CUT&RUN 方法 CUT&RUN 使用 CUTANA™ChIC/CUT&RUN 试剂盒进行,起始于 500k K562 细胞,含 0.5 µg IgG(EpiCypher 13-0042)、H3K4me3(EpiCypher 13-0060)、H3K27me3(EpiCypher 13-0055)或 0.125 µg CTCF(EpiCypher 13-2014)抗体,一式两份。使用 CUTANA™CUT&RUN 文库制备试剂盒(EpiCypher 14-1001/14-1002)以 5 ng DNA(或回收总量,如果少于 5 ng)进行文库制备。文库在 Illumina NextSeq2000 上运行,采用双端测序(2x50 bp)。样本测序深度为 5.5/18.8 百万个读数 (IgG Rep 1/Rep 2)、14.2/17.0 百万个读数 (H3K4me3 Rep 1/Rep 2)、24.7/18.1 百万个读数 (H3K27me3 Rep 1/Rep 2) 和 8.6/5.5 百万个读数 (CTCF Rep 1/Rep 2)。使用 Bowtie2 将数据与 T2T-CHM13v2.0 基因组比对。过滤数据以删除重复、多比对读数和 ENCODE DAC 排除列表区域。
靶标下切割和标记 (CUT&Tag) 是一种突破性的表观基因组图谱策略,它以之前的免疫束缚技术 CUT&RUN 和 ChIC 1-6 为基础。在 CUTANA ™ CUT&Tag 中,细胞核被固定在固体支持物上,抗体原位结合其染色质靶标。蛋白 A 和 G 与原核转座酶 5 (pAG-Tn5) 的融合用于选择性切割和标记抗体结合的染色质,并带有测序接头 (图 1)。使用 EpiCypher 独有的单管 (“直接 PCR”) 方法直接对标记片段进行 PCR 扩增,得到可测序的 DNA 6,7。