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依赖 Cre 的 CRISPR/dCas9 系统用于调控神经元的基因表达
对不同细胞群体进行位点特异性遗传和表观遗传靶向是分子神经科学的核心目标，对于理解复杂表型和行为背后的基因调控机制至关重要。虽然最近的技术进步使对基因表达的控制达到了前所未有的程度，但其中许多方法都集中在选定的模型生物上和/或需要针对不同应用进行劳动密集型定制。基于 CRISPR 的系统的简单性和模块化已经改变了基因组编辑的这一方面，提供了各种可能的应用和目标。然而，目前很少有可用于神经元中细胞选择性 CRISPR 调控的工具。在这里，我们设计、验证和优化了 CRISPR 激活 (CRISPRa) 和 CRISPR 干扰 (CRISPRi) 系统，以实现 Cre 重组酶依赖性基因调控。出乎意料的是，基于传统双链倒置开放阅读框 (DIO) 策略的 CRISPRa 系统在没有 Cre 的情况下表现出泄漏的靶基因诱导。因此，我们开发了一种内含子 Cre 依赖性 CRISPRa 系统 (SVI-DIO-dCas9-VPR)，该系统可缓解泄漏基因诱导，并且在 HEK293T 细胞和大鼠原代神经元培养物中，其在内源基因方面的表现均优于传统 DIO 系统。使用基因特异性 CRISPR sgRNA，我们证明 SVI-DIO-dCas9-VPR 可以以 Cre 特异性方式激活高度可诱导基因 (GRM2、Tent5b 和 Fos) 以及中等可诱导基因 (Sstr2 和 Gadd45b)。此外，为了说明此工具的多功能性，我们创建了一个平行的 CRISPRi 构建体，仅在存在 Cre 的情况下，它才成功抑制了 HEK293T 细胞中荧光素酶报告基因的表达。这些结果为不同模型系统中的 Cre 依赖性 CRISPR-dCas9 方法提供了一个强大的框架，并且当与常见的 Cre 驱动线或通过病毒载体进行 Cre 递送相结合时，将实现细胞特异性靶向。
神经元中用于基因表达调控的CRE依赖性CRISPR/DCAS9
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PCGF1基因破坏揭示了表观遗传机制在肠道神经系统中的神经元亚型规范中的主要参与
图2 PCGF1 CKO小鼠表现出生长停滞和较低的肠道运动。（a）PHOX2B CRE / +（1）和（2）PCGF1 FL / FL； 3周龄时的Phox2b Cre / +小鼠（2）。（b）wt（n = 20），phox2b cre / +（n = 29）和pCGF1 fl / fl之间的生存分析； PHOX2B CRE / +小鼠（n = 26）。（c）WT（黑色条，n = 20），phox2b cre / +（白色bar，n = 26）和pCGF1 fl / fl之间的体重比较；在3和8周龄时，PHOX2B CRE / +小鼠（灰色条，n = 13）。（d）在3周龄的PHOX2B CRE / +（n = 8）和PCGF1 FL / FL之间进行总胃肠道转运时间（GITT）分析； phox2b cre / +小鼠（n = 9）。（e）3周龄的PHOX2B CRE / +（n = 8）和PCGF1 fl / fl之间的粪便重量比较； phox2b cre / +小鼠（n = 6）。（f）3周 - 旧的phox2b cre / +（n = 8）和pcGF1 fl / fl之间的粪便水含量； phox2b cre / +（n = 6）。使用对数秩检验进行了生存分析，并由Kaplan - Meier图显示。使用未配对的t检验显示统计分析的结果为平均值±SEM。
生成和表征细胞类型特异性、可诱导的 Cre 驱动系以研究嗅觉处理
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240130_2024-22_ATRT8-EN.pdf
在对利益相关者进行广泛咨询之后，采用了这种审议。在2023年2月至9月之间，CRE组织了五个主题研讨会向公众开放，然后在2023年7月26日至2023年10月9日就ATRT8关税1进行了公众咨询。收到了36（36）个响应，并在CRE的网站上发布了非相互响应。在此咨询之后，CRE与供应商及其协会，消费者协会，许可当局和地方当局组织了三个圆桌会议，就CRE的气体分配，运输和存储关税指南。最后，CRE采访了汽油运输网络（GRT），Grtgaz和Teréga的经理，及其股东及其股东。
使用自回归语言模型设计现实的监管DNA
顺式调节元件（CRE），例如启动子和增强子，是调节基因表达的DNA序列。CRE的活性受到序列基序的顺序，组成和间距的影响，这些序列基序被称为转录因子（TFS）结合的序列基序。合成CRE具有特定特性。在这里，我们提出了Reglm，这是一个设计具有所需属性的合成CRE的框架，例如高，低或细胞类型 - 特定活动，并使用自回归语言模型与有监督的序列到功能模型结合。我们使用框架设计合成酵母启动子和细胞类型 - 特定的人类增强剂。我们证明，我们方法产生的合成CRE不仅被预测具有所需的功能，而且还包含类似于实验验证的CRE的生物学特征。reglm因此促进了现实的调节DNA元素的设计，同时提供了对顺式调节代码的见解。
肠道微生物组动力学和肠杆菌感染肝移植受者：一种前瞻性观察性研究
的影响和含义对与耐碳青霉烯肠杆菌（CRE）定植和感染相关的肝移植受体中肠道微生物（GM）的时间动力学知之甚少。与没有感染的CRE载体或其他微生物感染或没有感染和CRE定殖的患者相比，用CRE和发育感染的患者的GM结构和功能似乎是不同的。在发生感染的CRE携带者中，甚至在肝移植之前就观察到了能够促进整体宿主健康的细菌和代谢途径的较高比例的细菌和代谢途径。因此，回移通用通用汽车的培养可以改善患者的层次和风险预测，并指导早期基于GM的干预策略，以减少感染并发症并改善整体预后。
CRISPR/Cas 介导的顺式调控元件编辑用于作物改良
为了提高未来的农业生产，需要重大技术进步来提高作物的产量和单产。通过成簇的规律间隔短重复序列/CRISPR 相关蛋白 (CRISPR/Cas) 系统靶向基因的编码区已经很成熟，并能够快速产生无转基因植物，从而改善作物。CRISPR/Cas 系统的出现还使科学家能够实现顺式调控元件 (CRE) 编辑，从而设计内源性关键 CRE 来调节靶基因的表达。最近的全基因组关联研究已经确定了天然 CRE 变体的驯化以调节复杂的农学数量性状，并允许通过 CRISPR/Cas 系统对其进行工程改造。虽然工程植物 CRE 有利于驱动基因表达，但其实际应用仍存在许多限制。在这里，我们回顾了 CRE 编辑的当前进展，并提出了未来有效靶向 CRE 进行转录调控以改良作物的策略。
PDE4D 细胞活性检测试剂盒
目录 #60505 描述 磷酸二酯酶 (PDE) 在 cAMP 和 cGMP 信号的动态调节中起着重要作用。PDE4D 具有 3',5'-环-AMP 磷酸二酯酶活性并降解 cAMP。PDE4D 抑制剂抑制其活性会导致细胞内 cAMP 水平升高。PDE4D 基因编码至少 9 种不同的异构体，与中风、哮喘、心律失常和心肌病有关，使其成为重要的治疗靶点。PDE4D 细胞活性检测旨在筛选培养细胞中的 PDE4D7 抑制剂。该检测基于用 CRE 荧光素酶报告基因转染细胞。CRE 报告基因包含受 cAMP 反应元件 (CRE) 控制的萤火虫荧光素酶基因。细胞内 cAMP 升高会激活 CRE 结合蛋白 (CREB) 以结合 CRE 并诱导荧光素酶的表达。福斯高林常用于提高细胞生理学研究中的细胞内 cAMP 水平。当用 CRE 报告基因瞬时转染的细胞被福斯高林激活时，细胞内 cAMP 水平上调，从而诱导 CRE 荧光素酶报告基因的表达。然而，当细胞用 PDE4D7 表达载体和 CRE 报告基因共转染时，福斯高林诱导的 cAMP 水平降低，导致荧光素酶表达水平降低。当用 PDE4D 抑制剂处理细胞以抑制 PDE4D7 活性时，cAMP 水平恢复，导致荧光素酶活性更高。该试剂盒包括 CRE 荧光素酶报告基因（预混有组成性表达的 Renilla（海三色堇）荧光素酶载体，作为转染效率的内部对照）、PDE4D7 表达载体和福斯高林。应用
dphil在心血管科学中
该计划通过访问教学课程和高级水平研讨会，在对心脏和血管生物学的研究中为您提供扎实的基础，以及包括大约70名主要研究人员直接从事心血管研究的项目的选择。这些涵盖了心血管科学的各个方面，包括心脏成像，细胞信号，临床试验和人类遗传学，发育生物学和再生医学，心肌生物学，综合生理学和血管生物学。在不同部门和研究主题之间和研究主题之间进行了多次合作，并且由英国心脏基金会卓越基金会卓越基金会（CRE）奖（CRE）奖（CRE）奖（CRE）奖（英国仅有的六项）大大提高和促进了研究互动。