此过程描述了如何用各种限制性核酸内切酶消化纯化的质粒DNA。使用各种缓冲液和盐条件,将质粒DNA切成各种长度DNA片。然后,可以使用E-Gel功率SNAP电泳和SAP-23132 Chemidoc MP Imaging Imaging Systems使用E-Gel Power Snap Extrophoresis和SP-23132 Chemidoc Imaging Systems使用E-Gel Power Snap Systems和SEOP-23132 ChemIdoc Imaging Systems,并具有来自Bio-Rad的Image Lab touch软件。限制性核酸内切酶识别短的DNA序列,然后在识别序列内或附近的特定位点上裂解双链DNA。限制性核酸内切酶将DNA裂解为离散片段是分子生物学中最基本的过程之一。基本协议描述了如何为任何酶和缓冲液条件切割DNA。这些包括用一个以上的内切酶消化给定的DNA样品,并用相同的内切酶消化多个DNA样品。
Bio-Rad Chemidoc MP成像系统是一个多功能平台,用于捕获分子生物学研究中化学发光,荧光和比色测定法的高分辨率图像。它可以对蛋白质,核酸和基于细胞的实验进行精确的量化和分析,从而为广泛的应用提供先进的图像处理和数据分析工具。
Signaling Technology,4129)、细胞周期蛋白 E2 (1:1000; Cell Signaling Technology,4132)、细胞周期蛋白 H (1:1000; BD Biosciences,2927)、裂解的 PARP (1:1000; Cell Signaling Technology,9541S)、CDK2 (1:1000; Santa Cruz,SC6248)、CDK4 (1:1000; Santa Cruz,SC260)、CDK6 (1:1000; Santa Cruz,SC271364)、E-钙粘蛋白 (1:1000; Santa Cruz,SC21791)、N-钙粘蛋白 (1:1000; Santa Cruz,SC7939)、胱天蛋白酶 3 (1:1000; Cell Signaling Technology,14220)、裂解的胱天蛋白酶-3 (1:1000; Cell Signaling Technology,9664), PARP(1:1000;Santa Cruz,SC8007)、裂解 PARP(1:1000;Cell Signaling Technology,9541S)、外皮蛋白(1:1000;Thermo Fisher,MS-126-P1ABX)、Bcl-2(1:1000;Cell Signaling Technology,15071S)、Bax(1:1000;Cell Signaling Technology,5023S)和 LC3(1:1000;Cell Signaling Technology,2775S)。然后用 ChemiDoc MP 成像系统(Bio-Rad)捕获对应于每个标记蛋白的化学发光信号。使用针对 GAPDH 的特异性抗体(1:10000;Proteintech,10494-1-AP)作为蛋白质上样对照。