精原干细胞 (SSC) 是生产转基因动物的资源。然而,对 SSC 的基因操作取得的成功有限。在这里,我们展示了通过慢病毒 (FV-LV) 使用融合蛋白 (F) 将基因有效转移到 SSC 中,融合蛋白是一种参与病毒体/细胞膜融合的仙台病毒 (SV) 包膜蛋白。FV-LV 比传统 LV 更有效地转导培养的 SSC。虽然感染 SV 的 SSC 无法产生后代,但用 FV-LV 转导的 SSC 具有生育能力。体内微注射表明 FV-LV 不仅可以穿透曲细精管的基底膜,还可以穿透血睾屏障,从而成功转导生精细胞和睾丸体细胞。用表达针对 Kit 或 Sycp3 的药物诱导型 CRISPR/Cas9 的 FV-LV 转染培养的 SSC 在移植和体内药物治疗后表现出精子发生受损。因此,FV-LV 为涉及 SSC 和精子发生的基因的功能分析提供了一种有效的方法。
欧洲诱导性多能干细胞库 (EBiSC) 收集了来自欧洲各地与遗传疾病和健康对照相关的 iPSC 系,并将其提供给国际学术和商业用户用于研究。要确保大规模和各种来源的高质量 iPSC 的可用性,需要灵活而强大的质量系统,以最大限度地利用现有资源。在这里,我们概述了适合大规模运营环境的质量控制制度的建立和实施。严格的放行测试可确保分布式 iPSC 系的安全性和完整性,而信息测试则允许发布 iPSC 系的完整特性和评估。质量控制筛选以“适合用途”的质量管理体系为基础,提供完整的可追溯性并支持持续的科学和工艺开发。关键检测和技术的评估和鉴定可确保检测灵敏度和检测限是可接受的。使用快速测试技术代替更“传统”的检测方法,使 EBiSC 能够快速响应用户需求,以节省劳动力和成本高效的方式生成完全合格的 iPSC 系库。
•道路A:道路是由水溶液中Murino Origin CD45和CD34的单克隆抗体的混合物形成含有0.09%的稳定和钠氮杂蛋白(NAN 3)的水溶液•步骤量绝对计数管:它们是含有4.2微米的Lyophilized直径的4.2 micros,能够发射荧光cytomer的管子,它们包含已知数量的微球(球形出现在管中)4.2 microns。 div>•7-AAD小瓶:小瓶在液体和方形钠状态(NAN 3)中含有7-氨基 - 肌动蛋白D至0.09%,以识别不可行的细胞。 div>•用Lisys Al启动10倍解决方案:该船含有基于氯化铵(NH 4 Cl)浓缩10次的液体溶液,将样品红细胞和钠azid(NAN 3)至0.09%
从HIV-1 + 2,乙型肝炎和丙型肝炎中分离出外周血单核细胞(PBMC)。pBMC,包括人类基因Oct3/4,Sox2,c-Myc和klf4的矢量。HIPSC线BIHI292-A源自单个菌落,并在E8培养基中保持未分化的HIPSC的典型形态(图1 a)。通过PCR确认缺乏仙台病毒载体(Suppl。图1 a)。BIHI292-A HIPSCS ECT3/4,SSEA-4,NANOG和TRA-1 - 60作为未分化HIPSC状态的典型标记,如使用免疫细胞化学所示(图1 b)。进一步的流式细胞仪证实了OCT3/4,SSEA-4,NANOG和TRA-1-60表达在超过96%的BIHI292-A HIPSC中的SSEA-4,Nanog和Tra-1-60表达中的干性标记表达(图。1 c)。g带核分型在GTG上进行(使用GIEMSA的胰蛋白酶G带)进行染色的中期染色体,并揭示了正常的雌性Karyo 46型,XX(图1 D)。 单核苷酸多态性分析表明,与患者的PBMC相比,BIHI292-A HIPSC线没有任何拷贝数变量> 2 Mb> 2 MB> 5 MB(表1)。 短串联重复(STR)分析的结果表明,BIHI292-A细胞系和患者的PBMC的遗传认同是相同的(表1)。 Sanger测序证实了两个Exon 2中的两个Trem2杂合突变C.313del(P.Ala105fs)和C.199del(p。is67fs)(图) 1 e)。 图1 D)。单核苷酸多态性分析表明,与患者的PBMC相比,BIHI292-A HIPSC线没有任何拷贝数变量> 2 Mb> 2 MB> 5 MB(表1)。短串联重复(STR)分析的结果表明,BIHI292-A细胞系和患者的PBMC的遗传认同是相同的(表1)。Sanger测序证实了两个Exon 2中的两个Trem2杂合突变C.313del(P.Ala105fs)和C.199del(p。is67fs)(图1 e)。图为了确认患者突变的存在(Buthut等,2023),在TREM2基因的外显子2中为复合杂合突变进行了BIHI292-A HIPSC的测序。通过将分化为三个细菌层的细胞进行分化,测试了多能分化势。分化测试证实,BIHI292-A HIPSC具有分化为内胚层(CD184 +,SOX17 +),Meso Dermal(CD140B +,CD144 +)和外胚层(PAX-6 +,SOX2 +)细胞的潜力(1 f)。BIHI292-A HIPSC对支原体进行了阴性测试(Suppl。1 b)。
1 Center for iPS Cell Research and Application (CiRA), Kyoto University, Kyoto 606-8507, Japan 2 Department of Drug Discovery for Lung Diseases, Graduate School of Medicine, Kyoto University, Kyoto 606-8501, Japan 3 Department of Clinical Laboratory Medicine, Graduate School of Medicine, Kyoto University, Kyoto 606-8507, Japan 4 Medical-risk Avoidance Based on iPS Cells瑞肯高级情报项目中心(AIP),京都606-8507,日本5人类生物学先进研究所(WPI-ASHBI),京都大学,京都606-8501,日本6日6日6日,日本6-8501,超级组织病毒实验室京都大学生物统计学院,京都606-8507,日本8铅联系 *通信:kazuo.takayama@cira.kioto.kyoto-u.ac.ac.jp(K.T.),gotoh.shimpei.5m@kyoto-u.ac.jp(s.g.)https://doi.org/10.1016/j.stemcr.2024.02.011
本演讲中包含的陈述本质上不是历史性的,这是1995年《私人证券诉讼改革法》的含义。gilead警告读者,前瞻性陈述受到某些风险和不确定性的影响,可能会导致实际结果差异。此外,吉利德(Gilead)做出了影响所报告资产,负债,收入和费用及相关披露的报告数量的估计和判断。gilead基于历史经验以及其他各种特定于市场和其他相关假设的估计,其认为在这种情况下是合理的,哪些结果构成了对资产和责任的账面价值的基础,这些基础是不容易从其他来源出现的。可能还有其他因素吉利德(Gilead)当前不知道可能会影响前瞻性陈述中讨论的事项,并且可能导致实际结果与这些估计值有显着差异。gilead将读者指导其新闻稿,表格10-K的年度报告,关于10-Q表格的季度报告以及向SEC提交的其他披露文件。gilead声称,对1995年《私人证券诉讼改革法》中包含的安全港的保护,以提出前瞻性陈述。