最初的PCR要求包括100至35000个碱基对的目标DNA,与靶DNA互补并与靶DNA区域结合,二价阳离子(MG 2+),缓冲溶液,脱氧核糖核苷酸,例如DATP,DATP,DCTP,DCTP,DGTP和DTTP,dttp和Prospective Bases。DNA聚合酶是从深海中发现的细菌中分离出的必需酶。因此,该酶通常被称为TAQ聚合酶。该酶的优点是它是热稳定的。也就是说,它可以承受高达95 O的温度上升。查看图8.2,了解执行聚合酶链反应的步骤。用于执行PCR的仪器被称为热环生(图8.3)。建议学习者在给定的链接
产品名称:LongAmp® Hot Start Taq 2X Master Mix 目录编号:M0533L 浓度:2 X 浓缩物 包装批号:10264389 到期日:03/2026 储存温度:-20°C 规格版本:PS-M0533S/L v2.0 成分 (1X):60 mM Tris-SO4(pH 9.1 @ 25°C)、20 mM (NH4)2SO4、2 mM MgSO4、0.3 mM dATP、0.3 mM dCTP、0.3 mM dGTP、0.3 mM dTTP、3% 甘油、0.06% IGEPAL® CA-630、0.05% Tween® 20、125 单位/毫升 LongAmp® Hot Start Taq DNA 聚合酶
体积 *试剂最终浓度12.5μlPPP主混合1倍PPP主混合物不含MGCL 2(75 mm Tris-HCl,pH 8.8,无MGCL 2(25 O C),20 mm,20 mm(NH 4)2 sO 4,0.01%,0.01%Tween 20,200μmDatp,200μmDctp,200μmDctp,200μmdgn,200μmdgn,theq,200μmdnumtheq,theq,200μmdnumtheq,theq,200μmdnumtheq,theq deq deq deq deq deq deq deq deq deq deq deq deq deq deq deq 200 m少量增长很高。 polymerase, stabilizers and additives) 2.5 μl 25 mM MgCl 2 2.5 mM MgCl 2 1 μl Forward primer 0.1 - 1 μM (~ 20 bases in length) 1 μl Reverse primer 0.1 - 1 μM (~ 20 bases in length 1 μl Template DNA 7 μl PCR H 2 O to a final volume 25 μl *Different volumes can be used, but PPP Master Mix without MGCL 2最终应稀释两次
Reagent/Material Vendor Stock Number Molecular grade H20 Sigma-Aldrich W4502 * GoTaq® G2 Colorless Master Mix Promega M7833 DNeasy® Tissue Kit Qiagen 69506 Agarose Sigma-Aldrich A9414 1kb+ DNA ladder Life Technologies 10787-018 SYBR SAFE DNA stain Life Technologies S33102 100% ETOH Gold Shield Chemicals DSP-CA-151 *GOTAQ®G2无色主混合混合物是一种预混合的现成溶液,其中含有GOTAQ®G2DNA聚合酶,DNTP,MGCL2和反应缓冲液,可在最佳浓度下以PCR有效地放大DNA模板。GOTAQ®G2DNA聚合酶表现出5´→3´外切核酸酶活性。gotaq®G2无色主混合物,2x:GoTaq®G2DNA聚合酶在2x无色GOTAQ®G2反应缓冲液(pH 8.5),400μMDATP,400μMDGTP,400μMDCTP,400μMDCTP,400μMDTTP和3MM DTTP和3MM MGCL2中提供。
货号 产品名称 规格 价格 CMM7001 LaboPass™ 1kb Labo DNA Ladder 100 µl x5 (100 lane) ¥33,600 CMM7002 LaboPass™ 1Kb Labo plus DNA Ladder 100 µl x5 (100 lane) ¥42,000 CMM7004 LaboPass™ 100bp Labo DNA Ladder 100 µl x5 (100 lane) ¥16,600 CMM7005 LaboPass™ 100bp Labo plus DNA Ladder 100 µl x5 (100 lane) ¥29,600 NT010 LaboPass™ dATP 100 mM, 1 ml ¥10,700 NT020 LaboPass™ dCTP 100 mM, 1 ml ¥10,700 NT030 LaboPass™ dGTP 100 mM,1 ml ¥10,700 NT040 LaboPass™ dTTP 100 mM,1 ml ¥10,700 NT070 LaboPass™ dUTP 100 mM,1 ml ¥10,800 NT050 LaboPass™ dNTP 套装各 100 mM,0.25 ml ¥37,300 NT060 LaboPass™ dNTP 混合物各 2.5 mM,0.5 ml x2 ¥27,400
8%聚丙烯酰胺凝胶。cDNA(-0.5 tg)范围为550至1500个碱基对,通过电装饰回收。使用末端脱氧核苷酸转移酶(20)与脱氧残基一起扩展了20 ng等分试样,并用PST I裂解并用Deoxyg残基尾巴(20)将PBR322的100 ng退火100 ng。通过公开的程序(23),使用退火的混合物用于转化大肠杆菌K-12菌株294(22)。制备诱导和未诱导的32P-CDNA探针。5 Zg的12S mRNA与2个寡核酸(DT)12-18(协作研究)或每个合成引物池(FIB 1至FIB 6)的2 Ig合并,在10mm Tris-HCl(pH 8),1 mm EDTA中。将混合物煮沸3分钟,然后在冰上淬火。60 ul of 40 mM Tris-HCl (pH 8.3), 40 mM KCl, 16mM MgCl2, 60 mM o-mercaptoethanol, 1 mM dATP, dGTP, dTTP and 5 x 10 7M (Q-32P) dCTP (Amersham, 2,000 - 3,000 Ci/mmole) was added to each template-primer mix at OC.在添加100个AMV逆转录酶后,将反应在42%C下孵育30分钟,并通过超过10 ml Sephadex G-50列的通道纯化。产品用