货号 产品名称 规格 价格 CMM7001 LaboPass™ 1kb Labo DNA Ladder 100 µl x5 (100 lane) ¥33,600 CMM7002 LaboPass™ 1Kb Labo plus DNA Ladder 100 µl x5 (100 lane) ¥42,000 CMM7004 LaboPass™ 100bp Labo DNA Ladder 100 µl x5 (100 lane) ¥16,600 CMM7005 LaboPass™ 100bp Labo plus DNA Ladder 100 µl x5 (100 lane) ¥29,600 NT010 LaboPass™ dATP 100 mM, 1 ml ¥10,700 NT020 LaboPass™ dCTP 100 mM, 1 ml ¥10,700 NT030 LaboPass™ dGTP 100 mM,1 ml ¥10,700 NT040 LaboPass™ dTTP 100 mM,1 ml ¥10,700 NT070 LaboPass™ dUTP 100 mM,1 ml ¥10,800 NT050 LaboPass™ dNTP 套装各 100 mM,0.25 ml ¥37,300 NT060 LaboPass™ dNTP 混合物各 2.5 mM,0.5 ml x2 ¥27,400
8%聚丙烯酰胺凝胶。cDNA(-0.5 tg)范围为550至1500个碱基对,通过电装饰回收。使用末端脱氧核苷酸转移酶(20)与脱氧残基一起扩展了20 ng等分试样,并用PST I裂解并用Deoxyg残基尾巴(20)将PBR322的100 ng退火100 ng。通过公开的程序(23),使用退火的混合物用于转化大肠杆菌K-12菌株294(22)。制备诱导和未诱导的32P-CDNA探针。5 Zg的12S mRNA与2个寡核酸(DT)12-18(协作研究)或每个合成引物池(FIB 1至FIB 6)的2 Ig合并,在10mm Tris-HCl(pH 8),1 mm EDTA中。将混合物煮沸3分钟,然后在冰上淬火。60 ul of 40 mM Tris-HCl (pH 8.3), 40 mM KCl, 16mM MgCl2, 60 mM o-mercaptoethanol, 1 mM dATP, dGTP, dTTP and 5 x 10 7M (Q-32P) dCTP (Amersham, 2,000 - 3,000 Ci/mmole) was added to each template-primer mix at OC.在添加100个AMV逆转录酶后,将反应在42%C下孵育30分钟,并通过超过10 ml Sephadex G-50列的通道纯化。产品用
概述此文档解决了酶替代疗法用于腺苷脱氨酶缺乏症的使用。这种遗传性疾病导致缺乏功能性腺苷脱氨酶(ADA),这是一种负责腺苷底物代谢的酶。这些底物的浓度增加会导致各种器官系统的不利影响,最著名的是免疫系统。ADA缺乏通常会导致严重的合并免疫缺陷(SCID),其在生命的头几个月中呈现T-,B-和自然杀手(NK)细胞功能障碍。可以通过新生儿筛查,基因检测或对实验室结果的评估进行诊断。标志性实验室发现包括裂解性红细胞或干血点中没有ADA活性,以及红细胞中脱氧腺苷三磷酸(DATP)水平的明显增加(也被测量为DAXP)。ADA缺乏还会导致红细胞的ATP浓度显着降低,缺乏或极低水平的红细胞中的s-腺苷 - 腺苷半胱氨酸水解酶,腺苷和2'-脱氧腺苷的增加,尿液,血浆和干燥的血液斑点。对ADA-SCID的治疗涉及酶替代疗法(ERT)和造血干细胞移植(HSCT)或在基因治疗研究中的招募。ADA-SCID的基因疗法在美国仍在研究中。hsct是最广泛可用的选择的确定治疗方法。最成功的移植物发生在匹配的兄弟姐妹和匹配的家庭捐助者(MSD/MFD)中。根据基于共识的准则(Grunebaum 2023),所有患者均应接受ERT(即Revcovi)诊断后,然后用MSD/MFD HSCT(或可能是基因治疗)进行明确治疗。如果临床稳定,则有些患者可能会立即进行MSD/MFD HSCT,如果可诊断。否则,在大多数患者进行HSCT之前,可以将ERT用作相对较短的(长达几年)的“桥梁”(如果有)。如果确定治疗没有可用或失败,则可以继续或重新生效ERT。adagen(Pegademase牛)是FDA批准的第一个ERT,不再是商业上可用的。它是源自牛组织的,对可靠和一致的生产提出了挑战。Revcovi(Elapegademase-LVLR)是基于牛氨基酸序列的重组腺苷脱氨酶。Revcovi成功替代了不足的ADA,以提供一致稳定的ADA活动。由于肌肉内给药,因此不应在严重的血小板减少症患者中使用。密切的临床监测对于所有接受ERT的患者都很重要,尤其是在长期持续的情况下。由于潜在的疾病机制,依从性差和/或对药物中和抗体的发展,可能会继续使用免疫力。
全基因组测序和分析 - 基于 Illumina Rhabdoid (RT) Illumina 基因组板的文库构建(350-450bp 插入大小):将 96 孔格式的 2ug 基因组 DNA 通过 Covaris E210 超声处理 30 秒进行碎裂,使用 20% 的“占空比”和 5 的“强度”。双端测序文库是按照 BC 癌症机构基因组科学中心 96 孔基因组 ~350bp-450bp 插入 Illumina 文库构建协议在 Biomek FX 机器人(Beckman-Coulter,美国)上准备的。简单来说,DNA在96孔微量滴定板中用Ampure XP SPRI 珠子纯化(每60uL DNA 40-45uL 珠子),在单一反应中分别用T4 DNA聚合酶、Klenow DNA聚合酶和T4多核苷酸激酶进行末端修复和磷酸化,然后用Ampure XP SPRI 珠子进行清理,并用Klenow片段(3'到5'外显子减去)进行3' A加尾。用Ampure XP SPRI 珠子清理后,进行picogreen定量以确定下一步接头连接反应中使用的Illumina PE接头的数量。使用 Ampure XP SPRI 珠子纯化接头连接产物,然后使用 Illumina 的 PE 索引引物组,用 Phusion DNA 聚合酶(美国赛默飞世尔科技公司)进行 PCR 扩增,循环条件为:98˚C 30 秒,然后 6 个循环,98˚C 15 秒,62˚C 30 秒,72˚C 30 秒,最后在 72˚C 延伸 5 分钟。使用 Ampure XP SPRI 珠子纯化 PCR 产物,并使用高灵敏度分析(美国珀金埃尔默公司)用 Caliper LabChip GX 检查 DNA 样本。所需大小范围的 PCR 产物经过凝胶纯化(在内部定制机器人中使用 8% PAGE 或 1.5% Metaphor 琼脂糖),并使用 Agilent DNA 1000 系列 II 检测和 Quant-iT dsDNA HS 检测试剂盒使用 Qubit 荧光计(Invitrogen)评估和量化 DNA 质量,然后稀释至 8nM。在使用 v3 化学法在 Illumina HiSeq 2000/2500 平台上生成 100bp 配对末端读数之前,通过 Quant-iT dsDNA HS 检测确认最终浓度。全基因组亚硫酸盐-Seq 文库构建和测序:使用 1-5 mg Qubit(Life Technologies,加利福尼亚州卡尔斯巴德)定量基因组 DNA 进行文库构建,如所述(Gascard 等人,2015 年)。为了追踪亚硫酸盐转化的效率,将 1 ng 未甲基化的 lambda DNA (Promega) 掺入使用 Qubit 荧光法定量的 1 µg 基因组 DNA 中,并排列在 96 孔微量滴定板中。使用 Covaris 超声处理将 DNA 剪切至 300 bp 的目标大小,并使用 DNA 连接酶和 dNTP 在 30o C 下对片段进行末端修复 30 分钟。使用 2:1 AMPure XP 珠子与样品比例纯化修复后的 DNA,并在 40 µL 洗脱缓冲液中洗脱以准备 A 尾;这涉及使用 Klenow 片段和 dATP 将腺苷添加到 DNA 片段的 3' 端,然后在 37o C 下孵育 30 分钟。用磁珠清理反应后,将胞嘧啶甲基化双端接头(5'-AmCAmCTmCTTTmCmCmCTAmCAmCGAmCGmCTmCTTmCmCGATmCT-3' 和 3'-GAGmCmCGTAAGGAmCGAmCTTGGmCGAGAAGGmCTAG-5')在 30oC 下连接到 DNA 20 分钟,并纯化接头两侧的 DNA 片段珠。在亚硫酸盐转化之前,用 10 个 PCR 循环扩增一份文库片段,并在 Agilent Bioanalyzer 高灵敏度 DNA 芯片上进行大小测定。扩增子的长度在 200-700 bp 之间。使用 EZ Methylation-Gold 试剂盒(Zymo Research)按照制造商的方案实现甲基化接头连接的 DNA 片段的亚硫酸盐转化。五次循环
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