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Cas9 介导的 β-catenin 突变校正和...
目的：结直肠癌 (CRC) 是导致癌症死亡和发病率的主要原因之一。迫切需要找到对抗 CRC 的策略。APC 或 β -catenin 的驱动基因突变在 CRC 的发生和进展中起重要作用。在本研究中，我们联合应用 CRISPR/Cas9-sgRNA 系统和单链寡脱氧核苷酸 (ssODN) 作为模板来纠正结肠癌细胞系 HCT-116 中存在的 β -catenin 的杂合 Δ TCT 缺失突变。该方法为癌症的基因治疗提供了一种潜在的策略。方法：构建 Cas9/β -catenin-sgRNA-eGFP 共表达载体并与 ssODN 共转染到 HCT-116 细胞中。通过 FACS 分选突变校正的单细胞克隆，并通过 TA 克隆和 DNA 测序进行判断。通过实时定量PCR、Western印迹、CCK8、EDU染色和细胞接种克隆检测CRISPR/Cas9介导的校正效果。此外，还分析了裸鼠异种移植瘤中细胞克隆衍生肿瘤的生长情况。结果：CRISPR/Cas9介导的β-catenin突变校正导致TCT序列的存在和Ser45处磷酸化β-catenin的重新表达，从而恢复了磷酸化β-catenin的正常功能，包括减少核β-catenin的运输和下游c-myc、survivin的表达。在β-catenin突变校正的细胞中观察到细胞生长显著减少。移植了突变校正的HCT-116细胞的小鼠的肿瘤大小明显小于未校正的异种移植瘤。结论：本研究数据表明，通过 CRISPR/Cas9 和 ssODN 的组合来纠正驱动突变可以极大地改善癌细胞系的生物学行为，表明该策略在癌症基因治疗中具有潜在的应用价值。关键词：CRISPR/Cas9、ssODN、靶向基因编辑、β-catenin、结肠癌
Ekos血管内系统手册 了解肝癌 Therasphere™Y-90玻璃微球 骨骼运动出版物摘要 波士顿科学深脑刺激 Versapulse™PowerSuite™ Greenlight XPS™ 教育计划2024 endotak Reliance Steam的科学：由Carolina Urol 的FACS医学总监尼尔·D·肖尔（Neal D. endotak Reliance Reliance4-Front
ekos™和Ekos™ +血管内装置的注意：联邦法律（美国）将此设备限制为通过医生或按照医师的命令出售。仅 Rx。 在使用之前，请参阅完整的“使用说明”，以了解有关指示，禁忌症，警告，预防措施，不良事件和操作员的说明的更多信息。 INTENDED USE The EKOS+ Endovascular Device is intended to be used with EKOS-branded control systems to employ high frequency (1.5 MHz to 1.9 MHz), low-power ultrasound to facilitate the infusion of physician-specified fluids, including procedural fluids and thrombolytics, into the pulmonary and/or peripheral vasculature of adults. 它旨在由血管内介入程序中经历的医生使用。 Ekos+内血管系统不适用于神经血管系统。 是指与医师指定的流体提供的产品插入物，以进行流体特异性制剂，禁忌症，副作用，警告和预防措施。 使用EKOS+血管内系统的指示，由输注导管和超声核心组成，用于以下情况：•超声促进，控制和选择性的，包括嗜血栓塞的医生指定液体的血管内输注，用于治疗肺栓塞和/或深/或深/或深度静脉垂体。 •对医师指定的液体（包括溶栓剂）的控制和选择性输注到肺动脉和/或外围脉管系统中。 禁忌症Ekos+血管内装置禁忌用于：•禁忌溶血和/或抗凝治疗的患者。Rx。在使用之前，请参阅完整的“使用说明”，以了解有关指示，禁忌症，警告，预防措施，不良事件和操作员的说明的更多信息。INTENDED USE The EKOS+ Endovascular Device is intended to be used with EKOS-branded control systems to employ high frequency (1.5 MHz to 1.9 MHz), low-power ultrasound to facilitate the infusion of physician-specified fluids, including procedural fluids and thrombolytics, into the pulmonary and/or peripheral vasculature of adults.它旨在由血管内介入程序中经历的医生使用。Ekos+内血管系统不适用于神经血管系统。是指与医师指定的流体提供的产品插入物，以进行流体特异性制剂，禁忌症，副作用，警告和预防措施。使用EKOS+血管内系统的指示，由输注导管和超声核心组成，用于以下情况：•超声促进，控制和选择性的，包括嗜血栓塞的医生指定液体的血管内输注，用于治疗肺栓塞和/或深/或深/或深度静脉垂体。•对医师指定的液体（包括溶栓剂）的控制和选择性输注到肺动脉和/或外围脉管系统中。禁忌症Ekos+血管内装置禁忌用于：•禁忌溶血和/或抗凝治疗的患者。临床益处陈述EKOS+内血管内装置旨在用于对外科医师脉管系统或肺动脉的控制性和选择性输注（包括血栓溶液）的控制和选择性输注。临床益处可以通过总体临床结果来衡量，包括但不限于治疗PE时右心心功能和血液动力学稳定性的改善，或将医师指定的液体注入外周脉管系统的能力，以及低血压，复发性PE和所有因素的过失率低。•医师确定这种程序的任何情况都可能损害患者的病情。警告以下警告声明为EKOS+血管内系统安全操作提供了重要信息。观察这些说明中提供的所有警告。未能这样做可能会导致患者受伤，操作员受伤或产品损害。•始终验证超声芯和输注导管对的两个电连接器是否连接到相同的连接器接口电缆（CIC）。未能正确连接从超声核心输注导管对到同一CIC的两个电连接器可能会导致超声核的过度操作，从而可能损害患者的脉管系统。•随着灌注毛孔和/或药物流明可能会被阻塞，切勿将血液恢复到药物流明中。•请勿将输注导管“药物”或“冷却剂”输液连接到功率注射器上。•不超过200 psi，适用于任何输注luer。•如果通过输注导管的流动受到限制，请不要试图通过高压输注清除。要么去除输注导管（以及超声波芯，如果到位），以确定和消除障碍物的原因，或用同一模型的新输注导管代替输注导管。•切勿使用输注导管或超声核心的工作长度激活超声波能量。该设备应放置在患者解剖结构中，医师指定的流体穿过药物管腔，冷却剂流过冷却液管腔。否则，可能会导致过热，可能导致烧伤，超声核心损害和/或中断治疗。•从输注导管中删除超声波芯之前，请务必关闭超声波。否则，可能会导致过热，可能导致烧伤，超声核心损害和/或中断治疗。使用受损的超声核心可能会导致血管创伤。•在输送到输注导管中时，请勿变形或扭结超声波芯。如果在任何时候扭结了超声波芯，请不要尝试使用超声波核，因为扭结可能会导致使用过程中的性能或断裂降解。•切勿尝试将超声波芯与兼容Ekos+ Infusion导管以外的任何导管使用超声波芯。•不要尝试使用不兼容的工作长度（即135厘米输注导管和106 cm超声波核心，反之亦然）。不正确的匹配可能对患者有害，需要进行其他干预或手术。未能这样做可能会导致并发症。•切勿将超声波芯放入患者中，而没有先前放置输注导管。•切勿将电连接器或输注导管的灰色壳体浸入流体中。•请勿使用带有旋转止血瓣的介绍器鞘来引入EKOS+内血管内装置。通过旋转止血瓣插入或去除可能会导致射线照相带，拉伸或其他导管的其他损坏。•Ekos+内血管系统不适用于神经血管系统。预防措施在使用之前仔细阅读所有指令。观察所有这些说明中指出的所有预防措施。•在引入之前，每次从血管系统中取出输注导管时，输注导管都应冲洗。•如果通过输注导管的流动受到限制，请不要试图通过高压输注清除。要么去除输注导管（以及超声波芯，如果到位），以确定和消除障碍物的原因，或用同一模型的新输注导管代替输注导管。•EKOS+设备旨在在操作的前24小时内提供最佳的声学输出。•EKOS+设备仅应用于注入医师指定的流体，包括血栓溶液。其他类型的流体，除溶栓和程序液（肝素化盐水，盐水，对比培养基等）之外。），尚未评估与Ekos血管内装置一起使用。•该设备不是设计用于外围血管扩张器的设计。•在正常使用期间，超声能量可能导致治疗区的温度升高。导管表面温度最大为43°C。•应通过药物端口进行治疗剂，例如溶栓剂，而程序流体（例如盐水和造影剂）应通过冷却液端口或中央管道进行管理。•EKOS+内血管内设备仅在EKOS控制单元4.0上运行。它们与早期的Ekos / Ekosonic控制单元不兼容。如果将EKOS+设备连接到Ekos Cu 4.0以外的控制单元，则EKOS+设备将无法由控制单元识别，并且需要交换设备或控制单元才能继续进行。按照指示使用时可能与EKOS+内血管内系统有关的潜在不利事件包括但不限于：•过敏反应（对比度，设备或其他）•心律不齐•烧伤•心脏污染物•心脏污染物•心脏创伤•心脏创伤•死亡•死亡•栓塞，栓塞，栓塞，栓子，空气，pla，pla•pla•inse，••••••••••其他•••其他• Infection/Sepsis • Ischemia/Necrosis • Need for additional intervention or surgery • Pain • Pneumothorax • Renal Insufficiency/Failure • Respiratory Failure • Thrombosis/Thrombus • Vasospasm • Vessel Occlusion • Vessel Trauma (AV fistula, dissection, perforation, pseudoaneurysm, rupture or injury) 92882188 A.1 All other trademarks are the其各自所有者的属性。按照指示使用时可能与EKOS+内血管内系统有关的潜在不利事件包括但不限于：•过敏反应（对比度，设备或其他）•心律不齐•烧伤•心脏污染物•心脏污染物•心脏创伤•心脏创伤•死亡•死亡•栓塞，栓塞，栓塞，栓子，空气，pla，pla•pla•inse，••••••••••其他•••其他• Infection/Sepsis • Ischemia/Necrosis • Need for additional intervention or surgery • Pain • Pneumothorax • Renal Insufficiency/Failure • Respiratory Failure • Thrombosis/Thrombus • Vasospasm • Vessel Occlusion • Vessel Trauma (AV fistula, dissection, perforation, pseudoaneurysm, rupture or injury) 92882188 A.1 All other trademarks are the其各自所有者的属性。
PU.1 通过抑制巨噬细胞和成纤维细胞样滑膜细胞中的 FLT3 促进类风湿性关节炎的发展
摘要 目的 揭示必需转录因子 PU.1 在类风湿关节炎 (RA) 发展中的作用和潜在机制。方法 通过蛋白质印迹和免疫组织化学 (IHC) 染色确定 RA 患者滑膜中 PU.1 及其潜在靶标 FMS 样酪氨酸激酶 3 (FLT3) 的表达和定位。使用 UREΔ（PU.1 敲低）和 FLT3-ITD（FLT3 激活）小鼠建立胶原抗体诱导性关节炎 (CAIA)。对于体外研究，使用 siRNA 研究了 PU.1 和 FLT3 对原代巨噬细胞和成纤维细胞样滑膜细胞 (FLS) 的影响。从机制上讲，进行了荧光素酶报告基因检测、蛋白质印迹、FACS 和 IHC，以显示 PU.1 对巨噬细胞和 FLS 中 FLT3 转录的直接调控。最后，使用 PU.1 的小分子抑制剂 DB2313，通过两种体内模型（CAIA 和胶原诱导性关节炎 (CIA)）进一步说明 DB2313 对关节炎的治疗作用。结果与骨关节炎患者和正常对照相比，RA 患者的滑膜中 PU.1 的表达被诱导。与 RA 中的 PU.1 相比，FLT3 和 p-FLT3 表现出相反的表达模式。CAIA 模型表明，PU.1 是体内关节炎发展的激活剂，而 FLT3 是抑制剂。此外，体外测定结果与体内结果一致：PU.1 促进巨噬细胞和 FLS 的过度活化和炎症状态，而 FLT3 具有相反的作用。此外，PU.1 通过直接结合其启动子区来抑制 FLT3 的转录。 PU.1 抑制剂 DB2313 明显减轻了 CAIA 和 CIA 模型中对关节炎发展的影响。结论这些结果支持 PU.1 在 RA 中的作用，并且可能通过直接抑制 FLT3 产生治疗意义。因此，针对 PU.1 可能是 RA 的潜在治疗方法。
新鲜的冷冻血浆可能会降低内皮水平
背景：重大烧伤的患者与结晶和胶体的组合复苏。在烧伤复苏期间，还可以将新鲜的冷冻血浆（FFP）作为辅助性胶体溶液燃烧的患者（TBSA）燃烧。FFP可能会减少与大型TBSA烧伤相关的内皮功能障碍。此外，FFP可能通过影响脂肪衍生的干细胞释放的细胞因子水平（ADSC），特别是细胞因子VEGFF-A来改变患者的炎症状态。这项研究旨在研究FFP对烧伤患者VEGF-A水平的作用。方法：在IRB批准后，在初次手术期间从成年患者中收集脂肪组织。ADSC。荧光激活的ADSC的单细胞分选（FACS），以确定CD105，CD90和CD73抗体的纯度。ADSC在标准组织培养条件下生长，并收集上清液进行细胞因子分析。使用线性回归分析数据，以将FFP的总量与VEGF-A水平绘制总量以及Spearman相关性。结果：这项研究纳入了燃烧后36小时内接受FFP的14名患者。给出的FFP量为258-3186毫升，平均为1465±715 ml。这些患者的平均TBSA为42±22％，平均患者年龄为53±16岁。未来的研究需要增加样本量以支持这一发现。线性回归和Spearman相关性均显示出FFP量之间的中等强度相关性（r = -0.5758和Spearman系数= -0.433）。结论：VEGF-A先前已被证明在血管生成中起作用，这可以增加炎症细胞浸润并导致内皮细胞功能障碍。接受较高FFP水平的患者与较低水平的VEGF-A相关，表明较高剂量的FFP和降低的内皮细胞功能障碍之间可能存在相关性。
PU.1 通过抑制巨噬细胞和成纤维细胞样滑膜细胞中的 FLT3 促进类风湿性关节炎的发展
摘要 目的 揭示必需转录因子 PU.1 在类风湿关节炎 (RA) 发展中的作用和潜在机制。方法 通过蛋白质印迹和免疫组织化学 (IHC) 染色确定 RA 患者滑膜中 PU.1 及其潜在靶标 FMS 样酪氨酸激酶 3 (FLT3) 的表达和定位。使用 UREΔ（PU.1 敲低）和 FLT3-ITD（FLT3 激活）小鼠建立胶原抗体诱导性关节炎 (CAIA)。对于体外研究，使用 siRNA 研究了 PU.1 和 FLT3 对原代巨噬细胞和成纤维细胞样滑膜细胞 (FLS) 的影响。从机制上讲，进行了荧光素酶报告基因检测、蛋白质印迹、FACS 和 IHC，以显示 PU.1 对巨噬细胞和 FLS 中 FLT3 转录的直接调控。最后，使用 PU.1 的小分子抑制剂 DB2313，通过两种体内模型（CAIA 和胶原诱导性关节炎 (CIA)）进一步说明 DB2313 对关节炎的治疗作用。结果与骨关节炎患者和正常对照相比，RA 患者的滑膜中 PU.1 的表达被诱导。与 RA 中的 PU.1 相比，FLT3 和 p-FLT3 表现出相反的表达模式。CAIA 模型表明，PU.1 是体内关节炎发展的激活剂，而 FLT3 是抑制剂。此外，体外测定结果与体内结果一致：PU.1 促进巨噬细胞和 FLS 的过度活化和炎症状态，而 FLT3 具有相反的作用。此外，PU.1 通过直接结合其启动子区来抑制 FLT3 的转录。 PU.1 抑制剂 DB2313 明显减轻了 CAIA 和 CIA 模型中对关节炎发展的影响。结论这些结果支持 PU.1 在 RA 中的作用，并且可能通过直接抑制 FLT3 产生治疗意义。因此，针对 PU.1 可能是 RA 的潜在治疗方法。
低剂量 Pacritinib（III 期 Jak2 抑制剂）联合治疗可显著增加 P-gp 过表达且具有多药耐药性的癌细胞的凋亡
摘要。背景/目的：P-糖蛋白 (P-gp) 的过度表达是多药耐药 (MDR) 的主要机制。与 Janus 激酶 2 (Jak2) 抑制剂联合治疗可使 P-gp 过度表达的耐药癌细胞敏感。在本研究中，我们评估了目前处于 III 期临床试验中的 Jak2 抑制剂帕克替尼。材料和方法：进行显微镜观察、细胞活力测定、菌落形成测定、罗丹明摄取试验、膜联蛋白 V 分析、荧光激活细胞分选 (FACS) 和蛋白质印迹分析，以进一步研究作用机制。结果：我们发现当将帕克替尼与长春新碱 (VIC) 一起施用给 P-gp 过度表达的耐药 KBV20C 细胞时，帕克替尼降低了细胞活力，诱导了 G2 停滞，并上调了早期细胞凋亡。此外，VIC-帕克替尼治疗细胞中的细胞凋亡和 G2 停滞与 pH2AX 表达的上调有关。帕克替尼的 P-gp 抑制活性比二甲基亚砜 (DMSO) 处理的对照高出约 2 倍，表明 VIC-帕克替尼致敏涉及帕克替尼的 P-gp 抑制作用。与 VIC 类似，其他抗有丝分裂药物（长春瑞滨、长春花碱和艾日布林）也可以通过与帕克替尼联合治疗对 KBV20C 细胞产生致敏作用。此外，将帕克替尼与之前鉴定的 Jak2 抑制剂进行比较表明，在 KBV20C 细胞中，VIC-帕克替尼组合在较低剂量下具有与 VIC-CEP-33779 或 VIC-NVP-BSK805 组合类似的致敏作用。总体而言，Jak2 抑制剂和 VIC 联合治疗通过诱导早期细胞凋亡来增敏 P-gp 过表达的耐药癌细胞。结论：总的来说，pacritinib 诱导 G 2 停滞，降低细胞活力，具有高 P-gp 抑制活性，并上调
精氨酸酶抑制作用增加了l-精氨酸浓度，从而有助于Ca 2+依赖性eNOS激活
尽管精氨酸酶主要参与尿素循环的最后一个反应，但我们先前已经证明了精氨酸酶II是一种重要的胞质钙调节剂，以p32依赖性方式通过精子产生。在这里，我们证明了韵律素（RPT）是一种新型的药物精氨酸酶，并研究了其对Ca 2+依赖性内皮一氧化氮合酶（ENOS）激活的作用机理。rpt对小鼠肝脏和肾脏的精氨酸酶I和II均未抗拒抑制。它还抑制了主动脉和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中的精氨酸酶活性。使用显微镜和FACS分析，RPT处理使用Fluo-4 AM作为钙指标诱导胞质Ca 2+水平的增加。增加的胞质Ca 2+以时间依赖的方式引起了Camkii和Enos Ser1177的磷酸化。RPT孵育还增加了细胞内L-精氨酸（L-ARG）水平，并激活了HUVEC中的CAMKII/AMPK/AKT/ENOS信号级联。在WT小鼠的EC中，精氨酸酶抑制剂L-ARG和ABH，精氨酸酶抑制剂的治疗增加了细胞内Ca 2+浓度和活化的CaMKII依赖性eNOS激活，但是，在三磷酸三磷酸三磷酸酯受体1型敲除（IP3R1 - / - - / - - - - / - ）小鼠中未观察到这些作用。在WT小鼠的主动脉内皮中，RPT还增强了一氧化氮（NO）的产生和减弱的活性氧（ROS）产生。在这项研究中，我们提出了RPT的新型机制，在使用RPT治疗的主动脉组织组织的血管张力测定中，增强对乙酰胆碱（ACH）的累积血管舒张反应，并且苯乙肾（PE）依赖性的血管结合性反应受阻，尽管弱化了硝基胺和KCL钠反应，但并非不同。
生成Zeb2不足的人IPSC线（...
智力残疾，癫痫，赫希斯普朗氏病和各种先天性畸形（Garavelli and Mainardi，2007年）。此外，Zeb2的过表达与不同形式的癌症的进展有关（Fardi等，2019）。虽然已经对Zeb2蛋白的功能进行了广泛的研究，但目前缺乏可用的Zeb2缺乏的人类细胞模型，无法在胚胎发育过程中进一步删除Zeb2依赖性调节网络，并且可以取消抗癌药物的发展。为此，我们使用CRISPR/CAS9介导的编辑系统生成了人类IPSC线，耗尽了Zeb2蛋白（表1）。我们分别应用了两个靶向Zeb2外显子5和外显子6的GRNA（图1 a），在父母IPSC线上Kicri002a（表1;（Uhlin等，2017）。通过LiPofection将包含两个GRNA的构建体引入IPSC系，并通过荧光激活的细胞分选（FACS）选择转染的细胞以表达绿色荧光蛋白。单细胞克隆在LN521上扩展，并通过基因组DNA上的Sanger测序分析基因编辑。分析显示了具有纯合790 bp缺失的克隆线kicri002a-4，跨越了内含子5和外显子5和6的一部分（chr2：g.144,404,077 - 144,404,404,404,867del;1 a;补充。图1 A-B）。 外显子5和外显子6的其余部分被融合，预测氨基酸194上的截短的Zeb2 mRNA，其截短的Zeb2 mRNA（PTC）（P.THR188888888888888888888888;图1 A-B）。外显子5和外显子6的其余部分被融合，预测氨基酸194上的截短的Zeb2 mRNA，其截短的Zeb2 mRNA（PTC）（P.THR188888888888888888888888;图1 a）。与136PTC位于编码N末端锌指（NZF）域的区域以及更C末端的R-SMAD结合域（SBD），CTBP相互作用结构域（CID）（CID）和C-末端的c-terminal Zinc Zinc Finger（CZF（CZF）和Homeododomain（例如Domains）（epifa）（epifa）。
教学大纲
ns cc11-（th）-p01：生物分子，酶学和仪器生物分子：生命的化学基础 - 化学键合，涉及生物分子的力和构建块 - 大分子；信息大分子。蛋白质作为信息大分子；氨基酸的化学；多肽的一级，二级和三级结构；肽；肽亚基和第四纪结构， -helix，-薄片和胶原蛋白结构，蛋白质和氨基酸的代谢。碳水化合物的化学 - 单，二糖和多糖。DNA的分子结构，替代DNA结构，圆形和超螺旋DNA，DNA的变性和恢复，DNA的物理和化学稳定性。酶和反应动力学：酶的定义；活性位点，底物，辅酶，辅因子和不同种类的酶抑制剂；酶动力学，两种底物动力学，三种底物动力学，偏离线性动力学；配体结合研究；快速动力学；关联和解离常数；在酶动力学机理分析中使用同位素； pH，温度和同位素标记的底物对酶活性的影响；酶调节的变构模型；底物诱导酶的构象变化。电子显微镜：磁性和静电镜的理论及其焦距；电子显微镜的构造；限制分辨率和有用的放大倍数；对比形成；阴影和染色技术；扫描电子显微镜；标本准备技术；电子显微镜在细胞和分子生物学中的应用；嵌入和切割。仪器：生物系统光谱后的原理和应用：吸收光谱（UV-可见），荧光和磷光，圆形二色性（CD），红外光谱学（IR），共振拉曼光谱；电子旋转共振（ESR），液体闪烁计数器； pH计;超速离心，光学显微镜，光学显微镜；阶段，紫外线和干扰显微镜 - 其基本原理；光学系统和射线图 - 它们在细胞生物学中的应用；荧光显微镜；细胞和组织的微光照射法，荧光活化的细胞分辨率（FACS）。
CD4 T 细胞动力学影响溶瘤疱疹病毒和 BRAF 抑制剂联合治疗黑色素瘤的免疫反应
摘要 背景 单纯疱疹病毒 (HSV) 溶瘤病毒疗法和 BRAF 抑制剂 (BRAFi) 联合治疗是 BRAF 突变黑色素瘤有前途的免疫原性治疗方法，但需要更好地了解联合治疗的免疫生物学，以提高免疫检查点抑制剂 (ICI) 的益处。 方法 使用 BRAF V600E 驱动的小鼠黑色素瘤模型，我们在免疫功能正常的 C57BL 小鼠中测试了 HSV/BRAFi 的免疫原性。除了标准 FACS 分析外，我们还使用了“细胞动力学和活动计时器”系统，它可以分析不同 T 细胞亚群的时间动态。这些免疫数据用于指导三联疗法的 ICI 选择，然后使用转录组学进一步表征其效果。 结果 在 HSV 中添加 BRAFi 治疗可改善体内抗肿瘤作用，但没有改善体外抗肿瘤作用。免疫表征表明 HSV 或双重治疗导致肿瘤内 Treg 减少，尽管具有更活跃的表型，同时具有更多的效应 CD8 +T 细胞。Tocky 分析进一步表明，HSV/BRAFi 双重治疗降低了 Treg 和常规 CD4+ 亚群中的 Tocky 信号（反映与同源抗原的结合），但没有降低 CD8 + 细胞中的 Tocky 信号。然而，与常规 CD4 + 相比，治疗期间与抗原保持频繁接触的 Treg 百分比更高，反映了 CD4 + 区室内抑制功能优于效应功能。与肿瘤生长减少相关的唯一 T 细胞亚群是 Tocky 信号阳性的常规 CD4+，支持它们的治疗作用。靶向 CD25 高、抗原结合的 Treg 与消耗性抗 CD25 ICI，在三联疗法中 100% 的小鼠中实现了完全治愈。转录组分析证实，在 HSV/BRAFi 中添加抗 CD25 后，Foxp3 减少，同时反映干扰素信号传导和细胞毒性活性的基因表达增加。结论 HSV/BRAFi 联合疗法是 BRAF 突变型黑色素瘤的免疫原性疗法，但不能完全控制肿瘤。双重治疗导致 T 细胞发生变化