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克隆载体
1. 质粒 质粒是自然产生的染色体外 DNA 片段，可以稳定地从一代传到另一代。质粒携带编码抗生素、某些毒素或重金属抗性的基因，或产生 DNA 限制和修饰酶的基因。质粒的拷贝数可以从 1-2 到多个拷贝 (10-200)/细胞不等。质粒用于克隆不超过 10 Kb 的小片段 DNA，该片段位于称为多接头的位点，多接头是一小段 DNA，其中包含许多限制位点，质粒可以用任何限制酶切割这些位点，然后将所需的 DNA 连接到该位点。 pBR322 质粒 pBR322 是 1977 年创建的第一个大肠杆菌中常用的载体。它是一个小质粒（4361 bp），每细胞含有 15-20 个拷贝数，pBR322 还含有复制起点，并带有对氨苄青霉素和四环素的两个抗生素抗性基因。该质粒具有超过 40 种限制性酶的独特限制位点。
酵母模块化克隆工具包的扩展，用于基于 CRISPR 的应用、基因组整合和组合文库
摘要：在过去的几十年中，遗传部件的标准化已成为一个越来越受关注的话题。为了简化分子克隆程序，同时使其更可预测和可重复，人们设计了几种生物标准，其中之一就是模块化克隆 (MoClo)。酵母 MoClo 工具包提供了一个大型特征化遗传部件库，并结合了全面而灵活的组装策略。在这里，我们的目标是 (1) 通过提供一个简单的设计工具将新部件纳入 MoClo 库来简化标准的采用；(2) 通过展示启动子部件中的 BglII 位点对蛋白质表达的影响来进一步表征工具包；(3) 扩展工具包，以便高效构建 gRNA 阵列、无标记整合盒和组合库。这些新增功能使工具包更适用于常见的工程任务，并将进一步促进其在酵母生物工程界的采用。关键词：酿酒酵母，工具包，模块化克隆，gRNA 阵列，基因组整合，文库构建■ 简介
基因克隆和 DNA 分析
1.1 遗传学的早期发展 1.2 基因克隆和聚合酶链式反应的出现 1.3 什么是基因克隆？ 1.4 什么是 PCR？ 1.5 为什么基因克隆和 PCR 如此重要 1.6 如何阅读本书 进一步阅读 第 2 章：基因克隆载体：质粒和噬菌体
作业1：模仿学习1行为克隆
2。运行匕首并报告您先前使用行为克隆（即ANT +另一个环境）测试的两个任务。以学习曲线的形式报告您的结果，绘制匕首迭代的数量与策略的平均收益，并显示出错误栏以显示标准偏差。在同一地块上包括专家策略的性能和行为克隆代理（如遍布图的水平线）。在标题中，说明您使用的任务以及有关网络体系结构，数据量等的任何详细信息。（如上一节所示）。
令人讨厌的纳粹和极端美国人：克隆，优生学和当代科幻小说中的民族象征交换
摘要摘要本文介绍了过去十到十五年的德国科幻小说，特别是那些主题化克隆和/或优生学的小说。讨论中的主要小说包括Barbara Kirchner的Die Verbesserte Frau，Birgit Rabisch的Duplik Jonas 7，以及Charlotte Kerner的Blueprint/Blaupause（由Franka Potente于2004年发行，是作为电影改编而发行的）。本讨论表明了这些和类似小说如何与纳粹优生和生殖实验的遗产相抗衡，其次，小说中现有的历史意识与当前生物技术问题的辩论内容有关，包括尤里根·哈伯马斯（JürgenHabermas），斯拉沃伊·Zizek，Slavoj Zizek和Peter Sloterdij。本文通过将这些辩论带入美国文本的比较例子中的文化交叉引用（Gattaca [1997]，The Island [2005]，二）），这些辩论倾向于令人恐惧的生殖技术的令人恐惧的方面与纳粹文本的含义，而德语文本则倾向于将其作为未来的访问者的来源。
nzyeasy克隆表达系统_userguide_v1902
nzyeasy克隆和表达系统旨在将任何PCR生成的片段定向克隆到由Nzyeasy酶混合物介导的单个连接酶独立的反应中，将任何PCR生成的片段定向到线性化的PHTP载体中。向量 - 互补的悬垂物，其中包含由Nzyeasy酶识别的特定序列，通过使用具有适当5'扩展的引物，将其掺入PCR产物中。在存在Nzyeasy酶的情况下与线性化的PHTP载体生成的插入物相结合时，两个DNA分子将通过单链区域的碱基对互补而退火。反应发生在单管沿三个温度依赖的步骤持续80分钟。含有感兴趣片段的圆形重组载体。该系统允许达到高克隆效率（80-100％），并且不需要使用DNA连接酶。此外，没有进一步的治疗（例如限制消化，磷酸化或钝性抛光剂）是需要插入物的。该系统还允许将先前克隆在其他质粒载体中的基因转移到PHTP载体中，只要两个向量具有不同的可选标记，并且要转移的基因侧翼是适当的克隆区域（请参阅第12页）。PCR生成的片段可以克隆到PHTP0克隆载体中（并入到Nzyeasy克隆套件中，CAT。编号MB281），它是一种标准的PUC衍生物，具有赋予大肠杆菌抗氨苄西林的基因。另外，插入物可以直接克隆到耐卡纳米霉素的PHTP表达向量之一中，而无需经过繁琐而费力的中间阶段。PHTP表达载体设计为实现大肠杆菌中高水平的重组基因表达。
Cellartis IPSC单细胞克隆Def-CS培养基...
在DEF-CS系统中，人IPS细胞的预期形态DEF-CS技术与特定涂层结合使用了基于酶的传递，以促进单细胞生存，快速扩张和更容易传播。将IPS单元素转移到该系统时，您会注意到某些单元格特性与您以前系统中培养的IPS细胞的特性不同。与常用的基于菌落的培养系统相反，Def-CS培养系统产生了均匀间隔细胞的单层。在Def-CS培养系统中生长的新传递的细胞倾向于散布。然而，随着细胞的增殖，培养物变得更密集，细胞显示出典型的未分化的干细胞形态（即高核与细胞质比，定义的边界和突出的核仁）。
Cellartis® iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle 和单细胞克隆系统用户手册
一旦 Cas9/sgRNA RNP 复合物通过囊泡递送并恢复细胞，就必须分离单细胞并将其扩增成克隆细胞系，以便分离和筛选目标基因型（图 3）。传统上，从作为菌落生长和传代的 hiPS 细胞建立克隆群效率低、困难且耗时；通常会导致细胞死亡或过早分化。然而，Cellartis iPSC CRISPR/Cas9 囊泡和单细胞克隆系统的细胞培养组件包含一个确定的培养系统（Cellartis DEF-CS™ 培养系统，由基础培养基、涂层和添加剂组成），可有效进行单细胞克隆和扩增编辑的 hiPSC 克隆。 DEF-CS 培养系统是一种基于单层的培养系统，它通过允许单细胞传代、促进接种单细胞的存活和进一步扩增以及保留这些细胞的多能性，克服了基于菌落的培养所面临的挑战。
