染色体结构:Kim等人(2020年)报告了Populus tremula var中染色体结构的相似性。Davidiana,Populus alba及其杂种通过鱼核型分析揭示。韩国阿斯彭的核型(P. tremula var.Davidiana),银杨(P. alba)及其两个杂种Suwon Aspen(P. tremula var.glandulosa)和Hyun Aspen(P. alba×P。tremula var。glandulsa)。所有物种的染色体组成与2n = 38。韩国阿斯彭,银杨,Suwon Aspen和Hyun Aspen的核型配方分别为28m + 6SM + 4ST(2SAT),26M + 10SM(2SAT) + 2ST + 2ST,26M + 12SM(2SAT)和28m + 10sm + 10sm(2SAT)。这四个物种有一对45s rDNA位点,一对5S rDNA位点与鱼核型共有。
摘要 测定Cas9对靶位点的切割效率对于基因组编辑非常重要。然而,这种测定只能通过体外方法进行,因为需要纯化Cas蛋白和合成gRNA。在这里,我们开发了一种体内方法,称为植物瞬时CRISPR/Cas编辑(TCEP)来测定Cas9的切割效率。按常规方法构建农杆菌介导的植物转化CRISPR/Cas载体。利用我们建立的瞬时转化方法,Cas9蛋白和gRNA瞬时表达并形成复合物以切割其靶位,从而导致动态DNA断裂。使用qPCR定量断裂的DNA以测量Cas9的切割效率。我们利用TCEP和体外方法研究了白桦和山杨×波利纳植物中Cas9对不同靶位点的切割效率。 TCEP法测定结果与体外法一致,说明TCEP法测定切割效率可靠。另外,利用TCEP法,我们发现热处理和超声处理均能显著提高CRISPR/Cas效率。因此,TCEP法具有广泛的应用价值,不仅可用于分析CRISPR/Cas效率,还可用于确定Cas9切割中涉及的因素。