（Clark，Naia，Dipolog和Misamis Oriental）。预计3月会逐渐减弱NE季风。这可能标志着该国干燥和温暖的季节的开始，因为地表空气温度将逐渐开始升高。在本赛季预计将在2025年4月至2025年6月的前景过渡到ENSO中立状况。此外，大多数气候模型表明，此后ENSO中性持续存在的可能性增加。这个时期的特征是温暖而潮湿的天气条件，尤其是在4月和5月的几个月中，风的过渡向西南（SW）季风季节发生。可能影响该国气候的天气系统是Easterlies，LPA，HPA，ITCZ，局部雷暴，西南季风和可能在PAR中发展/输入的两（2）至5（2）TC。在此期间，TC的平均轨道通常来自东部米沙ya，向西移动，其接近于4月和5月的中部和北部吕宋岛，以及可能于6月在吕宋岛穿越中部和北部的比科尔地区。预测本赛季的降雨状况通常接近全国的平均水平。的概率预测还表明，除了北部吕宋岛以外，该国大部分地区的正常降雨条件的概率较高。通常，除了Coron，Romblon和Bohol外，该国大部分地区的地表空气温度可能接近平均水平高于平均水平，预计将感觉到低于平均温度。
crispr-介导的肉桂酸 - COA还原酶4的突变，在Allohexaploid oiled Crop Camelina sativa中揭示了其在抗性中的关键作用
背景：硬化菌核（SS）是一种广泛的宿主范围，可影响400多种植物物种。ss cys camelina sativa（CS）的茎腐病疾病是一种适用于低输入作物和工业油属性的Allohexaploid crucifer物种，适用于生物燃料和润滑剂。组织化学和分子研究已将C. sativa中的SS抗性与细胞壁木质化联系起来（Eynck等，2012），并报道了CSS抗性线CN114263中的Cinnamoyl-COA还原酶4（CSCCR4）基因的组成型表达。现代繁殖工作（例如基因编辑）需要改善商业线条，并限制农作物损失的风险，这对生产者来说是重要的。目的：为了研究单极生物合成的重要性以及CSCCR4在Camelina对SS耐药性中的作用，我们使用CRISPR/CAS9介导的基因编辑产生了CN114263 Camelina系的CSCCR4敲除突变体。材料和方法：三十T1植物是通过花卉浸入转化产生的，然后是草甘膦喷雾，该植物在筛选程序的第一步中使用，并通过PCR方法确认。使用数字液滴PCR（DDPCR）确定T1和T2祖细胞中T1和T2祖细胞中的T-DNA拷贝数变化T-DNA CNV，并且通过下降测定技术对T1和T2代的CSCCR4同源物的三个副本中的三个副本中的突变发生。为确保T2植物中的突变体是真实的，对其中三个的cas9/ grna特异性裂解点侧面进行了topo ta测序。在T2代生成中，筛选了CSCCR4基因中的潜在突变。结果：在T1代中，确认了25种植物，这些植物在相应的Camelina基因组中具有1至9个TNA拷贝。在CSCCR4的三个副本中证明了各种类型的突变，包括插入和缺失。实际上，CRISPR系统可以分别在编号T2-Plant 10，T2-Plant 15和T2-Plant 19的事件中删除一个，两或三个副本。T3-plant 19在上一代中所有版本的CSCCR4中表现出突变具有易感性的螺旋杆菌侵袭，并保留为实际CSCCR4突变体材料，以进一步研究骆驼 - 螺旋菌相互作用。CSCCR4中的突变是通过容易出错的非同源端连接（NHEJ）核DNA修复途径发生的。ss挑战早期开花的T3一代。与WildType对照母体CN114263相比，在CSCCR4位置217处的突变的T3植物在CSCCR4位置217处的过早停止密码子受到了损害。结论：使用DDPCR很容易识别T1和T2祖细胞中CSCCR4同源物中的T-DNA CNV和突变的发生。我们说明，CRISPR/CAS9介导的突变是一种体面的技术，可以用来加快突变线的发展，可以帮助您弄清CSCCR4基因在防御：sativa C. c. c. c.c。sativa中的活性，作为前瞻性石油种植作物的生物柴油生产。