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VIII B结构域中F8废话变体的翻译读取有助于残留表达，抑制剂关联
在血友病A，F8废话的变体中，尤其是影响大因子VIII（FVIII）B结构域的，这对于凝结活性是不可接受的，与替代治疗相关的抗FVIII抑制性抗体显示出较低的关联，因此从多个国际数据库中检索。 由于无效的遗传条件有利于抑制剂的发展，因此我们认为对过早终止密码子（PTC）的翻译读取可能会通过插入氨基酸亚群来产生全长蛋白来促进免疫耐受性。 为了定量评估体外的读出输出，我们开发了一种非常敏感的基于荧光素酶的系统，以检测来自F8废话变体的宽面板（n = 45; 〜60％患有PTC）的宽面板（n = 45; 〜60％患者）的全长FVIII合成。 与抑制剂相关的PTC比抑制剂相关PTC的 PTC显示出更高的读取驱动表达水平，PTC是一种新的观察。 尤其是，比其他域中的变体（n = 25）检测到B域变体（n = 20）的水平更高。 对来自六名血友病A的血浆PTC患者的血浆研究，通过表达相应的胡说八道和读取的错义变体的表达，始终显示B域变体的FVIII水平较高。 在高度代表的PTC中发现了一个B域PTC（ARG814*），而与抑制剂无关，而与抑制剂病例的最低比例相关（57个中的4个）。 这些对血友病A分子遗传学的原始见解，尤其是与疾病治疗相关的基因型 - 表型关系，表明B域特征有利于PTC读取输出。，这对于凝结活性是不可接受的，与替代治疗相关的抗FVIII抑制性抗体显示出较低的关联，因此从多个国际数据库中检索。由于无效的遗传条件有利于抑制剂的发展，因此我们认为对过早终止密码子（PTC）的翻译读取可能会通过插入氨基酸亚群来产生全长蛋白来促进免疫耐受性。为了定量评估体外的读出输出，我们开发了一种非常敏感的基于荧光素酶的系统，以检测来自F8废话变体的宽面板（n = 45; 〜60％患有PTC）的宽面板（n = 45; 〜60％患者）的全长FVIII合成。PTC显示出更高的读取驱动表达水平，PTC是一种新的观察。尤其是，比其他域中的变体（n = 25）检测到B域变体（n = 20）的水平更高。对来自六名血友病A的血浆PTC患者的血浆研究，通过表达相应的胡说八道和读取的错义变体的表达，始终显示B域变体的FVIII水平较高。在高度代表的PTC中发现了一个B域PTC（ARG814*），而与抑制剂无关，而与抑制剂病例的最低比例相关（57个中的4个）。这些对血友病A分子遗传学的原始见解，尤其是与疾病治疗相关的基因型 - 表型关系，表明B域特征有利于PTC读取输出。这提供了有助于差异PTC相关抑制剂的潜在分子机制，对F8废话变体的新型，基于实验的基于实验的分类具有转移意义。
2024管理信息循环
HC 5G 5 R @C>@7 'C@IJ S HC 5DDC = Bh 5 H <= F8 D5FHM DFCLMHC 5G 5 R @C>@7 'C@IJ S HC 5DDC = Bh 5 H <= F8 D5FHM DFCLM
crispr/cas9介导的血友病小鼠模型
血友病A（HA）是由凝血因子VIII（FVIII）引起的一种常见出血疾病，长期以来一直被认为是基因治疗研究的有吸引力的靶标。然而，全长F8 cDNA不能通过腺相关病毒（AAV）向量能够充分包装。作为引起严重HA的第二大突变，F8内含子1反转（INV1）是由内骨体内重组引起的，因此大多数F8（外显子2-26）未转录。从理论上讲，可以通过整合启动子和外显子1。为了在体内测试此策略，我们通过删除F8的启动子区域和外显子1来生成HA小鼠模型。供体DNA和CRISPR/SACAS9被包装到AAV载体中，并静脉注射到HA小鼠中。治疗后，恢复F8表达并缩短了激活的部分凝血蛋白时间（APTT）。我们还比较了两个肝脏特异性启动子和两种整合供体向量。使用活性启动子时，所有处理过的小鼠都在尾盘挑战中幸存下来。这是一个体内基因修复策略的第一个报告，有可能治疗HA患者的复发突变。
解码靶向整合的复杂性：使用纳米孔测序表征 CRISPR-Cas9 靶位点的 DNA 插入
考虑到纳米孔测序的~5%测序错误（主要是插入和缺失）和供体片段的部分截断整合，我们在分配数据时基于预期的完美插入大小将间隔扩大±20%。然后，我们用正向骨架插入（Bf）、反向骨架插入（Br）、正向F8盒式插入（F8f）和反向F8盒式插入（F8r）的grepseqs分析了9个数据集特定长度范围内的数据。最后，我们计算出F8盒式插入和骨架整合的比例，分别为40.24%和44.47%。有趣的是，完全供体整合占总插入事件的14.16%，而其余的插入涉及两个相同的片段和三个片段的整合（图5B）。
利用半胱氨酸反应探针进行基于活性的蛋白质组学筛选，发现非半胱氨酸靶向共价抑制剂
摘要：酶的共价抑制剂作为药物种子越来越受到重视，但发现非半胱氨酸靶向抑制剂仍然具有挑战性。在此，我们报告了在基于活性的 1601 个反应性小分子蛋白质组学筛选过程中的一次有趣经历，其中我们监测了库分子与半胱氨酸反应性碘乙酰胺探针竞争的能力。一种环氧分子 F8 表现出对限速糖酵解酶甘油醛-3-磷酸脱氢酶 (GAPDH) 的探针反应性的意外增强。深入的机制分析表明，F8 与活性位点的天冬氨酸形成共价加合物以取代酶的辅因子 NAD + ，同时增强了探针与催化半胱氨酸的反应。机制基础使我们能够识别优化的天冬氨酸反应性 GAPDH 抑制剂。我们的研究结果表明，利用半胱氨酸反应探针进行基于活性的蛋白质组学筛选可用于发现与非半胱氨酸残基反应的共价抑制剂。
使用CRISPR/CAS9系统
图1的遗传转化效率（ET）线。10个选定的F8线被用作202材料，用于转化Pant1ox构建体。从幼苗中切出7天大的子叶，并通过pant1ox构建体转化203个子叶，然后在卡纳米霉素选择培养基上生长。在一个实验中使用了至少30个204个外植体。进行了三个生物学重复。pant1ox 205构造。kanr：kanamycin表达录音带（pnos-nptii-tocs），p35s：CAMV35S长启动器。b 206 slant1在番茄共叶中的表达（代表性图片）。上图：转换后21 207天的Slant1表达（DAT）。紫色箭头指示紫色斑点。下面板：紫色芽（左）208和水果（右）。c转换效率。y轴显示平均每209个外植体的紫色斑点。 X轴表示在本实验中测试的番茄F8线。数据表示平均值±SD。n = 3。210星号表示ET线与对照HK之间的显着差异（P <0.05），为211由t检验确定。212
噪声识别中的音乐：人工耳蜗植入者和正常听力对照者的听力努力的脑电图研究
尽管有大量研究调查聆听努力程度以及有关人工耳蜗 (CI) 用户音乐感知的研究，但是从未有人研究过背景噪音对音乐处理的影响。鉴于聆听努力程度评估的典型噪声中语音识别任务，本研究的目的是调查在不同背景噪音水平的音乐作品上进行情绪分类任务时的聆听努力程度。除了参与者的评分和表现之外，还使用已知与这种现象有关的 EEG 特征来调查聆听努力程度，即顶叶区域和左侧下额叶 (IFG)（包括布罗卡区）的 alpha 活动。结果表明，CI 用户在识别刺激的情绪内容方面的表现差于听力正常 (NH) 对照组。此外，当考虑对应于听信噪比 (SNR) 5 和 SNR10 条件的 alpha 活动时，减去听安静条件下的活动（理想情况下，去除音乐的情感内容并隔离由于 SNR 而导致的难度级别），CI 用户报告的顶叶 alpha 和右半球左 IFG 同源体（F8 EEG 通道）的活动水平高于 NH。最后，提出了 F8 对与 SNR 相关的音乐聆听努力具有特殊敏感性的新建议。
美国海军乐团音乐会/礼仪乐团号角试奏 2024 年 10 月 7 日
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