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土著观点和基因编辑
来自美国国家人类基因组研究所。 基因编辑可以看作是现代生物技术工具箱中最重要的添加，具有许多可能的用途。 然而，它重新点了遗传修饰（GM）产生的道德辩论。 在新西兰Aotearoa中，基因编辑被认为是GM，并且需要受环境保护当局的批准，这一过程需要考虑毛利人的观点。 本文探讨了毛利人价值观可以用来分析我国基因编辑的风险和好处的方式。 这些观点是从可用的研究，访谈和调查中收集的。 本文表明，毛利人对GM的观点的基础文化价值仍然与基因编辑有关。 虽然毛利人的参与者并未明确地反对基因编辑的想法，但他们建议按照案例进行监管批准。来自美国国家人类基因组研究所。基因编辑可以看作是现代生物技术工具箱中最重要的添加，具有许多可能的用途。然而，它重新点了遗传修饰（GM）产生的道德辩论。在新西兰Aotearoa中，基因编辑被认为是GM，并且需要受环境保护当局的批准，这一过程需要考虑毛利人的观点。本文探讨了毛利人价值观可以用来分析我国基因编辑的风险和好处的方式。这些观点是从可用的研究，访谈和调查中收集的。本文表明，毛利人对GM的观点的基础文化价值仍然与基因编辑有关。虽然毛利人的参与者并未明确地反对基因编辑的想法，但他们建议按照案例进行监管批准。
细胞外囊泡的基因编辑
摘要：CRISPR / CAS技术近年来已经急剧提高。已经表征了许多具有新属性的不同系统，并且已经设计了众多混合CRISPR / CAS系统，能够修改表观基因组，调节转录和DNA和RNA中正确的突变。但是，CRISPR / CAS系统的实际应用受到缺乏有效的交付工具的严重限制。在这篇评论中，概述了以核糖核蛋白络合物形式开发用于提供CRISPR / CAS的车辆的最新进展。最重要的是，我们强调使用细胞外囊泡（EV）进行CRISPR / CAS递送，并描述其独特的特性：生物相容性，安全性，合理设计的能力以及越过生物障碍的能力。可用的分子工具以可控制的方式将所需蛋白质和 /或RNA货物加载到囊泡中，并塑造电动汽车表面以靶向递送到特定的组织中（例如，使用靶向配体，肽或纳米生物体）。均出现了内源性（CRISPR / CAS的细胞内产生）和电动汽车的外源性（后生产）负载的机会。
哺乳动物细胞中的 CRISPR-Cas9 编辑
其他考虑因素！！• 贴壁细胞还是悬浮细胞？：两种方法都行，但悬浮细胞通常更容易（尤其是大规模培养）• 我的细胞系有核型分析数据吗？（细胞系可以是非整倍体 -> 更多等位基因可 KO）• 您所需的细胞系是否表达您需要的途径？
CRISPR-Cas9 介导的万古霉素基因编辑...
革兰氏阳性菌屎肠球菌正日益成为医院内获得性抗生素耐药性感染的病因。屎肠球菌生物学研究的一个基本部分依赖于生成靶向突变体的能力，但这一过程目前劳动密集且耗时，每个突变体需要 4 到 5 周。在本报告中，我们描述了一种依赖于屎肠球菌的高重组率的方法，以及应用成簇规律间隔短回文重复序列 (CRISPR)-Cas9 基因组编辑工具来更有效地在屎肠球菌染色体中生成靶向突变体。使用此工具和多重耐药临床屎肠球菌菌株 E745，我们在 lacL 基因中生成了一个缺失突变体，该基因编码屎肠球菌 β-半乳糖苷酶的大亚基。使用 5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷 (X-gal) 进行蓝白斑筛选可用于区分野生型和 lacL 缺失突变体。我们还将两个 gfp 拷贝插入到内在屎肠球菌大环内酯类抗性基因 msrC 中，以产生稳定的绿色荧光细胞。我们得出结论，CRISPR-Cas9 可用于在 3 周内对屎肠球菌进行有针对性的基因组修饰，且动手时间有限。这种方法可能适用于其他具有高内在重组率的革兰氏阳性菌。
crispr/cas9介导的基因编辑
简介评论：引言有效地介绍了CRISPR/CAS9系统的历史背景，从而将其从Escherichia Coli的发现成为其作为基因编辑工具的发展。Jennifer Doudna和Emmanuelle Charpentier的贡献得到了充分的详细说明，强调了他们独立的研究工作和最终的合作。CRISPR机制的解释是彻底的，涵盖了关键组成部分，例如Cas9蛋白，引导RNA，tracrrna和crrna。基因编辑过程的分步分解，包括DNA裂解，序列靶向和基因剪接，为理解系统的功能提供了强大的基础。提及PAM序列及其在特异性中的作用可确保在解释目标位点选择方面的清晰度。
改进的主要编辑允许在 Physcomitrium patens 中进行常规可预测的基因编辑
高效、精准的基因编辑是任何反向遗传学研究的黄金标准。最近开发的 Prime Editing 方法，即改进的 CRISPR/Cas9 [成簇的规律间隔的回文重复序列 (CRISPR)/CRISPR 相关蛋白] 编辑方法，已经达到了精度目标，但其编辑率还有待提高。我们提出了一种改进的方法，可在模型植物 Physcomitrium patens 中进行常规 Prime Editing，同时探索潜在的新 Prime Editing 改进。使用标准化的原生质体转染程序，通过直接植物选择评估了针对 APT 报告基因的多种 Prime Editing 向导 RNA (pegRNA) 结构和 Prime Editor 变体。综合起来，Prime Editor 表达的增强、pegRNA 3ʹ 延伸的修改以及在 pegRNA 的逆转录酶模板序列中添加同义突变，可显著提高编辑率，而不会影响编辑质量。此外，我们表明，prime editing 可以通过间接选择来编辑目标基因，正如 Ppdek10 突变体的产生所证明的那样。此外，我们确定植物逆转录转座子逆转录酶能够实现 prime editing。最后，我们首次展示了使用两个独立编码的肽进行 prime editing 的可能性。
基础编辑酶，用于用同时基因敲入和敲除
价值主张成功的细胞疗法的开发需要多重编辑和有效的CMC流程，但是对多个平台和连续处理步骤的需求通常会导致复杂性和成本增加。BEKI基因编辑策略通过结合敲入和敲除其他基因的插入，降低毒性和靶向效果的效果来提供解决方案（图1a）。不需要的副作用，例如染色体易位的发生，将其降低至几乎不可检测的最小值（图。1C）。这种方法可以增强安全性，最大程度地减少原代细胞的损失，降低GMP成本并简化优化和验证过程，从而使其成为细胞治疗开发的有吸引力的选择。
表观遗传编辑的新兴领域
DNA 甲基化由从头甲基转移酶 DNMT3a 和 DNMT3b 建立，并由 DNMT1 在细胞分裂过程中维持，DNMT1 优先识别半甲基化 DNA 而非非甲基化 DNA。1 DNA 甲基化可被十一种易位甲基胞嘧啶双加氧酶 (TET) 去除，包括 TET1、TET2 和 TET3。2 组蛋白修饰由不同的酶催化。各种组蛋白乙酰转移酶 (HAT) 和组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 催化或去除赖氨酸上的乙酰化。组蛋白甲基转移酶 (HMT) 和脱甲基酶催化或去除赖氨酸上的甲基化，蛋白质精氨酸甲基转移酶 (PRMT) 催化组蛋白尾部的精氨酸甲基化。小分子抑制剂是从小分子库中筛选出来的化合物，可干扰特定的生物过程。一些小分子抑制剂针对表观遗传过程，用于基础研究和治疗开发。这些抑制剂的靶标通常是表观遗传标记的写入者或擦除者。DNA 去甲基化剂，如 DNA 甲基转移酶抑制剂 (DNMTi)，可降低 DNA 甲基化，已用于抗癌治疗。
基因组编辑用于作物改良
印度农业研究理事会 (ICAR) 下属的国家植物生物技术研究所 (ICAR-NIPB) 是印度农业研究理事会 (ICAR) 下属的一家顶级研究机构。该研究所成立于 1985 年，最初名为印度农业研究所 (IARI) 的“生物技术中心”，旨在设计和利用分子生物学工具和技术进行农业研究。对生物技术在农业中的作用的预见使该中心声名鹊起，并于 1993 年升格为国家植物生物技术研究中心，2019 年升格为国家植物生物技术研究所 (NIPB)。国家植物生物技术研究所负责开发新工具和技术，并在植物生物技术领域取得突破，以改良作物。NIPB 的职责之一是培养植物生物技术领域的人力资源。