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MDCK 悬挂平台 - 数据表
市场上首个经过鉴定的单克隆 MDCK 悬浮细胞系 MDCK 细胞于 1958 年从一只成年雌性可卡犬的肾脏中分离出来。MDCK 细胞被认为是获得流感病毒原代分离物最合适的培养细胞基质。此外，它们已被证明是大规模流感病毒生产的理想选择，与其他细胞系相比，病毒复制速度更快。¹ 尽管如此，疾病控制和预防中心 (CDC) 估计，大约 80% 的流感疫苗是在祖传鸡蛋平台上生产的，其余的则是使用基于细胞或重组的技术生产的。²
迈向具有MDCK悬浮细胞的疫苗候选疫苗的综合生产
图1在三个平行生物反应器中培养的IAV产生的MDCK悬浮液细胞。生存的细胞浓度（A），可行的细胞体积（B），生存力（C）和平均细胞直径（D）。细胞浓度（a）和细胞体积（b）拟合到指数级生长函数（曲线），以确定特定的生长速率。垂直线表示感染时间，其中细胞悬浮液的稀释量稀释了一半。str1（■），str2（•），str3（▲）。iav，流感病毒； MDCK，MADIN - DARBY犬肾
扩展流出体外检测工具箱：CRISPR-Cas9 编辑的 MDCK 细胞系，具有人类 BCRP 且完全缺乏犬 MDR1
乳腺癌耐药蛋白 (BCRP) 是药物效应和药物相互作用中的关键转运蛋白。然而，多药耐药蛋白 1 (MDR1) 的内源性表达混淆了体外模型中 BCRP 介导转运的解释。在这里，我们使用 CRISPR-Cas9 编辑的 Madin-Darby 犬肾 (MDCK) II 细胞系 (MDCK cMDR1-KO ) 来稳定表达人类 BCRP (hBCRP)，而没有内源性犬 MDR1 (cMDR1) 表达 (MDCK-hBCRP cMDR1-KO )。靶向定量蛋白质组学验证了 hBCRP 的表达，整个蛋白质组的整体分析证实了其他药物转运蛋白或代谢酶的背景表达为零或非常低。这种新的细胞系具有与 MDCK cMDR1-KO 和之前建立的过表达人类 MDR1 (hMDR1) 的相应细胞系 MDCK-hMDR1 cMDR1-KO 相似的蛋白质组。对 MDCK- hBCRP cMDR1-KO 的功能研究证实了高 hBCRP 活性。MDCK-hBCRP cMDR1-KO 细胞系与 MDCK-hMDR1 cMDR1-KO 一起轻松准确地识别了 hBCRP 和 hMDR1 转运蛋白的共享或特定底物。这些细胞系为药物开发中评估药物效应和药物间相互作用提供了新的、改进的体外工具。© 2020 美国药剂师协会®。由 Elsevier Inc. 出版。这是一篇根据 CC BY 许可 (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/) 开放获取的文章。
技术数据表：MDCK.STAT1KO
图 1：STAT1 KO MDCK 细胞中产生的甲型流感病毒 (H1N1；ATCC ® VR-1736 ™)。 (A) WT 亲本和 MDCK.STAT1 KO 细胞产生的病毒上清液的免疫染色 TCID 50。 细胞以 0.01 的 MOI 感染甲型流感病毒。 感染后 48 小时收集上清液，并按照指示的稀释度重新感染 WT MDCK 细胞。 绿色 - 抗甲型流感病毒染色，蓝色 - 核染色。 细胞以 0.01 的 MOI 感染甲型流感病毒 48 小时，然后 (B) 计算感染后 48 小时 MDCK.STAT1KO 细胞中产生的甲型流感病毒上清液的 TCID 50。 (C) 感染后 48 小时 MDCK.STAT1KO 细胞中产生的甲型流感病毒基因组的 RT-PCR 定量。