图 1. 有效去除宿主基因组 DNA,同时不降低噬菌体 DNA 产量。使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒从四种富集噬菌体培养物中分离总 DNA。在添加提供的裂解缓冲液之前进行 DNase I 预处理。简而言之,将 20 单位 DNase I 添加到 1 mL 富集噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育 20 分钟。DNAase I 处理后,按照程序进行。作为对照,使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒从相同 4 种培养物的等分试样中分离 DNA,而无需进行 DNase I 处理。对于 DNA 分析,将每 50 µL 洗脱液中的 10 µL 上样到 1X TAE 琼脂糖凝胶上。可以看出,噬菌体 DNA 被其外壳蛋白安全地保护起来,免受 DNase I 处理的影响,而宿主基因组 DNA 则被 DNase I 有效降解。因此,DNase I 预处理导致最终噬菌体洗脱中宿主 gDNA 污染较少,而不会影响总噬菌体 DNA 产量。M 号泳道为 Norgen 的 Highranger 1 kb DNA Ladder(货号 11900)
图 1. 有效去除宿主基因组 DNA,且不降低噬菌体 DNA 产量。使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒从四种富集噬菌体培养物中分离总 DNA。在添加提供的裂解缓冲液之前进行 DNase I 预处理。简而言之,将 20 单位 DNase I 添加到 1 mL 富集噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育 20 分钟。DNAase I 处理后,遵循该程序。作为对照,使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒从相同 4 种培养物的等分试样中分离 DNA,而不进行 DNase I 处理。对于 DNA 分析,将每 50 µL 洗脱液中的 10 µL 上样到 1X TAE 琼脂糖凝胶上。可以看出,噬菌体 DNA 被其外壳蛋白安全地保护起来,免受 DNase I 处理的影响,而宿主基因组 DNA 则被 DNase I 有效降解。因此,DNase I 预处理导致最终噬菌体洗脱中宿主 gDNA 污染较少,而不会影响总噬菌体 DNA 产量。M 号泳道为 Norgen 的 Highranger 1 kb DNA Ladder(货号 11900)。
图1。有效的宿主基因组DNA去除,而无需降低噬菌体DNA产量。 使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从四个富集的噬菌体培养物中分离总DNA。 在添加提供的裂解之前,进行了DNase I预处理。 布里液,将20单位的DNase I添加到1 ml富集的噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育20分钟。 DNAase I处理后,遵循该过程。 作为对照,使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从相同4个培养物的等分试样中分离DNA,而无需进行DNase I处理。 进行DNA分析,将10 µL的每50 µL洗脱加载到1x TAE琼脂糖凝胶上。 可以看出,噬菌体DNA被其外套蛋白安全地保护了DNase I治疗,而宿主基因组DNA则被DNase I有效降解。 因此,DNase I预处理导致最终噬菌体洗脱中的宿主GDNA污染较少,而不会影响总噬菌体DNA产量。 车道M是Norgen的Highranger 1 Kb DNA梯子(Cat。 11900)。有效的宿主基因组DNA去除,而无需降低噬菌体DNA产量。使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从四个富集的噬菌体培养物中分离总DNA。在添加提供的裂解之前,进行了DNase I预处理。布里液,将20单位的DNase I添加到1 ml富集的噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育20分钟。DNAase I处理后,遵循该过程。作为对照,使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从相同4个培养物的等分试样中分离DNA,而无需进行DNase I处理。进行DNA分析,将10 µL的每50 µL洗脱加载到1x TAE琼脂糖凝胶上。可以看出,噬菌体DNA被其外套蛋白安全地保护了DNase I治疗,而宿主基因组DNA则被DNase I有效降解。因此,DNase I预处理导致最终噬菌体洗脱中的宿主GDNA污染较少,而不会影响总噬菌体DNA产量。车道M是Norgen的Highranger 1 Kb DNA梯子(Cat。11900)。
图 1. 有效去除宿主基因组 DNA,同时不降低噬菌体 DNA 产量。使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒从四种富集噬菌体培养物中分离总 DNA。在添加提供的裂解缓冲液之前进行 DNase I 预处理。简而言之,将 20 单位 DNase I 添加到 1 mL 富集噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育 20 分钟。DNAase I 处理后,按照程序进行。作为对照,使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒从相同 4 种培养物的等分试样中分离 DNA,而无需进行 DNase I 处理。对于 DNA 分析,将每 50 µL 洗脱液中的 10 µL 上样到 1X TAE 琼脂糖凝胶上。可以看出,噬菌体 DNA 被其外壳蛋白安全地保护起来,免受 DNase I 处理的影响,而宿主基因组 DNA 则被 DNase I 有效降解。因此,DNase I 预处理导致最终噬菌体洗脱中宿主 gDNA 污染较少,而不会影响总噬菌体 DNA 产量。M 号泳道为 Norgen 的 Highranger 1 kb DNA Ladder(货号 11900)
无人DNA的不包括人DNA(检测极限:小于2 pg DNA)。如果产品被单个人类细胞(例如皮肤中的细颗粒)污染,则可能导致假阳性结果。 这在诊断和法医医学领域尤其重要。不包括无DNase DNase。 DNase是一种分解DNA的酶。用DNase污染会影响DNA分析。不包括无RNase RNase。 RNase是一种分解RNA的酶,对高压灭菌和辐射具有极大的抗性。 PCR抑制剂(PCR抑制剂)不含它不包含显着损害PCR反应(抑制剂)的物质。重要的是,PCR反应中使用的消耗品不会包含不利影响反应的杂质。 这对于痕量遗传物质的扩增和定量PCR尤为重要。
准备工作:FRN缓冲液:将42毫升异丙型物添加到新的瓶子RPE缓冲液中:将44 ml EtoH添加到新瓶AW1缓冲液中:向新瓶AW2缓冲液添加25 ml EtoH:添加30 ml EtoH DNase I股票:550 µL无RNase rnase for lyophifiend dnase dnase i,Aliquot and ealiquot and aT -20个月
无人DNA的不包括人DNA(检测极限:小于2 pg DNA)。如果产品被单个人类细胞(例如皮肤中的细颗粒)污染,则可能导致假阳性结果。 这在诊断和法医医学领域尤其重要。不包括无DNase DNase。 DNase是一种分解DNA的酶。用DNase污染会影响DNA分析。不包括无RNase RNase。 RNase是一种分解RNA的酶,对高压灭菌和辐射具有极大的抗性。 PCR抑制剂(PCR抑制剂)不含它不包含显着损害PCR反应(抑制剂)的物质。重要的是,PCR反应中使用的消耗品不会包含不利影响反应的杂质。 这对于痕量遗传物质的扩增和定量PCR尤其重要。
核糖核酸酶测定DRR:在37°C下将10 µL DRR与160 ng 2 Kb RNA转录物一起孵育10 µL DRR后,检测到无污染的RNase。对于DNase I:在37°C下以160 ng的2KB RNA转录本与160 ng的2KB RNA转录本孵育5U后,未检测到污染RNase 4小时。
每毫升核酸。 在添加DNase I缓冲液和RDNase I之前将样品稀释至2μg核酸之前。 此外,RDNase I治疗可以分为两个步骤(请参阅第3页的“执行严格的DNase治疗”)。 如果不能稀释样品,只需将RDNase I的量增加到2–3μL(4-6 U)即可。 增加酶的量可能会成功从10–100μl反应中含有500μg/ml核酸的样品中成功去除污染的DNA。 然而,处理高浓缩核酸样品的功效取决于DNA污染的绝对水平,在35-40个周期后,PCR可能检测到残留的DNA。每毫升核酸。在添加DNase I缓冲液和RDNase I之前将样品稀释至2μg核酸之前。此外,RDNase I治疗可以分为两个步骤(请参阅第3页的“执行严格的DNase治疗”)。如果不能稀释样品,只需将RDNase I的量增加到2–3μL(4-6 U)即可。增加酶的量可能会成功从10–100μl反应中含有500μg/ml核酸的样品中成功去除污染的DNA。然而,处理高浓缩核酸样品的功效取决于DNA污染的绝对水平,在35-40个周期后,PCR可能检测到残留的DNA。