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World File Search SystemEHA105
密歇根州立大学
图：图1。PMSU2DR-02 T-DNA的线性图。 图2。 A。农杆菌根源菌株Arport1中PMSU2DR-02的圆形图。 B. tumefasciens菌株ATJGT105中PMSU2DR-02的圆形图。 图3。 PMSU2DR-02 T-DNA插入物的序列。 表列表：表1。 基因供体生物的分类分类表2。 pMSU2DR-02缩写和定义的DNA插入物的遗传元素：ARPORT1：含有gaantry基因在毒力质粒中堆叠所需的遗传成分的根状腺根源菌株。 直接用于植物转化。 cc-nb-lrr：N末端盘绕圈（CC）结构域，核苷酸结合位点（NB）和富含亮氨酸的重复序列（LRRS）EHA105：EHA105 tumefaciens菌株对土豆和其他植物的转基因作用有用。 gaantry：使用重组酶技术HS中的核酸转移基因组装HS：高度敏感的反应JGT105：Tumefaciens JGT105 Gaantry菌株，该菌株是tumefaciens eha105的衍生物，含有基因组成的群体。 直接用于植物转化。 LB: Left Border MOA: Mechanism of Action MSU: Michigan State University NCBI: National Center for Biotechnology Information NPTII: Neomycin phosphotransferase II ONT: Oxford Nanopore Technology ORF: Open Reading Frame PCR: Polymerase Chain Reaction PLRV: Potato Leaf Roll Virus PVY: Potato Virus Y R genes: Resistance genes RB: Right Border RSR: Regulatory Status Review T-DNA：转移DNAPMSU2DR-02 T-DNA的线性图。图2。A。农杆菌根源菌株Arport1中PMSU2DR-02的圆形图。B. tumefasciens菌株ATJGT105中PMSU2DR-02的圆形图。图3。PMSU2DR-02 T-DNA插入物的序列。表列表：表1。基因供体生物的分类分类表2。pMSU2DR-02缩写和定义的DNA插入物的遗传元素：ARPORT1：含有gaantry基因在毒力质粒中堆叠所需的遗传成分的根状腺根源菌株。直接用于植物转化。cc-nb-lrr：N末端盘绕圈（CC）结构域，核苷酸结合位点（NB）和富含亮氨酸的重复序列（LRRS）EHA105：EHA105 tumefaciens菌株对土豆和其他植物的转基因作用有用。gaantry：使用重组酶技术HS中的核酸转移基因组装HS：高度敏感的反应JGT105：Tumefaciens JGT105 Gaantry菌株，该菌株是tumefaciens eha105的衍生物，含有基因组成的群体。直接用于植物转化。LB: Left Border MOA: Mechanism of Action MSU: Michigan State University NCBI: National Center for Biotechnology Information NPTII: Neomycin phosphotransferase II ONT: Oxford Nanopore Technology ORF: Open Reading Frame PCR: Polymerase Chain Reaction PLRV: Potato Leaf Roll Virus PVY: Potato Virus Y R genes: Resistance genes RB: Right Border RSR: Regulatory Status Review T-DNA：转移DNA
用于卵巢孢子的有效农杆菌介导的遗传转化方法。胚胎愈伤组织
摘要：证明是卵巢Betaceum（tamarillo）中的体细胞胚发生，因为可以从不同的epplants中诱导胚胎胜任的细胞系，因此可以从不同的植物中诱导胚胎胜任的细胞系，这是研究形态发生的有效模型系统。然而，尚未针对该物种实施胚胎愈伤组织（EC）的有效遗传转化系统。在这里，描述了使用tumefaciens的遗传转化的优化较快的遗传转化方案。确定了EC对三种抗生素的敏感性，卡纳米霉素被证明是tamarillo愈伤组织的最佳选择剂。两种农杆菌菌株EHA105和LBA4404都带有p35sgusint质粒，含有β-葡萄糖醛酸酶的记者基因（GUS）和标记基因neomycin phosycin phossforsfransferase（NPTIII），用于测试该过程。采用了基于抗生素耐药性的遗传转化，冷震处理，椰子水，聚乙烯基吡咯烷酮和适当的选择时间表的成功。通过GUS分析和基于PCR的技术评估了遗传转化，并在耐卡那霉素的EC团中确定了100％的效率。用EHA105菌株遗传转化导致基因组中GUS插入的值更高。 提供的协议为功能基因分析和生物技术方法提供了有用的工具。遗传转化导致基因组中GUS插入的值更高。提供的协议为功能基因分析和生物技术方法提供了有用的工具。
构建CRISPR/CAS9载体沉默番茄CIF1基因 Dao Quang Ha 1, Nguyen Thi Bich Ngoc 1, Huynh Thi Thu Hue 1,2* 1 研究所
收到日期：2021 年 11 月 8 日 番茄 ( Solanum lycopersicum ) 是一种营养丰富的食物，含有各种次生化合物，对健康有很大益处。番茄果实的糖含量部分是通过调节和分解果实和发育过程中的蔗糖来控制的。细胞壁转化酶 (CWI) 将蔗糖水解成单糖并将其运输到细胞质中，这意味着番茄的糖含量受 CWI 调控。同时，由于这种基因抑制是由 CIF1 基因的产物诱导的，因此 CIF1 基因的失活可能会增强番茄中的糖合成。目前，CRISPR/Cas9 系统是一种最先进的技术，在基因编辑方面具有广泛的应用和高精度。在本研究中，设计了适合 CIF1 基因的 gRNA 来构建表达构建体。将 pRGEB31-CIF1G2 质粒中的该表达系统引入到 DH10B 大肠杆菌菌株中。随后，携带该表达系统的载体成功转移到EHA105农杆菌菌株中。进一步地，含有载体pRGEB31-CIF1G2的农杆菌株系可用于在基因编辑的Tiny-Tim番茄株系中产生所需性状。
摘要。 Nurhayati，Ardie SW，Santoso TJ，Sudarsono。 2021。CRISPR/CAS9介导的水稻CV中的基因组编辑。 IPB3S导致半昏迷表型M
摘要。Nurhayati，Ardie SW，Santoso TJ，Sudarsono。2021。CRISPR/CAS9介导的基因组编辑，在水稻CV中。 IPB3S导致半昏迷的表型突变体。 生物多样性22：3792-3800。 IPB3S是印尼低地大米和高产品种。 但是，植物高度的姿势使其容易产生住宿，这可以降低产量。 这项研究旨在通过将CRISPR/CAS9 GA 20 OX2构建体引入IPB3s并开发半沃尔夫水稻突变体来编辑GA 20 OX2基因。 IPB3S的未成熟胚胎外植体用于由携带PC1300-CAS9/ GA 20 OX2的EHA105农杆菌菌株介导的转化过程，并通过更改再生培养基组成。 PCR分析表明，水稻CV。 IPB3S遗传转化获得了携带HPT基因的推定突变体T0线（生长效率为47.9％，而转化效率为19.3％）。 使用开发的再生培养基，我们获得了24种推定的水稻CV。 IPB3S T0突变线携带HPT。 再生IPB3S的最佳介质是A培养基（再生效率73.3％）。 IPB 8和IPB 14有可能在下一代评估。 在IPB 8-3突变体中观察到T1生成的最短植物高度。CRISPR/CAS9介导的基因组编辑，在水稻CV中。IPB3S导致半昏迷的表型突变体。 生物多样性22：3792-3800。 IPB3S是印尼低地大米和高产品种。 但是，植物高度的姿势使其容易产生住宿，这可以降低产量。 这项研究旨在通过将CRISPR/CAS9 GA 20 OX2构建体引入IPB3s并开发半沃尔夫水稻突变体来编辑GA 20 OX2基因。 IPB3S的未成熟胚胎外植体用于由携带PC1300-CAS9/ GA 20 OX2的EHA105农杆菌菌株介导的转化过程，并通过更改再生培养基组成。 PCR分析表明，水稻CV。 IPB3S遗传转化获得了携带HPT基因的推定突变体T0线（生长效率为47.9％，而转化效率为19.3％）。 使用开发的再生培养基，我们获得了24种推定的水稻CV。 IPB3S T0突变线携带HPT。 再生IPB3S的最佳介质是A培养基（再生效率73.3％）。 IPB 8和IPB 14有可能在下一代评估。 在IPB 8-3突变体中观察到T1生成的最短植物高度。IPB3S导致半昏迷的表型突变体。生物多样性22：3792-3800。IPB3S是印尼低地大米和高产品种。但是，植物高度的姿势使其容易产生住宿，这可以降低产量。这项研究旨在通过将CRISPR/CAS9 GA 20 OX2构建体引入IPB3s并开发半沃尔夫水稻突变体来编辑GA 20 OX2基因。IPB3S的未成熟胚胎外植体用于由携带PC1300-CAS9/ GA 20 OX2的EHA105农杆菌菌株介导的转化过程，并通过更改再生培养基组成。PCR分析表明，水稻CV。 IPB3S遗传转化获得了携带HPT基因的推定突变体T0线（生长效率为47.9％，而转化效率为19.3％）。 使用开发的再生培养基，我们获得了24种推定的水稻CV。 IPB3S T0突变线携带HPT。 再生IPB3S的最佳介质是A培养基（再生效率73.3％）。 IPB 8和IPB 14有可能在下一代评估。 在IPB 8-3突变体中观察到T1生成的最短植物高度。PCR分析表明，水稻CV。IPB3S遗传转化获得了携带HPT基因的推定突变体T0线（生长效率为47.9％，而转化效率为19.3％）。使用开发的再生培养基，我们获得了24种推定的水稻CV。IPB3S T0突变线携带HPT。 再生IPB3S的最佳介质是A培养基（再生效率73.3％）。 IPB 8和IPB 14有可能在下一代评估。 在IPB 8-3突变体中观察到T1生成的最短植物高度。IPB3S T0突变线携带HPT。再生IPB3S的最佳介质是A培养基（再生效率73.3％）。IPB 8和IPB 14有可能在下一代评估。在IPB 8-3突变体中观察到T1生成的最短植物高度。
双 sgRNA 定向 CRISPR/Cas9 构建体，用于编辑有色柑橘类水果中果实特异性的 β -环化酶 2 基因
CRISPR/Cas9 基因组编辑是一种现代生物技术方法，用于改良植物品种，仅改变特定品种的一个或几个性状。然而，由于缺乏对关键基因的了解、幼苗期较长以及特定品种的整株植物难以再生，这种技术不能轻易用于改良柑橘果实的品质性状。在这里，我们介绍了一种基因组编辑方法，目的是生产果实中同时含有番茄红素和花青素的柑橘幼苗。我们的方法采用双单向导 RNA (sgRNA) 定向基因组编辑方法来敲除果实特异性的 β-环化酶 2 基因，该基因负责将番茄红素转化为 β-胡萝卜素。两个 sgRNA 同时靶向该基因以产生大量缺失，并在两个 sgRNA 靶标中诱导点突变。农杆菌 EHA105 菌株用于转化五种不同的花青素甜橙（属于 Tarocco 和 Sanguigno 品种组）和“Carrizo”枳橙（一种柑橘砧木）作为柑橘转化的模型。在目标区域测序的 58 个小植株中，86% 成功编辑。最常见的突变是缺失（从 -1 到 -74 个核苷酸）和插入（+1 个核苷酸）。此外，在六个小植株中发现了一个新事件，包括两个 sgRNA 之间区域的倒置。对于发生单个突变的 20 个小植株，我们排除了嵌合事件。小植株在营养组织中没有表现出改变的表型。据我们所知，这项工作是使用基因组编辑方法潜在改善柑橘水果品质性状的第一个例子。