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将 CRISPR 干扰与 FACS 富集相结合：CHO 细胞系糖工程用于治疗性糖蛋白生产的新方法
图 2 富集具有低细胞表面岩藻糖基化的细胞。（A）Fut8 和对照池以及富集池和克隆的 AAL-FITC 染色。仅对生成的三个对照池和 Fut8 池中的一个进行染色并用于进一步富集。每个组中选择用于进一步评估的克隆都标有星号（参见图 S3 中仅选定的克隆）。（B）对来自 a) 的 FITC 信号的 MFI 进行量化。点表示每个染色池或克隆的测量值。（C）对对照和 Fut8 池以及在 6 天批次中培养的选定富集池和克隆中的 Fut8 基因表达进行 qPCR 量化。所有三个未富集的对照和 Fut8 池都进行了培养。点表示池（条 1、2、4、5）或单个克隆（3 和 6）的生物学重复。误差线表示池或单个克隆的生物学重复的 SEM。使用非配对 t 检验来计算对照和 Fut8 富集克隆之间的统计学意义
ry610大鼠抗人IL-13
通过刺激的人外周血淋巴细胞表达IL-13。用佛波尔12-溶解剂13-乙酸盐（PMA； Sigma，Cat。编号p-8139; 50 ng/ml）和离子霉素（Sigma，Cat。编号I-0634; 1μg/ml）在Golgistop™蛋白传输抑制剂的存在下（CAT。 编号 554724）。 用BD Cytofix™固定缓冲液固定细胞（CAT。 编号 554655），然后用BD/WASH™缓冲液洗涤并染色（CAT。 编号 554723）fitc小鼠抗人CD4抗体（CAT。） 编号 566911）和任何BD Horizon™RY610 RY610 RY610 IgG1，κ同种型对照（CAT。 编号 571676;左图）或BD Horizon™RY610大鼠抗人IL-13抗体（Cat。 编号 571260/571320;右图）使用BD Biosciences的细胞内细胞因子免疫荧光染色用于流式细胞仪分析方案。 双变量伪色密度图显示IL-13（或Ig同型对照染色）的相关表达与CD4的相关表达是从具有完整淋巴细胞的正向和侧面光片段特征的封闭事件中得出的。 使用BD Symphony A5™单元分析仪系统和FlowJo™软件进行流式细胞仪和数据分析。I-0634; 1μg/ml）在Golgistop™蛋白传输抑制剂的存在下（CAT。编号554724）。用BD Cytofix™固定缓冲液固定细胞（CAT。编号554655），然后用BD/WASH™缓冲液洗涤并染色（CAT。编号554723）fitc小鼠抗人CD4抗体（CAT。编号566911）和任何BD Horizon™RY610 RY610 RY610 IgG1，κ同种型对照（CAT。编号571676;左图）或BD Horizon™RY610大鼠抗人IL-13抗体（Cat。编号571260/571320;右图）使用BD Biosciences的细胞内细胞因子免疫荧光染色用于流式细胞仪分析方案。双变量伪色密度图显示IL-13（或Ig同型对照染色）的相关表达与CD4的相关表达是从具有完整淋巴细胞的正向和侧面光片段特征的封闭事件中得出的。使用BD Symphony A5™单元分析仪系统和FlowJo™软件进行流式细胞仪和数据分析。
RHAMM 靶肽作为分子成像探针对表达 RHAMM 的癌细胞进行成像
摘要 ：全球癌症发病率呈逐年上升趋势，开发新的癌症早期诊断方法势在必行。本研究致力于研究RHAMM靶肽在癌症分子诊断中的应用潜力。采用丙氨酸扫描法鉴定RHAMM靶肽的关键氨基酸，采用竞争性HA取代法，ELISA法评价肽与RHAMM-CT结合的特异性。通过基因工程方法获得RHAMM-CT，并用亲和层析法分离RHAMM-CT。用共聚焦显微镜评价RHAMM靶肽与肿瘤细胞表面受体的相互作用。结果表明，肽组成中的EEGEEZ片段是与RHAMM-CT结合所必需的。结果表明，RHAMM靶肽能特异性地与RHAMM-CT结合，并竞争性取代RHAMM上的HA。研究发现，聚集蛋白聚糖无法取代RHAMM-CT上HA结合位点的肽。研究结果表明，FITC肽能特异性地与前列腺癌细胞表面的RHAMM结合，因此，RHAMM靶向肽具有用于癌症早期分子诊断的潜力。
血脑屏障微流控体外三维动态模型用于研究免疫细胞的迁移
摘要：为了研究新化学和生物实体的生物分布，血脑屏障 (BBB) 的体外模型可能成为药物发现早期阶段的重要工具。在这里，我们展示了我们设计的内部三维 BBB 生物芯片的概念验证。这种三维动态 BBB 模型由内皮细胞和星形胶质细胞组成，它们在模拟血流的流动条件下共培养在聚合物涂层膜的相对两侧。我们的结果证明了 BBB 非常有效，证据是 (i) 跨内皮电阻 (TEER) 增加了 30 倍，(ii) 紧密连接蛋白的表达显著增加，以及 (iii) 与静态体外 BBB 模型相比，我们的技术解决方案具有较低的 FITC-葡聚糖渗透性。重要的是，我们的三维 BBB 模型有效地表达了 P-糖蛋白 (Pg-p)，这是脑源性内皮细胞的标志性特征。总之，我们在此提供了一种完整的整体方法和对整个 BBB 系统的见解，可能在临床和制药领域带来转化意义。
褪黑素增强骨肉瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性
化疗是骨肉瘤 (OS) 的常见治疗方法之一，但副作用多，而且在某些情况下由于化疗耐药性而疗效低下，因此研究骨肉瘤的新疗法至关重要。在这方面，我们将褪黑素与顺铂联合使用，并评估它们对 MG63 OS 细胞的影响。由于褪黑素具有抗癌特性，我们假设其与顺铂的联合使用可以提高顺铂的疗效。首先，使用 MTT 试验评估顺铂对 MG63 细胞的细胞活力和细胞毒性，结果表明褪黑素与顺铂联合使用可增加 MG63 细胞对顺铂的敏感性。此外，qRT-PCR结果显示顺铂和褪黑素联合作用后，MG63细胞中miR-181及P53、CYLD、CBX7和BCL2基因表达发生改变，P53、CYLD和CBX7表达增加，BCL2和miR-181b表达明显降低。此外，Annexin V/FITC比色法数据分析显示，顺铂和褪黑素联合作用后，MG63骨肉瘤细胞株的凋亡率明显升高。因此，我们的研究结果表明褪黑素联合顺铂可以增强顺铂对骨肉瘤细胞的治疗效果，本研究为骨肉瘤的治疗提供了一种新的思路。
细胞活力测定套件，绿色/红色荧光
细胞活力测定试剂盒，绿色/红色荧光提供了一种方便而健壮的方法，可以通过使用两种荧光染料，钙调钙钙钙钙蛋白盐AM和碘化丙啶，从而确定细胞活力，从而可以同时检测和区分可行的和不可行的细胞。作为荧光染料，钙软糖AM最初是非荧光的。被动地进入细胞后，仅存在于活细胞中的细胞内酯酶，将小钙蛋白AM水解为钙调钙蛋白（Bratosin等人）。绿色荧光的强度与酯酶活性量成正比，因此可以与活细胞的数量相关。碘化丙啶是第二种氟化染料；但是，与钙软糖不同，它只能越过死亡细胞的受损膜。进入死细胞后，碘化丙啶在与DNA结合时会产生红色。该试剂盒中的染料非常适合与荧光显微镜或荧光微孔板读取器一起使用，该板板读取器能够在FITC（适用于钙调蛋白）和TRITC（用于碘化丙啶）通道中检测。该测定法可以检测和量化粘附或悬浮培养物中的细胞增殖，或将其纳入体外细胞毒性测定法。
纳米粒子介导的炎性抑制剂的共递送提供了针对败血症
图2：MCC-DSR NP表征和内在化。（a）图绘制了MCC-DSR双重药物纳米颗粒的流体动力直径。显示为平均值±S.D.的数据（n = 3）。（b）双重药物纳米颗粒的冷冻物图像。比例尺：200 nm。（c）图显示了在人血清中孵育48小时的MCC-DSR双NP的大小和ZETA潜力的百分比变化。（d）PBS稳定性图在30天内显示了PBS中MCC-DSR NP的大小和ZETA潜力。C中显示的数据是平均值±S.E.M。 （n = 3）。 （e）IBMDMS的代表性显微镜图像以时间依赖的方式（0H至8H）封装的荧光颗粒内化。 核用核染色。 比例尺：100μm。 （f）通过共聚焦显微镜成像的荧光纳米颗粒的细胞摄取的定量分析。 （g）IBMDMS对不同浓度的5FAM颗粒的细胞摄取的流式细胞仪分析。 显示的数据是平均值±S.E.M。 （n = 3）。 通过单向方差分析和Dunnett的多重比较测试进行统计分析。 *p <0.05，** p <0.01，*** p <0.001。C中显示的数据是平均值±S.E.M。（n = 3）。（e）IBMDMS的代表性显微镜图像以时间依赖的方式（0H至8H）封装的荧光颗粒内化。核用核染色。比例尺：100μm。（f）通过共聚焦显微镜成像的荧光纳米颗粒的细胞摄取的定量分析。（g）IBMDMS对不同浓度的5FAM颗粒的细胞摄取的流式细胞仪分析。显示的数据是平均值±S.E.M。（n = 3）。通过单向方差分析和Dunnett的多重比较测试进行统计分析。*p <0.05，** p <0.01，*** p <0.001。
黑色素瘤细胞的铁死亡易感性
缩写：SMA，α平滑肌肌动蛋白；AA，氨基酸；BME，Eagle基础培养基；BMP4，骨形态发生蛋白-4；BFP，蓝色荧光蛋白；CoQH2，还原辅酶Q；CHP，氢过氧化异丙苯；DR，耐药；EBSS，Earle平衡盐溶液；EGF，表皮生长因子；FBS，胎牛血清；eIF2，真核起始因子2α；FACS，荧光激活细胞分选术；FITC，异硫氰酸荧光素；GAPDH，3-磷酸甘油醛脱氢酶；GFP，绿色荧光蛋白；GSH，谷胱甘肽；GSSG，谷胱甘肽二硫化物；GPX4，谷胱甘肽过氧化物酶4；HGF，肝细胞生长因子；HPLM，人血浆样培养基； iRFP，近红外荧光蛋白；Mel-MPM，黑色素瘤导向模块化生理培养基；MPM，模块化生理培养基；NAD，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸；NAMPT，烟酰胺磷酸核糖转移酶；NAMPTi，烟酰胺磷酸核糖转移酶抑制剂；NEAA，非必需氨基酸；NHDF，正常人真皮成纤维细胞；PI，碘化丙啶；ROS，活性氧；Se，亚硒酸盐；SLC3A2，溶质载体家族 3 成员 2；SLC7A11，溶质载体家族 7 成员 11；xCT，胱氨酸/谷氨酸转运蛋白
PE/CYANINE7抗小鼠LY-6A/E（SCA-1）抗体
APC抗小鼠LY-6A/E（SCA-1），生物素抗小鼠LY-6A/E（SCA-1），FITC抗小鼠LY-6A/E（SCA-1），PE抗小鼠LY-6A/E（SCA-1） （SCA-1），PE/CYANINE7抗小鼠LY-6A/E（SCA-1），AlexaFluor®488抗小鼠LY-6A/E（SCA-1），AlexaFluor®647抗小鼠LY-6A/E（SCA-1） LY-6A/E（SCA-1），PERP抗小鼠LY-6A/E（SCA-1），PERP/CYANINE5.5抗小鼠LY-6A/E（SCA-1），APC/CYANINE7抗小鼠LY-6A/E（SC-1），Light vilet 510™Anti-Mouse LY-6A/E（SCA/E（SCA） 711™抗小鼠LY-6A/E（SCA-1），亮紫色605™抗小鼠LY-6A/E（SCA-1），纯化的抗小鼠LY-6A/E（SCA-1）（MAXPAR®就绪），PE/Dazzle™594 Anti-Mouse-6A/E（SCA-6A/E（SCA-1），Prillial viret vilet 785™。抗小鼠LY-6A/E（SCA-1），AlexaFluor®700抗小鼠LY-6A/E（SCA-1），Brillial Violet 650™抗小鼠LY-6A/E（SCA-1），APC/FIRE™750抗小鼠LY-6A/E（SCA-1）
利用基因组编辑“非靶向”自身抗体，一项概念验证研究
图 2. B12L 的抗 AChR 反应性和 3H9 抗体的抗 DNA 反应性。（AE）HEK293T 细胞转染了编码小鼠烟碱 AChR 五亚基的两个质粒以及 Rapsyn（HEK293T-mAChR 细胞）。（A）流式细胞术分析显示，约 30% 的细胞表达质粒 1（mTagBFP）和质粒 2（iRFP670）的报告基因。（BD）HEK293T-mAChR 细胞（B 和 D）和 WT HEK293T 细胞（C）被用作间接免疫荧光 (IIF) 的底物，以 B12L 抗体产生细胞的上清液作为主要探针。通过流式细胞术 (BC) 或显微镜 (D) 分析细胞。 (D) 中的箭头表示 AChR 簇，由重组 B12L 加与 FITC 偶联的抗人 IgG 标记（绿色）。(E) 用流式细胞术分析 6 个上清液批次中 B12L 上清液标记的 HEK293T-mAChR 或野生型细胞的比例。(F、G、H、J) 通过 ELISA (F) 或 HEp-2 免疫荧光测定 (HEp-2 IFA) (GI) 测试 3H9 抗体产生细胞 (n=6) 或野生型 (WT) 细胞的上清液的抗 dsDNA 反应性。(G) 3H9 重组抗体在 HEp-2 IFA 中呈现均质核模式，(I) 类似于具有抗 DNA 自身抗体的人血清。(J) 平均 HEp-2 IFA 滴度为 1/40。误差线 = SD