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转录援助T7高产量转录套件
描述Thermo Scientific™Transcriptaid™T7高收益转录套件设计用于来自含有T7 RNA聚合酶启动子的DNA模板的高产量在体外转录。该套件含有50 µL反应的试剂。取决于转录长度，每个反应在2小时内从1 µg模板中产生约150 µg RNA（图1），比常规体外转录反应中可实现的10倍。可以扩大反应以产生毫克量的全长RNA。该套件提供了用于转录反应，转录物加载和分析凝胶的所有组件。转录辅助酶混合物含有T7 RNA聚合酶，可方便地用重组Thermo Scientific™Ribolock™RNase抑制剂进行预混合，以确保RNA转录的完整性。dnase I，无RNase，用于有效去除转录反应后模板DNA。包括2x RNA载荷染料溶液为了方便RNA载荷。Thermo Scientific™Riboruler™RNA梯子，高范围，即用凝胶上的RNA尺寸和定量量化的辅助工具。ntps在单个管中提供，以合成非放射性标记的探针或限制的RNA的灵活性。
Panamax™血液DNA提取试剂盒
预期的使用Panamax™血液DNA提取试剂盒仅用于研究用途，结合使用Panamax™16或48仪器，使用二氧化硅-Magnetic Bead Technology的自动化系统，用于分离和纯化基因组DNA与人类全血的基因组DNA。该产品旨在由专业用户（例如技术人员和医生）使用，他们接受了用于研究使用目的的分子生物学技术培训；它旨在用于手动样本准备目的，并且不给出定性或定量的测试结果。原理和概述Panamax™血液DNA提取试剂盒用于人类全血的基因组DNA的自动核酸纯化。它使用良好的二氧化硅涂层磁珠技术来纯化小样品或大小的基因组DNA。该过程包括4个步骤（裂解，结合，洗涤和洗脱），并使用二氧化硅涂层的磁磁珠的选择性结合特性进行。套件含量•48 PANAMAX™血液DNA墨盒•12个磁性盖•2 x 1.2 ml蛋白酶K•1.2 ml peb•2 x 8.0 mL用户提供的围围设备和材料•Panamax™16或48个仪表和48个仪表和管子的•诸如Prefocessi ng ng ng的启动型材料•手套，保护礼服等警告和预防措施•仅用于研究。•请仔细阅读指令，并在使用前熟悉套件的所有组件。•可应要求提供材料安全数据表（MSD）。•到期日期后不要使用套件。试剂存储和处理•将套件存储在15 -30 o C中。该套件是稳定的，直到标记的到期日期为止。•处理任何试剂时，要戴眼外衣和一次性手套。避免将这些材料与皮肤，眼睛或粘膜接触。•请勿从不同的套件或批次中汇总试剂。•所有样本应像使用良好的实验室程序一样进行传染性处理。•建议使用无菌一次性移液器，无DNase的移液器尖端或无DNase配件，以降低污染的可能性。•小心，避免通过剧烈摇动试剂在溶液中形成气泡。•小心地将密封片剥去，使所有塑料都带到墨盒的顶部。•不要将墨盒带有密封纤维剥落的空气。长时间暴露于空气，导致溶液蒸发和溶液的变化pH值，可能会影响纯粹的效率。•所有解决方案均应无色和清晰。如果更改颜色或不透明的解决方案，请勿使用解决方案。
开发猪脱细胞外基质（DECM）生物学
摘要本研究旨在提出从猪半月板中提取DECM的易于扩展，具有成本效益的过程，该过程致力于生物互联制剂和3D生物打印。由于其软骨（例如结构和机械鲁棒性），弯月面是一种非常苛刻的组织，用于提取和脱落ECM。它的处理构成了很大的困难，并使以前针对软组织开发的方法无用。结合了均质化，水解，超临界二氧化碳（SCCO2）提取和冻干的过程，以应对这一挑战。该方案允许保留其天然化合物和生物相容性，同时提供良好的可打印性，并为细胞增殖和分化为半月板样表型提供刺激性环境。此外，此过程在经济和生态上很友好，因为它不需要使用大量溶剂，洗涤剂或昂贵的酶（DNase）。已经对脱细胞过程进行了精心研究，证明了DNA含量的大幅降低，但仍超过公认的阈值。这项研究进一步探讨了DECM的生物相容性，表明在扩展体外培养过程中，残留的DNA对细胞存活没有不利影响，表明出色的生物相容性。这些发现仅基于DNA含量，挑战了当前对脱细胞化有效性的定义，提出了对生物学作用的更广泛评估。
DNASE1L3 中的 Arg206Cys 替代导致 DNASE1L3 蛋白质分泌缺陷，从而增加系统性红斑狼疮的风险
摘要 目的 确定 DNASE1L3 中 Arg206Cys 替换的多态性是否解释了 DNASE1L3/PXK 基因位点与系统性红斑狼疮 (SLE) 的关联，并检查 Arg206Cys 序列变化对 DNASE1L3 蛋白功能的影响。方法 对来自 SLE 免疫芯片研究的具有欧洲血统的病例和对照进行 rs35677470 的条件分析，并比较基因型和单倍型频率。在表达重组和内源性 206Arg 和 206Cys 蛋白变体的 HEK293 细胞和单核细胞衍生树突状细胞的细胞和上清液中测量 DNASE1L3 蛋白水平。结果 rs35677470 的条件分析消除了主要单核苷酸多态性 (SNP) rs180977001 和 rs73081554 的 SLE 风险关联信号，发现这两个 SNP 标记的风险单倍型与 rs35677470 相同。SLE 风险基因型的适度效应大小（杂合风险 OR=1.14 和纯合风险等位基因 OR=1.68）表明 DNASE1L3 内切酶酶功能有所保留。在 rs35677470 条件化后，PXK（主要 SNP rs11130643）中的 SLE 保护信号仍然存在。DNASE1L3 206Cys 风险变异体保持酶活性，但人工和内源性 DNASE1L3 206Cys 蛋白的分泌显著减少。结论 DNASE1L3 基因座的 SLE 风险关联依赖于错义 SNP rs35677470，这导致 DNASE1L3 蛋白分泌减少，但不会消除其 DNase 酶功能。
超越双螺旋：金黄色葡萄球菌生物膜中细胞外DNA的多面景观
金黄色葡萄球菌形成的生物膜由嵌入由蛋白质，多糖，脂质和细胞外DNA（EDNA）的基质中的细胞组成。生物膜相关的感染很难治疗并可以促进抗生素耐药性，从而导致负面的医疗保健结果。edna有助于金黄色葡萄球菌的稳定性，生长和免疫渗透特性。edna是由自溶的释放的，自溶的是由murein水解酶介导的，这些水解酶通过霍林样蛋白形成的膜孔进入细胞壁。金黄色葡萄球菌的EDNA含量在单个菌株之间有所不同，并且受环境条件（包括存在抗生素的存在）影响。edna通过充当促进蛋白质细胞和细胞 - 细胞相互作用的静电网，在生物膜的发育和结构中起重要作用。由于埃德娜（Edna）在生物膜中的结构重要性及其在金黄色葡萄球菌分离株中的普遍存在，因此它是治疗剂的潜在靶标。用DNase处理生物膜可以消除或大大减少它们的大小。此外，靶向与EDNA结合并稳定的DNABII蛋白的抗体也可以分散生物膜。本综述讨论了有关Edna在金黄色葡萄球菌中的发行，结构和功能的最新文献，此外还讨论了针对Edna靶向生物膜消除的潜在途径的文献。
线粒体质量控制基因的破坏促进了凋亡刺激后caspase耐药细胞的存活
在经历细胞内凋亡的细胞中，线粒体外膜通透性（MOMP）通常标志着细胞死亡过程中不可逆的一步。然而，在某些情况下，被处理的细胞的亚群可以表现出一个余生的反应，称为“少数MOMP。”在这种现象中，尽管caspase激活水平较低，并且随后受到核酸内切酶caspase激活的DNase（DNA片段化因子亚基β>因此，这些细胞会经历DNA损伤，从而增加了肿瘤发生的可能性。但是，对少数MOMP响应知之甚少。发现影响单个细胞中MOMP反应的基因，我们构成了基于成像的表型siRNA筛选。我们鉴定了多个候选基因，其下调增加了单个细胞内MOMP的异质性，其中是与线粒体动力学和线粒体有关的基因，该基因参与了线粒体质量控制（MQC）系统。此外，为了测试功能性MQC对于降低少数MOMP的频率很重要的假设，我们开发了一种测量caspase参与细胞的固定生存的测定法。我们发现，在各种MQC基因中表现出的细胞确实很容易出现在成型后生存。我们的数据突出了蛋白质与线粒体动力学和线粒体中有关的重要作用，在防止凋亡失调和肿瘤发生中。
海报多态毒素的结构见解——枯草芽孢杆菌的免疫对系统。
多态毒素是细菌战争的武器，用于限制竞争对手、帮助亲属选择和塑造细菌群落。多态毒素系统 (PTS) 在革兰氏阴性细菌中得到了充分研究，但对革兰氏阳性细菌的研究有限。在枯草芽孢杆菌中，已报道了几种毒素免疫蛋白对，包括 YeeF-YezG、YobL-Y、obK YxiD- YxxD。很少有研究描述这些毒素-免疫对的结构/机制细节。这种毒素需要 VII 型分泌系统。我们已经证明 YeeF 的 C 端结构域 (YeeF-CT) 含有具有 DNase 活性的毒素。YeeF-CT 的表达会导致大肠杆菌的生长缺陷并导致形态变化。而毒素-免疫对的共表达可恢复正常的细菌生长。在这里，我们报告了 YeeF-CT 与其同源抗毒素 YezG 结合的晶体结构，分辨率为 2.1 Å。晶体结构表明，毒素 (YeeF-CT) 在与其同源免疫蛋白 (YezG) 结合后会发生重大构象变化。比较结构分析表明，毒素的六个 β 片层（核酸酶活性所必需的）在与免疫蛋白结合后被撕裂成两个子域。这种机制不同于其他 II 型毒素-抗毒素系统，其中抗毒素的内在无序区域与毒素的活性位点结合，从而在空间上阻断其底物的结合。我们目前正在研究这种毒素-免疫蛋白对的结构指导详细表征。
DNA感应炎症体引起复发性动脉粥样硬化中风
尽管目前建立了二级预防策略1，但中风后早期反复事件的风险仍然很高。风险特别高，超过10％的患者患有早期复发事件1,2。然而，尽管这种临床现象具有巨大的医疗负担，但导致血管风险增加和复发性中风增加的潜在机制在很大程度上尚不清楚。在这里，使用中风诱导的复发性缺血的新型小鼠模型，我们表明，中风会通过增加无细胞的DNA来激活弱势动脉粥样硬化斑块中AIM2炎症体的激活。中风后增强的牙菌斑炎症导致牙菌斑不稳定和动脉粥样硬化，最终导致索引中风后几天内导致动脉栓塞和复发性中风。我们还证实了实验性心肌梗塞以及急性中风患者的颈动脉牙菌斑样品后牙菌斑不稳定的关键步骤。快速中性粒细胞肠病被确定为中风后无细胞DNA的主要来源，Net – DNA是导致AIM2炎症体激活的病因。降低了实验中风后中风复发的速率。我们的发现对动脉粥样硬化患者的出现缺血事件后高复发率提出了解释。此处发现的详细机制提供了临床上未知的治疗靶标，我们为防止复发事件显示出很高的功效。靶向远程组织损伤后DNA介导的炎性体激活代表了预防早期复发事件的进一步临床发展的有希望的途径。
心血管疾病中的中性粒细胞外陷阱（网）：从分子机制到治疗干预措施
中性粒细胞外陷阱（NET）是由DNA，组蛋白和抗菌蛋白组成的网状结构，特别是髓过氧化物酶（MPO）和弹性酶，在细菌，病毒，病毒，病毒，原生质部和融合感染与毒剂的抗药性机制相关的细菌，病毒性，原生动物感染和耐药性机制相关。越来越多的证据表明，由蛋白质 - 精氨酸脱节酶4型驱动的网络形成（Netosis）对血栓形成，缺血和动脉粥样硬化的贡献。网被认为是参与心血管疾病发展和发展的新参与者（CVD），包括冠状动脉疾病（CAD）及其急性表现，尤其是急性心肌梗死（MI），外周动脉疾病（PAD）以及缺血性stroke，心力衰竭，心脏故障，心力衰竭，主动脉炎症和膨胀（Af）（Af）。净形成网及其循环标记的水平升高，例如柠檬酸的组蛋白3和MPO-DNA复合物。网络的积累与斑块破裂，梗塞大小和心肌功能受损相关。网络已在人狭窄的主动脉瓣中鉴定出来，例如在动脉粥样硬化斑块和动脉血栓中。此外，循环网状标记与促血栓形成标志物（包括纤维蛋白凝块特性）相关，预测了AF中的不良临床事件。几种网络抑制剂，包括重组人DNase，一种酶降解网络，活性氧物种清除剂，以及抗血栓和抗血小板药物，可减少不受控制的肠病。本综述总结了Netosis在CVD中的作用的当前证据，其作为临床结局的危险因素的意义，最后是NET作为未来治疗干预措施的目标。
简介Raybio®尿路感染（UTI）多重PCR细菌分析套件已准备好使用实时PCR分析来检测UTI
必需的材料（不包括）1。纯化的人尿DNA：应根据制造商协议2.DNA保存解决方案3。荧光PCR仪器能够阅读FAM通道（494 nm最大吸收，518 nm最大发射），VIC通道（520 nm最大吸收，558 nm最大激发），ROX通道（580 nm最大吸收，最大吸收），623 nm最大兴奋）和CY5（640 nm nm最大吸收，640 nm最大吸收，682 nm）。4。Vortex Mixer 5。微输出式6。移液器7。无菌核酸酶的无动移液尖端（建议使用屏障尖端）和微型试管8。兼容PCR板9。与我们的技术支持团队联系以获取有关兼容性的问题：TechSupport@raybiotech.com样本要求1。所有人类尿液标本都应被视为潜在的感染性，并谨慎处理。在测试任何样本时，应采取措施根据风险评估来最大程度地降低实验室传播的风险。这些预防措施至少应包括熟练度和能力测试，适当的PPE，避免气溶胶以及使用有效的消毒剂（第四纪铵化合物和0.5％的漂白剂）。2。我们建议在微量离心机中在5000 g处离心1 ml尿液，在室温下10分钟，然后去除800 µL上清液。剩余的上清液和沉淀应用于DNA提取**。最终提取的DNA应在100 µL的DNase，无RNase无RNase水中洗脱。实时PCR程序需要每个反应的10 µL提取的DNA。3。提取的人尿DNA是该试剂盒的起始材料。应根据制造商方案将DNA与PCR分析设置分开纯化，并具有DNA保存溶液，以使细菌失活和保存DNA。**本手册中显示的数据是基于DNA提取的，使用Thermo Fisher Scientific的Magmax™病毒/病原体核酸分离试剂盒。一般考虑1。为防止PCR反应的污染，清洁和净化所有工作表面，离心机，移液器和其他具有10％漂白剂或DNAave®的设备，然后在每次测定之前为70％乙醇。