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调制激光对人类非常小的胚胎样（HVSEL）干细胞（PRP）（PRP）
abtract目标：已对调制的低能红端激光的生物学作用进行了研究，以提高有关人类非常小的胚胎样干细胞（HVSEL）在再生医学中的潜在临床使用的改善水平。材料和方法：确认HVSEL干细胞存在于血小板富血浆（PRP）的血小板中存在于从国家卫生服务血液和输血（NHSBT）中获得的正常外周血的散布。结果：使用流式细胞术在谱系阴性（LIN-）室中的HV-SEL干细胞（Oct 3/4，SSEA4和CXCR4）中，使用流式细胞术在PRP中鉴定出HVSEL干细胞增殖。实验证实了PRP中HVSEL干细胞的存在，然后将其暴露于5 MW，670 nm红色激光的歌曲调制，通过光相结合调节至1 MW输出3分钟，并在调制和激光暴露时间中进行变化。然后，使用流式细胞仪重新评估所得激光暴露的HVSEL干细胞以进行细胞增殖。与对照组相比，暴露于激光光的那些HVSEL干细胞显示HVSEL干细胞增殖的增加。结论：这是针对调制激光的HVSEL干细胞增殖的第一个报告。
基因编辑精子和卵子（不是胚胎）
受技术、法规和宗派挑战的拖累，在受精时编辑人类胚胎基因组的前景仍然是一个长期目标。考虑到这一现实，2015 年国际人类基因编辑峰会报告了编辑小鼠精子原干细胞，然后进行睾丸移植，从而修复了导致白内障的突变。2 然而，事实证明，该领域的进一步实验工作有限。同样有限的努力也体现在编辑卵子上，尽管随着干细胞衍生配子的前景成为现实，编辑配子可能会蓬勃发展。这一结果必然会将焦点从编辑胚胎的基因组转移到其前身配子。这可能会增加对基因组编辑过程的控制，包括消除胚胎嵌合体的问题。在本文中，我们讨论了编辑精子和卵子
人类胚胎发生：比较透视
了解人类胚胎学从历史上依赖于使用哺乳动物模型生物的比较方法。随着低输入方法的出现，研究了评估基因功能的遗传和表观遗传机制和有效技术，我们现在可以直接研究人类效果。这些进步改变了对非生产物种的早期胚胎发生的研究，从而提供了更广泛的保守和不同机制的理解。在这里，我们概述了人类植入前发展中的重大事件，并将其放置在哺乳动物进化的背景下，通过比较其他Eutherian和Metatherian物种中的这些事件。我们描述了关于植入后发展的研究的进步，并讨论了模仿植入后胚胎的干细胞模型。比较的观点强调了通过分子特征和功能研究分析不同生物体以揭示早期发展原理的重要性。这个成长的领域对再生医学有根本的影响，并提出了重要的道德考虑。
人类胚胎发生：比较透视
了解人类胚胎学从历史上依赖于使用哺乳动物模型生物的比较方法。随着低输入方法的出现，研究了评估基因功能的遗传和表观遗传机制和有效技术，我们现在可以直接研究人类效果。这些进步改变了对非生产物种的早期胚胎发生的研究，从而提供了更广泛的保守和不同机制的理解。在这里，我们概述了人类植入前发展中的重大事件，并将其放置在哺乳动物进化的背景下，通过比较其他Eutherian和Metatherian物种中的这些事件。我们描述了关于植入后发展的研究的进步，并讨论了模仿植入后胚胎的干细胞模型。比较的观点强调了通过分子特征和功能研究分析不同生物体以揭示早期发展原理的重要性。这个成长的领域对再生医学有根本的影响，并提出了重要的道德考虑。
通过将核糖核蛋白电穿孔到Zona-Intact牛胚胎
体细胞核转移或细胞质显微注射已用于产生基因组编辑的农场动物。但是，这些方法具有降低其效率的几个缺点。这项研究旨在开发电穿孔条件，使CRISPR/CAS9系统的传递到牛为有效的基因敲除。我们优化了电穿孔条件，以传递CAS9：SGRNA核糖核蛋白到牛合子，而不会损害胚胎发育。较高的电穿孔脉冲电压导致膜渗透性增加。但是，高于15 v/mm的电压降低了胚胎发育潜力。牛胚胎的Zona卵石不是有效的RNP电穿孔的障碍。使用针对最大膜通透性进行优化的参数，同时我们在靶向牛OCT4时达到了高基因编辑的速率，这导致100％评估的胚胎和预期在莫拉拉阶段对胚胎发育的预期停滞的100％蛋白质。总而言之，CAS9：SGRNA核糖核蛋白可以通过电穿孔到Zona-Intact牛合子的能力递送，从而导致有效的基因敲除。
创建针对Rfwd2的胚胎干细胞系
• 承包商将通过电子邮件向合同官员代表 (COR) 提供每月进度报告 • 所有货物均以最快的速度送达（例如当天、隔夜等） • 必须在美国东部时间下午 5 点之前的一个工作日（周一至周五）送达 • ES 细胞系和小鼠系交付的运输费用已包含在合同价格中 建议来源（一旦 Weiming 完成 IGCE 成本估算，这些项目将会更新） genOway Inc. 69362 Lyon cedex 07 France The Jackson Laboratory 600 Main Street Bar Harbor, ME 04609 Taconic Biosciences Five University Place Rensselaer, NY 12144 计划联系信息： Stephanie Fish（计划官员） 301-796-3748 stephanie.Fish@fda.hhs.gov David Frucht（主要项目经理） 240-402-9533 david.frucht@fda.hhs.gov
CRISPR 介导的基因组编辑牛胚胎中的嵌合性和脱靶突变评估
未经同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可不得重复使用。此预印本的版权所有者（此版本于 2020 年 6 月 4 日发布。；https://doi.org/10.1101/2020.06.04.134759 doi：bioRxiv preprint
利用 CRISPR/Cas9 介导的靶向整合生成 Y 染色体中含有 EGFP 基因的转基因克隆水牛胚胎
性别控制技术在家畜生产中具有重要意义，尤其对于快速繁殖的水牛（bubalus bubalis）具有重要意义，本研究以水牛为研究模型。我们已证实整合到小鼠Y染色体上的荧光蛋白可用于小鼠植入前胚胎的性别鉴定。首先，我们优化了增强型绿色荧光蛋白（eGFP）和mCherry外源基因在Neuro-2a细胞、小鼠胚胎干细胞、小鼠胚胎细胞（NIH3T3）、水牛胎儿成纤维细胞（BFF）中的靶向整合效率。结果表明，靶标两侧同源臂长度为800 bp比300 bp或300 bp/800 bp更有效。当细胞补充了 pifithrin-µ（一种抑制 p53 与线粒体结合的小分子）时，BFF 细胞中同源定向修复 (HDR) 介导的敲入也得到了显著改善。250 V 的三个脉冲在 BFF 细胞中产生最有效的电穿孔，并且发现 1.5 µ g/mL 嘌呤霉素是筛选的最佳浓度。此外，利用 CRISPR/Cas9 介导的基因编辑结合体细胞核移植 (SCNT) 技术成功生成了 Y-Chr-eGFP 转基因 BFF 细胞和克隆水牛胚胎。在第 6-8 代时，Y-Chr-eGFP 转基因 BFF 细胞的生长率和细胞增殖率明显低于非转基因 BFF 细胞；甲基化相关基因 DNMT1 和 DNMT3a 的表达水平相似；然而，与非转基因细胞相比，Y-Chr-eGFP 转基因 BFF 细胞中乙酰化相关基因 HDAC1 、 HDAC2 和 HDAC3 的表达水平显著较高（p < 0.05）。Y-Chr-eGFP 转基因 BFF 被用作 SCNT 的供体，结果表明 eGFP 报告基因适用于胚胎性别的可视化。克隆水牛胚胎的囊胚率相似；然而，与对照相比，转基因克隆胚胎的卵裂率明显较低。总之，我们优化了产生转基因 BFF 细胞的方案，并使用这些细胞作为供体成功产生了 Y-Chr-eGFP 转基因胚胎。
代际控制：为什么通过 CRISPR-Cas9 对胚胎进行基因改造不是父母的基本权利
2012 年，基因编辑领域出现了一项重大科学突破：CRISPR-Cas9 的发现。这项新技术使科学家能够比以往更快、更便宜、更准确地编辑人类基因组。研究人员现在有可能治愈癌症、ALS 和阿尔茨海默病等疾病。CRISPR 不仅提供了一种治愈目前患有疾病的人的机制，而且还建立了一种修改胚胎 DNA 的方法，以防止后代遗传该疾病。由于使用 CRISPR 改变人类基因组会给人类基因库带来不可逆转的代际影响——并且鉴于这项从子宫开始改变孩子未来的技术具有吸引力——本评论考虑父母是否有使用 CRISPR 编辑孩子 DNA 的基本宪法权利。
人工授精或胚胎移植认证表
我在此证明以下信息属实 我在此证明以下信息属实 关于以下母牛的胚胎移植的人工授精信息： 以下母牛： ________________________________________________ _____________________________________________ 母牛的注册名称 母牛的注册名称 ________________________________________________ _____________________________________________ 注册编号品牌/ ID # 注册编号品牌/ ID # ________________________________________________ _____________________________________________ 品牌/ ID # 位置 持有品牌和位置 品牌/ ID # 位置 持有品牌和位置 ________________________________________________ _____________________________________________ 认证公牛名称 母牛主人姓名 会员编号 ________________________________________________ _____________________________________________ 注册编号品牌 ID AI # 地址 _____________________________________________________ __________________________________________________ 授精员姓名 授精日期 认证公牛名称 _____________________________________________________ __________________________________________________ 授精员地址注册编号品牌/ ID # AI # _____________________________________________________ __________________________________________________ 城市、州、邮编 移植技术员姓名 移植日期 _____________________________________________________ __________________________________________________ 授精员签名 移植技术员地址 __________________________________________________ 移植技术员签名