图1。您选择的磁珠会影响您的结果。dynabeads磁珠具有定义的表面以进行必要的结合,而没有内部表面可以捕获不需要的蛋白质。(a)Dynabeads产品是具有高度控制的产品质量制造的最均匀,单分散的超级磁珠,可帮助确保最高的可重复性。(b – d)替代供应商的磁性颗粒具有可变的形状和尺寸,可捕获杂质,从而导致较低的可重复性和增加的非特异性结合。
Life Technologies Corporation 及其附属公司对其产品提供保证,具体规定请参阅 Life Technologies 的《一般销售条款和条件》(网址:www.thermofisher.com/us/en/home/global/terms-and-conditions.html)。如有任何疑问,请联系 Life Technologies,网址:www.thermofisher.com/support。
65040D Dynabeads™ RNA 结合缓冲液包装批次:2980952 有效期:2024 年 12 月 12 日 (DD.MM.YYYY) 储存:5±3°C 注意:仅供研究使用。不可用于诊断程序。
绝对可重复性所有Dynabeads产品均可全面控制参数,例如珠子大小,表面积,铁含量和磁性迁移率。没有过多的物理吸附的链霉亲和素可确保可忽略不计,并确保了最小的批处理变化。(CV <3%)和批次之间的均匀特征和独特的可重复性降低了与质量控制测试相关的成本(图4)。无论是用于研究项目还是用于IVD测试活动,您都可以依靠Dynabeads产品的持续性能。
寡核苷酸耦合的dynabeads™磁珠用于从生物样品中特异性捕获核酸靶标(图3)。在等离子体(400 µL最终体积)中峰于M13噬菌体的已知量(1.4x10^5 pfu)后,样品被液化,并通过杂交在寡聚偶联的珠子偶联物上捕获的释放的核酸靶标。然后从珠子中洗脱核酸靶标,并通过qPCR定量。当裂解/结合步骤仅在室温下长2分钟时,回收率约为25%,但是当裂解/结合时间增加到10分钟并在55ºC处发生时,恢复速率达到70%,表明根据捕获效率要求,测定条件可以调节(图4)。
在CTS细胞平衡软件的控制下,用CTS可拆卸Dynabeads CD3/CD28和CTS DynaceLlect系统从四分之一的Leukopaks分离出T细胞。隔离后,用慢病毒载体反式诱导细胞,以编码CD19靶向的汽车基因,其感染(MOI)为2。24小时后,使用CTS DynAceLect系统和CTS可分离的Dynabeads释放缓冲液,将CAR-T细胞与CTS可拆卸的Dynabead分离。然后使用GIBCO CTS ROTEA™逆流离心系统洗涤这些CAR-T细胞,而分离的CTS可拆卸Dynabeads CD3/CD28珠子被CTS DynAceLlect系统捕获。
A部分 - 生物素化模板是通过质粒或合成DNA构建体中靶序列的PCR扩增产生的。此过程使用T7启动子上游至少30-100个碱基对的生物素化正向引物和非生物素化的反向引物。在设计QPCR分析以评估模板浸出时,T7启动子和正向引物之间的距离更大。另外,可以使用Biotin-DUTP在5'悬垂序列中通过填充填充物进行生物素化,这取决于正确的质粒设计。然后将生物素化模板直接固定到dynabeads
这些新的 Dynabeads 产品是在成熟的质量体系下生产的(符合 ISO 13485 要求),旨在作为 GMP 治疗药物制造的原材料。它们针对疫苗开发和制造进行了优化,具有简单、可扩展的工作流程,使我们的客户能够按需提供 mRNA。
使用10倍基因组学铬单细胞3'试剂盒(版本3.1),每个样品捕获了6,000至10,000个细胞以进行库和测序生成。在器官解离,单细胞悬浮液,凝胶珠和乳液油被添加到10x基因组单细胞芯片G中。在液滴产生后,将样品转移到PCR 8管条(USA Scientific)中,使用SimpleiaMp热循环液(Appliam appliiamp appliamp cyscler(USA Scientific)进行反转录反应(USA Scientific)。cDNA。根据10倍基因组用户指南,使用Silane Dynabead清理cDNA。将纯化的cDNA放大了11个循环,然后使用spriselect珠
在37°C,200 rpm时10分钟。RNA,并在冰上被5 µL冰冷1 N NaOH碎片碎片10分钟。用25 µl 1 M Tris-HCl(pH 6.8)中和后,将RNA再次用异丙醇沉淀。Biotin RNA被预洗的dynabeads™M-280链霉亲和蛋白珠(Invitrogen,#11206D)富含,被高盐缓冲液,分别降水缓冲液,低盐缓冲液洗涤,然后用Trizol和Zymo rna Clean&Compentor(Zymoresearch(Zymoresearch)(Zymoresearch)在珠子上提取。用20°C的100 µM VRA3 RNA适配器与1 µL的100 µM VRA 3 RNA连接过夜。然后将生物素RNA富集并再次提取。RNA通过RPPH(NEB,#M0356)在5'端修饰,并通过T4 PNK(NEB,#M0201L)进行了羟基修复。被Zymo RNA清洁和浓缩器提取后