使用 SYBR® Green qPCR 和针对大肠杆菌 16S rRNA 基因座的特异性引物,筛选至少 1 µl 脱氧核苷酸 (dNTP) 溶液混合物中是否存在大肠杆菌基因组 DNA。使用由纯化的大肠杆菌基因组 DNA 生成的标准曲线对结果进行量化。大肠杆菌基因组 DNA 污染的测量水平为 1 个大肠杆菌基因组。
产品名称:Q5® 高保真 DNA 聚合酶 产品编号:M0491S 浓度:2,000 U/ml 单位定义:一个单位定义为在 74°C 下 30 分钟内将 10 nmol dNTP 掺入酸不溶性物质的酶量 包装批号:10272599 有效期:07/2026 储存温度:-20°C 储存条件:专有 规格版本:PS-M0491S/L v2.0
大肠杆菌DNA污染单元已测试了N/A N/A 30 30 30 30规范> 99%5,555 U/mg功能功能性功能性NO转化率<10拷贝<10份蛋白质:从表达重组T4 DNA聚合酶基因的大肠杆菌菌株中纯化。单位定义:1个单位定义为将在37°C下30分钟内将10 nmol的DNTP纳入酸性材料的酶量(1)。分子量:103,609 Daltons质量控制分析:使用2倍连续稀释方法测量单位活动。在1倍反应缓冲液中制成酶的稀释液,并将其添加到含有小腿胸腺DNA,1x蓝色缓冲液,3 H-DTTP和100 µM DNTP的50 µL反应中。在37°C下孵育10分钟,浸入冰上,并使用Sambrook和Russell的方法进行分析(Molecular Cloning,V3,2001,pp。A8.25-A8.26)。蛋白浓度(OD 280)由OD 280吸光度确定。
单位定义:TAQ DNA聚合酶的一个单位定义为将10 nmol的脱氧核糖核苷酸纳入DE-81的多核苷酸分数,在70°C下在DE-81上吸附到多核苷酸级分中,在以下测定条件下测量:67 mm tris-Hcl 8.8(pH 8.8 at 25°C) 2-甲醇,50 mM NaCl,0.1 mg/ml BSA,0.75 mM活性小腿胸腺DNA,每个DNTP的0.2 mM,0.4 MBQ/ml [3 H] -DTTP。
摘要 细胞内高浓度的核苷酸 ( NTP ) 和低浓度的脱氧核苷酸 ( dNTP ) 之间的不平衡对 DNA 聚合酶从 dNTP 构建 DNA 时提出了挑战。目前认为,DNA 聚合酶通过空间门模型区分 NTP,该模型涉及 B 家族 DNA 聚合酶中聚合酶活性位点的酪氨酸和核苷酸的 2 ′ -羟基之间的冲突。借助活性位点具有 UTP 或 CTP 的 B 家族聚合酶的晶体结构、分子动力学模拟、生化分析和酵母遗传学,我们已经确定了聚合酶的指状结构域感知聚合酶活性位点中 NTP 的机制。与之前提出的极性过滤器相反,我们的实验表明,指状结构域中的氨基酸残基通过空间位阻感知核糖核苷酸。此外,我们的结果表明,掌状结构域中的空间门和指状结构域中的传感器在区分 NTP 时都很重要。结构比较表明,传感器残基在 B 家族聚合酶中是保守的,我们假设在所有类型的 DNA 聚合酶中都应考虑指状结构域中的传感器。
产品名称:DNA聚合酶I(大肠杆菌)目录编号:M0209S浓度:10,000 U/ml单位定义:将一个单位定义为将在30分钟内在37°C中在30分钟内将10 nmol DNTP纳入酸不溶性材料的酶量。Packaging Lot Number: 10269488 Expiration Date: 01/2027 Storage Temperature: -20°C Storage Conditions: 25 mM Tris-HCl , 1 mM DTT , 0.1 mM EDTA , 50 % Glycerol, (pH 7.4 @ 25°C) Specification Version: PS-M0209S/L/V v2.0
Lot Quantity Description 3070014 0.2 kU Phusion DNA Polymerase 3130783 0.4 mL 10 mM dNTP MixPhusion kit component 3048246 0.04 mL Lambda-DNA 3085897 0.4 mL Lambda & PhiX MixReady to Use Marker 3016845 0.05 mL Primer Mix 1.3 kb 3083834 0.05 mL Primer Mix 10 kb 3121943 3×1.5 ml 5x phusion hf缓冲液3121933 1.5 ml 50 mm MGCl2 3087331 1.5 ml 5x 5x phusion GC缓冲液3085597 0.5 ml DMSO
72 ˚C,10 分钟 4 ˚C, PCR 混合物 10 x PCR 缓冲液 II (Life technologies) 2.0 l MgCl 2 (25 mM) 1.2 l dNTP 混合物 (每种核苷酸 25 mM) 0.16 l Cre FW (100 M) 0.1 l Cre REV (100 M) 0.1 l AmpliTaq Gold (5 U/ l) 0.13 l DNA 模板 ( 0.5 g 尾部 DNA) 1.0 l H 2 O 15.31 l 20 l PCR 后分析 1.5% 琼脂糖凝胶。预期模式为 Tg:250bp
产品名称:T7 DNA 聚合酶(未修饰) 产品编号:M0274L 浓度:10,000 U/ml 单位定义:一个单位定义为在 37°C 下 30 分钟内将 10 nmoles dNTP 掺入酸不溶性物质的酶量。 包装批号:10272282 有效期:08/2026 储存温度:-20°C 储存条件:50 mM KPO4、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、50% 甘油,(pH 7.0 @ 25°C) 规格版本:PS-M0274S/L v1.0
产品名称:DNA 聚合酶 I (E. coli) 产品编号:M0209S 浓度:10,000 U/ml 单位定义:一个单位定义为在 37°C 下 30 分钟内将 10 nmol dNTP 掺入酸不溶性物质的酶量。 包装批号:10269488 有效期:01/2027 储存温度:-20°C 储存条件:25 mM Tris-HCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、50% 甘油,(pH 7.4 @ 25°C) 规格版本:PS-M0209S/L/V v2.0