亚培养从粘附细胞中去除旧培养基,并用无钙和镁的PBS洗涤它们。使用3-5毫升PBS进行T25瓶,T75瓶子使用5-10毫升。然后用电池完全覆盖电池,用1-2 mL盖住T25瓶,T75瓶的2.5毫升。让细胞在室温下产生8-10分钟,以松开它们。孵育后,将细胞与10 ml培养基仔细混合,以重悬于它们,然后以300xg离心3分钟。扔掉上清液,将细胞重悬于新鲜培养基中,然后将其转移到已经包含新鲜培养基的新瓶中。
由于其NUP96-MEGFP合并蛋白的表达稳定,并保持U-2 OS系列的典型特性,包括在与癌细胞迁移和转移有关的研究中至关重要的稳健细胞骨架结构,因此选择了该特定克隆的数字195。使用CRISPR技术可确保精确的基因编辑,从而最大程度地减少了可以削弱实验结果完整性的外观作用。这确实会做U-2 OS-CRISPR-NUP96-MEGFP KLON No.195对于高分辨率成像技术和细胞结构的详细研究特别有用,这有助于细胞生物学,癌症研究和核转运现象的高级研究。
亚培养从粘附细胞中去除旧培养基,并用无钙和镁的PBS洗涤它们。使用3-5 mL PBS进行T25烧瓶,T75烧瓶使用5-10 mL。然后用ACCUTASE完全疲倦,T25 Colber用1-2 mL和T75烧瓶的2.5 mL静止。让细胞在室温下孵育8-10分钟以松开它们。孵育后,将细胞与10 ml培养基轻轻混合以使其恢复它们,然后以300xg离心3分钟。丢弃上清液,将细胞重悬于新培养基中,然后将其转移到已经包含新培养基的新瓶中。
亚培养消除了粘附细胞的古老介质,并用缺乏钙和镁的PBS洗涤它们。 div>对于T25烧瓶,使用3-5毫升PBS,对于T75烧瓶,使用5-10毫升。 div>然后用1-2 mL对T25和2.5 mL烧瓶进行T75烧瓶的作用覆盖细胞。 div>让细胞在室温下孵育8-10分钟以释放它们。 div>孵化后,将细胞与10 ml培养基轻轻混合,以重悬于它们,然后离心至300xg 300倍。 div>丢弃上清液,将细胞重悬于凉爽的介质中,然后将其转移到已经包含新鲜手段的新瓶中。 div>
亚培养物从粘附细胞中去除旧培养基,并用不含钙和镁的PBS洗涤它们。将T25活塞3-5毫升PBS和T75活塞使用5-10毫升。然后将细胞完全用ACCUTASE覆盖,其中T25活塞的1-2 mL和T75活塞的2.5 mL。让细胞在室温下孵育8-10分钟以更换它们。孵育后,将细胞与10 ml培养基仔细混合以使它们共振,然后以300xg离心3分钟。丢弃上清液,在新鲜培养基中产生共鸣,并将其转换为已经包含新鲜培养基的新活塞。
该特定的克隆(编号为195)已被选为其稳定的NUP96-MEGFP融合蛋白表达,并保持U-2奥林匹克线的典型特性,包括强大的细胞骨架结构,这对于与癌细胞迁移和转移的研究至关重要。CRISPR技术的应用确保精确的基因编辑并最大程度地减少目标之外的效果,从而危及实验结果的完整性。这使U-2奥林匹克PRISPR-NUP96-MEGFP克隆编号195对于高分辨率成像技术和细胞结构的详细研究特别有用,这促进了细胞生物学,癌症研究和核现象的先进研究。
亚培养物从粘附细胞中去除旧培养基,并用缺乏钙和镁的PBS洗涤它们。对于T25烧瓶,使用3-5毫升PBS,对于T75烧瓶,使用5-10毫升。然后,使用1-2 mL对T25烧瓶完全覆盖细胞,T75烧瓶2.5 mL。让细胞在室温下孵育8-10分钟以将其分离。孵育后,将细胞与10 ml培养基轻轻混合以重悬于它们,然后以300xg离心3分钟。丢弃上清液,将细胞重悬于新鲜培养基中,然后将其转移到已经包含新鲜培养基的新瓶中。
亚培养从粘附细胞中去除旧培养基,并用无钙和镁的PBS洗涤它们。使用3-5毫升PBS进行T25瓶,T75瓶子使用5-10毫升。然后用电池完全覆盖电池,用1-2 mL盖住T25瓶,T75瓶的2.5毫升。让细胞在室温下产生8-10分钟,以松开它们。孵育后,将细胞与10 ml培养基仔细混合,以重悬于它们,然后以300xg离心3分钟。扔掉上清液,将细胞重悬于新鲜培养基中,然后将其转移到已经包含新鲜培养基的新瓶中。
该细胞系对于专注于核质运输,核孔复合动力学以及NUP50在各种细胞过程中的功能作用的研究特别有价值。NRK-EGFP2-NUP50细胞适用于一系列实验方法,包括光漂白后的荧光恢复(FRAP)(FRAP),荧光相关光谱(FCS)和其他高级显微镜技术。这些研究可以提供对核转运分子机制的见解,并有助于理解与核转运功能障碍相关的疾病,例如某些癌症和神经退行性疾病。
HK-CRISPR-CAP-H-MEGFP细胞系是一种为晚期基因编辑和荧光应用而设计的人类衍生模型。该细胞系基于亲本人类细胞系,并已使用CRISPR-CAS9技术进行了修改,以表达用单体增强的绿色荧光蛋白(MEGFP)标记的CAP-H(染色体相关蛋白H)基因。这种修饰允许CAP-H的精确可视化和跟踪,CAP-H是冷凝蛋白复合物的组成部分,对于细胞分裂期间的染色体凝结和稳定至关重要。MEGFP标签提供了强烈而稳定的荧光信号,这使该细胞系非常适合活细胞成像和基于荧光的测定。