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cas9-dcas9-vpr-稳定细胞系技术- ...
Pen/Strep：青霉素/链霉素 RPMI 1640：Roswell Park Memorial Institute 培养基（Thermo Fisher，目录号 21875-034） DMEM/F-12：杜氏改良 Eagle 培养基/营养混合物 F-12（Thermo Fisher，目录号 31330-038） IMDM：Iscove 改良杜氏培养基（Thermo Fisher，目录号 21980-032） DMEM，高葡萄糖：杜氏改良 Eagle 培养基，高葡萄糖（Thermo Fisher，目录号 41965-039） DMEM，高葡萄糖，GlutaMAX TM：杜氏改良 Eagle 培养基，高葡萄糖（Thermo Fisher，目录号 61965-026）
从头设计和开发富含细胞培养模型的体内肺灌注富含营养的灌注液
摘要：离体肺灌注（EVLP）通过在移植前评估“边缘”肺而增加了供体肺的利用。要将其作为供体肺部修复平台开发，需要长时间的EVLP，并且需要新的灌注液以提供足够的营养支持。人类肺微血管内皮细胞和上皮细胞用于测试不同的公式以获得基本的细胞功能。在EVLP细胞培养模型上进一步测试了选定的公式，并测量了细胞的效果，凋亡以及GSH和HSP70水平。将细胞培养基（DMEM）与当前的EVLP灌注液混合时，以剂量依赖性的方式将细胞增强的溶液，DMEM增强的细胞增强和迁移以及减少的凋亡。根据DMEM设计和测试了一种新的EVLP灌注液。最终公式包含5 g/L dextran-40和7％白蛋白，被称为D05D7A解决方案。与Steen溶液相比，它抑制了冷静态储存和温暖的再灌注诱导的细胞凋亡，改善的细胞增强性以及人类肺细胞中的GSH和HSP70水平。基于富含营养的EVLP灌注液可能是延长EVLP并支持供体肺修复，重新调节并进一步改善供体肺质量和数量的供体肺部修复的有前途的公式。
SOP_MTL-1.2 冷冻培养基
污染。5.2. 接下来，小心不要倾斜滤瓶，因为它现在上重下轻。6. 使用 50 mL 血清移液器，将 250 mL FBS 转移到 DMEM 中。丢弃移液器。7. 使用 25 mL 血清移液器，将 50 mL DMSO 转移到 DMEM/FBS 中。丢弃移液器。7.1. 确保最后添加 DMSO，因为如果先添加，它会溶解过滤器。8. 将真空软管连接到过滤器侧面的喷嘴上，然后打开真空。9. 一旦所有培养基都过滤到底部瓶子中，拧下过滤器并将其丢弃在生物危害垃圾中。10. 使用 50 mL 移液器，将 50 mL 冷冻培养基分装到十个 50 mL 锥形管中。11. 在管子上贴上培养基配方、培养基制作日期和有效期的标签。 这
HPV 血清学实验室 SOP 模板
试剂部分 # 5X 洗涤缓冲液 10 1X 洗涤缓冲液 11 HPV 包被缓冲液 12 DPBS 和 0.2% TWEEN® 20 (DPBS_0.2T) 13 2N H 2 SO 4 14 0.36NH 2 SO 4 15 柠檬黄溶液 16 293TT 解冻培养基 (293TT TM) 17 293TT 维持培养基 (293TT MM) 18 293TT 冷冻培养基 (293TT FM) 19 70% 乙醇 20 293TT VLP/PsV 转染培养基 (DMEM-TF/DMEM-10A) 21 293TT VLP 转染混合培养基 (DMEM 2%) 用于 Transporter 5 22 293TT VLP 转染混合培养基 (DMEM SF) 用于 PEI 23 DPBS-MGCl 2 10mM A/A (DPBS_MgCl_AA) 24 10% Brij58 25 DPBS/0.8M 盐缓冲液 (DPBS_0.8M) 26 46% OptiPrep 27 27% OptiPrep 28 33% OptiPrep 29 39% OptiPrep 30 293TT 假病毒中和试验培养基 (PBNA_M) 31 1M 硫酸铵 32 HPV VLP 转染裂解缓冲液 33 HPV 假病毒 (PsV) 转染裂解缓冲液 34 DPBS+1%BSA (稀释剂) 35 10% TWEEN® 20 (10_T20) 36 PBS+0.05% TWEEN® 20 (PBS_0.05T) 37 PEI 含5% 葡萄糖 (PEI) 38 DPBS/0.5M 盐缓冲液 (DPBS_0.5M) 39 50 MG Sulfo-NHS 40 DPBS+1% Triton X-100 (DPBS_1%TX) 41 50mM MES 42 组氨酸储存缓冲液 43 鞘液 44 PBST-BSA 缓冲液 (PBST_BSA_PAK) 使用干粉包 45 PBST-BSA 缓冲液 (PBST_BSA) 46 PBS+0.05% TWEEN® 20 (Luminex_Wash) 47 板涂层 48 封闭缓冲液 49 Luminex 珠储存缓冲液 50
癌细胞系中代谢途径依赖性的景观
图1。基因表达和CRISPR基因依赖性的整合以鉴定代谢途径依赖性。a）示意图概述了遗传途径依赖性富集分析（遗传PDEA）的方法。CCLE的癌细胞系首先通过培养类型（粘附，悬浮液）和培养基（RPMI，DMEM）进行分层，然后使用单样本GSEA（SSGSEA）推断其代谢途径活性。将所得的途径活性与基因依赖性整合在一起，以评估与代谢途径活性的关联。b-c）模拟数据（请参阅方法）用于评估遗传PDEA方法的灵敏度。热图代表每个添加每个梯度时的显着结果百分比。添加到表达梯度中的值与添加到依赖梯度的值相比，相关系数和遗传性PDEA结果稍强。
波蒂奇健康基金会
材料与方法 使用 Lightning-Link 试剂盒 (ab201807, Abcam plc., 英国剑桥) 将 HRP 与白蛋白结合，并通过蛋白质印迹法确定结合是否成功。在 DMEM 中使用 316L 不锈钢和纯镁圆盘进行浸没实验。成像是通过将圆盘从培养基中取出并在空气中干燥圆盘，然后将增强化学发光 (ECL) 底物直接添加到金属表面来进行的。通过使用 Azure 600 (Azure Biosystems Inc., 都柏林 CA) 在表面进行化学发光成像，ECL 和吸附的结合蛋白的反应可以指示吸附的蛋白质量。随后清洗表面以去除剩余的底物并返回浸没溶液以在多个时间点继续研究动态表面。
RNA 引导的 AsCas12a 和 SpCas9 催化敲除...
寡核苷酸和基于序列的试剂 PCR 引物 本研究 从 IDT ssODN 合成 Ittiprasert 等人，2019 年和本研究 Ultramer DNA Oligos， 从 IDT 合成向导 RNA Ittiprasert 等人，2019 年和本研究 从 IDT 合成 化学品、酶和其他试剂 Alt-R® CRISPR-Sp HiFi Cas9 酶 V3 Integrated DNA Technologies 1081060 Alt-R® CRISPR-AsCas12a 酶 V3 Integrated DNA Technologies 1081068 DNAzol® ES 试剂 Molecular Research Center DN127 RNAzol® RT 试剂 Molecular Research Center RN190 Opti-MEM FisherScientific Gibco™ 31985062 DMEM FisherScientific 88364 胎牛血清 FisherScientific Gibco™ 26140079 100x 青霉素-链霉素-两性霉素 B FisherScientific SV30079.01 NucleoSpin® 凝胶和 PCR 纯化 Takara 740609
下一代防辐射太空服
缩写 定义 3D 三维 ABS 丙烯腈-丁二烯-苯乙烯 AC 交流电 ALARA 尽可能低的合理值 AMF 增材制造设施 ARS 急性辐射综合症 BER 碱基切除修复 CME 日冕物质抛射 CNT 碳纳米管 CRS 慢性辐射综合症 DAP 剂量面积乘积 DAPI 4',6-二氨基-2-苯基吲哚 DC 直流电 DEP 介电泳 DMEM 杜氏改良鹰培养基 DNA 脱氧核糖核酸 DSB 双链断裂 EDTA 胰蛋白酶-乙二胺四乙酸 EMU 舱外机动装置 ESA 欧洲航天局 ESD 静电放电 EVA 舱外活动 GCR 银河宇宙辐射 Gy 格雷 HDBPE 高密度硼化聚乙烯 HDPE 高密度聚乙烯 HZE 高电荷 Z 和高能 ICRP 国际委员会放射防护 ICRU 国际辐射单位与测量委员会
Lipografter®系统在...
从Lipografter®系统中表征脂肪酸的脂肪酸盐过量的脂肪酸盐被置于无菌50ml离心管中，并运送到MTF生物制剂以进行表征。在1倍磷酸盐缓冲盐水（PBS）中洗涤脂肪酸2-3次，直到组织颜色为淡黄色。添加了涉及0.1％胶原酶型IA溶液（Sigma-Aldrich Inc.，GA）的修改隔离方案2后，添加了一个修改的隔离方案2，并在37ºC的水浴中孵育2小时（在搅拌下）。消化后，组织显得光滑，胶原酶消化被相等的维护培养基灭活，由DMEM/F12，10％胎牛血清（FBS）和1％青霉素/链霉菌素/链霉菌素（Fisher Scientific，PA）组成。然后将溶液离心以收集SVF颗粒。然后将SVF颗粒重悬于氯化铵溶液中，并在室温下孵育10分钟，以帮助裂解红细胞。最后，将溶液离心以隔离