A 25 µL反应和20个单位RNase抑制剂,其中含有Purexpress®Δ核糖体的成分在37°C下在37°C下孵育2小时,从而在预期的20 kDa产物中通过SDS-PAGE与Coomassie Blue blue detection确定,导致预期的20 kDa产物。
在 250 ng PURExpress® 对照 DHFR 质粒和 20 单位 RNase 抑制剂(含有 PURExpress® Δ 核糖体试剂盒的成分)存在下进行 25 µl 反应,在 37°C 下孵育 2 小时,通过 SDS-PAGE 和考马斯亮蓝检测测定,可得到预期的 20 kDa 产物。
在 250 ng vTPA(截短组织型纤溶酶原激活剂)模板质粒 DNA、1 µl 增强剂 1、1 µl 增强剂 2 和 20 单位 RNase 抑制剂(含有 PURExpress® 体外蛋白质合成试剂盒的成分)存在下进行 25 µl 反应,在 37°C 下孵育 2 小时,通过 SDS-PAGE 和考马斯亮蓝检测测定,可得到预期的 40 kDa 产物。
在250 ngPurexpress®对照DHFR质粒的存在下 25 µL反应和20个单位RNase抑制剂,其中含有purexpress®在体外蛋白质合成试剂盒中的成分,在37°C下在37°C下孵育2小时,在预期的20 kda产物中,由SDS-PAGE与COOMASS-PAGE与COOMASS-PAGE确定,在预期的20 kda产物中。25 µL反应和20个单位RNase抑制剂,其中含有purexpress®在体外蛋白质合成试剂盒中的成分,在37°C下在37°C下孵育2小时,在预期的20 kda产物中,由SDS-PAGE与COOMASS-PAGE与COOMASS-PAGE确定,在预期的20 kda产物中。
在 250 ng PURExpress® 对照 DHFR 质粒和 20 单位 RNase 抑制剂(包含 PURExpress® 体外蛋白质合成试剂盒的成分)存在下进行 25 µl 反应,在 37°C 下孵育 2 小时,通过 SDS-PAGE 和考马斯亮蓝检测确定可得到预期的 20 kDa 产物。
o布拉德福德测定法:库马西亮蓝色G-250染料试剂。o用于BCA测定:BCA试剂A和B,CUSO₄解决方案。o用于洛瑞测定法:碱性铜试剂,叶核酸试剂。o用于紫外线吸收:磷酸盐缓冲盐水(PBS)或其他合适的缓冲液。4。微板读取器或分光光度计5。移液器和移液器提示6。测试管或微板井7。卧式(用于UV吸收方法)8。Vortex Mixer 9。孵化器(对于某些测定)10。蒸馏水
补充图8。TEV蛋白酶的HALOTAG-TEV-TITIN消化的代表动力学。(a)用TEV蛋白酶消化PSOAS纤维。消化在不同时间点停止了通过在Laemmli缓冲液中煮沸的等分试样,并通过1.8%SDS-PAGE和COOMASSIE染色分析结果。对应于云蛋白的条带,并指出完整和裂解的钛分子。(b,c)通过光密度测定法定量钛带。nebulin强度用于标准化(黑色,完整的滴定;蓝色圆圈,A频段滴定片段;红色三角形,I频段滴定片段)。实线是指数拟合,表示速率常数。这些数据表明,在30分钟的反应时间,在此特定实验中,Halotag-Tev Titin的消化> 99.9%(n = 1实验分析每个消化时间的一个样本,在6个实验中获得了类似的结果)。
本实验是在纳瓦萨里农业大学农业学院植物病理学系进行的。所有分离株通过不同的染色染料和细菌分离株CD35均赋予菌落周围的透明区域均显示出所有染料中最高的纤维素分解指数。接下来,革兰氏碘(3.34)的CD35的纤维素分解指数在Coomassie Brillial Blue(2.96),Safranin(2.55)和刚果红(2.15)下接下来是最高的。显着地,接种后24小时记录了CD35(0.169 U ML -1)的较高的纤维素酶活性,随后是CD17(0.124 U ML -1),CD19(0.101 U ML -1)和CD11(0.081 U ML -1)(0.081 U ML -1),而在CD222222222222222222222221)。最大纤维素酶活性,接种后最大96小时。CD35在72小时时给出了显着最大的纤维素酶活性(0.822 U mL -1)。为了使纤维素酶活性为CD17(0.477 U ML -1),与CD19(0.471 U ML -1)相当,然后是CD11(0.292 U ML -1),而CD22中的最低(0.199 U ML -1)。通过形态学,生化和分子方法将纤维素分解细菌CD35鉴定为枯草芽孢杆菌,并提交给具有MW715021的NCBI GenBank数据库。