➢病毒体(l叶叶最常见)•FAGG L DNA的大部分是宿主污染的必要必要的,并且可以用外国DNA•突变噬菌体•专门用于克隆的突变噬菌体(例如LGT-LB,仅包含2个限制位置,ECORI)•比质粒更容易进入细菌
3。Kysik,J.,Furtak,K.,Szymczak,G.,Skowroski,J.,Panusz,H。,&Bartnik,E。(1979)。 分子克隆的限制片段源自小牛卫星I DNA的双ECORI/PSTI消化及其限制分析。 Zeitschrift Fur Naturforschung- C节生物科学杂志,34(12),1151–1155。 scopus。 https://doi.org/10.1515/ZNC-1979-1212Kysik,J.,Furtak,K.,Szymczak,G.,Skowroski,J.,Panusz,H。,&Bartnik,E。(1979)。分子克隆的限制片段源自小牛卫星I DNA的双ECORI/PSTI消化及其限制分析。Zeitschrift Fur Naturforschung- C节生物科学杂志,34(12),1151–1155。scopus。https://doi.org/10.1515/ZNC-1979-1212
saci smai bshii paci sbfi sbfi ecoi访问acci的bamhi xbai xbai xbai sali sali psti psti psti psti hindii agtgaattcgicgtccccccggggggggggggcggcgtcitatatagtagtcightgtgtgtgtgtgtgtgtgtggtggcsggctggctgctctscats。。。。。。。。。。4o
(ssDNA) 是优于 dsDNA 的 HDR 模板。在此,我们报告了一项系统研究,比较了 HEK293 细胞中的 dsDNA HDR 模板和 IDT Ultramer® 寡核苷酸 ssDNA HDR 模板。测试了链选择和同源臂长度,以确定 HDR 在 Cas9 dsDNA 断裂点创建新的限制位点(6 个碱基插入)的效率。使用较长 ssDNA HDR 模板的初步实验表明,与较短 ssDNA 模板具有类似的优势和行为。具有不对称同源臂的模板的 HDR 插入。使用具有不对称同源臂的 HDR 模板导致 EcoRI 插入率与对称同源臂的插入率相似。使用靶向链模板获得了高 HDR 效率,其中
您的转弯读数在框架中您有一系列蛋白质的一部分,您希望使用虚构的GST质粒克隆到称为谷胱甘肽S转移酶(GST)的融合蛋白中。•您使用哪些PGSTPLASTID?a,b还是C?•您将与Bamhi和Ecori一起切入。•确保您具有正确的读取框架,可以在插入序列的末尾停止。请记住,GST的插入为5'。That is where the “ #1 bp ” is located • Google search for “ Restriction Sequence Translator ” to find a program to map for where the RE cuts sites are • Sequence GGATCCTGTAGATCTGCTGGCAGTTAAGAAGAAGCAGGAAACCAAACGTAGCATCAATGAGGA gattcatacccagttcctggatcatctgctgctgactggcatgaggacatctgcggcggtcactatgg tcaccatcaccacgaate•vdllavkkkkkkq etkrsineei htqfldhllt htqfldhllt giedicghyg hhh•找到地图并保留您的选择!•GST和C端的插入物在哪里?- 使用DNA到氨基酸翻译器在DNA序列中找到编码的氨基酸序列。
There are no restriction sites for the following enzymes: AarI(x), Acc65I, AcuI, AfeI, AgeI, AlwI, AlwNI, ApaI, AscI, AsiSI, AvrII, BamHI, BanII, BclI, BglI, BglII, BlpI, BmgBI, BmrI, BmtI, BsaI, BsaXI, BsgI, BsmBI, BspDI, BspEI, BsrFI, BsrGI, BstBI, BstEII, BstYI, BstZ17I, Bsu36I, ClaI, DpnI, DpnI, EagI, EcoN, EcoO1 FseI, FspAI(x), HindIII, I-CeeI, I-SceI, CPNI,MBOI,MSCI,NEI,NCOI,NDEI,NGOMIV,NHEI,NENI,NSSII,NSSII,NSPI,PFLI,PFLI,PMMI,PMLI,PMLI,P; PMLI,P; PMLI,P; PMLI,PPUTMI,PPHMI,PPHMI,PPHMI,PPHMI,PPHMI,P; PSPOME,PSPXI,PVI,PVII,RSRII,SACI,SALI,SALI,SANDI(X),SAU3AI,SBFI,SFII,SFII,SFII,SGRI,SGRI,SGRI,SMAI,SMAI,SMAI,SNABI,SPEI,SPEI,SPEI,SPHI,SPHI,SPHI,SRFMI(SRFMI(X)
There are no restriction sites for the following enzymes: AarI(x), Acc65I, AcuI, AfeI, AgeI, AlwI, AlwNI, ApaI, AscI, AsiSI, AvrII, BamHI, BanII, BclI, BglI, BglII, BlpI, BmgBI, BmrI, BmtI, BsaI, BsaXI, BsgI, BsmBI, BspDI, BspEI, BsrFI, BsrGI, BstBI, BstEII, BstYI, BstZ17I, Bsu36I, ClaI, DpnI, DpnI, EagI, EcoN, EcoO1 FseI, FspAI(x), HindIII, I-CeeI, I-SceI, CPNI,MBOI,MSCI,NEI,NCOI,NDEI,NGOMIV,NHEI,NENI,NSSII,NSSII,NSPI,PFLI,PFLI,PMMI,PMLI,PMLI,P; PMLI,P; PMLI,P; PMLI,PPUTMI,PPHMI,PPHMI,PPHMI,PPHMI,PPHMI,P; PSPOME,PSPXI,PVI,PVII,RSRII,SACI,SALI,SALI,SANDI(X),SAU3AI,SBFI,SFII,SFII,SFII,SGRI,SGRI,SGRI,SMAI,SMAI,SMAI,SNABI,SPEI,SPEI,SPEI,SPHI,SPHI,SPHI,SRFMI(SRFMI(X)
液氮 n/an/a 关键商业检测 NEBuilder® HiFi DNA 组装预混液 New England Biolabs E2621S BsaIHF®v2 (20 U/µL) New England Biolabs R3733S Phusion TM 高保真 DNA 聚合酶 Thermo Fisher Scientific F530S MluI (10 U/µL) Thermo Fisher Scientific ER0561 ApaI (10 U/µL) Thermo Fisher Scientific ER1411 XhoI (10 U/µL) Thermo Fisher Scientific ER0691 EcoRI (10 U/µL) Thermo Fisher Scientific ER0271 RevertAid TM 逆转录酶 Thermo Fisher Scientific EP0441 RiboLock RNase 抑制剂 (40 U/μL) Thermo Fisher Scientific EO0381 NucleoSpin® 质粒试剂盒 Macherey-Nagel 740588.250 Zymoclean 凝胶 DNA 回收试剂盒 Zymo Research D4001 Zymo-Spin I Zymo Research C1003-250 嗜热菌 (Tth) DNA 聚合酶 Biotools 10.003 寡核苷酸 D1789 GGGAATCAATCACAGTGTTGGC
我们报告了一系列适用于检测和克隆翻译控制信号和外源基因 5' 编码序列的质粒载体的构建和使用。在这些质粒中,乳糖操纵子 β-半乳糖苷酶基因 lacZ 的氨基末端的前八个密码子被去除,并在 lacZ 的第八个密码子附近插入独特的 BamHI、EcoRI 和 SmaI (XmaI) 内切酶切割位点。将含有适当调节信号和 5' 编码序列的脱氧核糖核酸片段引入此类 lac 融合质粒导致产生由 β-半乳糖苷酶残基的羧基末端片段和含有外源脱氧核糖核酸序列编码的氨基末端氨基酸的肽片段组成的混合蛋白。这些杂合肽保留了 1,8-半乳糖苷酶的酶活性,并产生了 Lac' 表型。此类杂合蛋白可用于纯化由外源脱氧核糖核酸片段编码的肽序列,以及用于研究特定肽片段的结构和功能。
nzy-A快速的PCR克隆试剂盒设计用于对含有3´-A悬垂的PCR产物进行快速有效的克隆,这是由于使用非卫生读取DNA聚合酶具有末端转移酶活性的扩增,例如TAQ DNA聚合酶。这种方法结合了改进的连接缓冲液的效率与快速连接酶的速度,以在室温(20-25°C)的仅10分钟内在10分钟内进行快速连接。通过将NZYTECH的PNZY28与ECORV切割NZY-A快速克隆试剂盒提供的克隆载体,并在两端添加3´-末端胸苷。这些单一的3´-T突出者不仅通过为包含PCR产品的3'-A提供兼容的悬垂性,还可以通过防止向量的重新循环。在PNZY28矢量的多个克隆区域中引入了多个限制位点。使用ECORI或BAMHI的矢量消化允许释放PCR产物,因为矢量克隆区域侧翼是两种酶的识别位点。