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通过减少核背景荧光
在活细胞中基因组基因局的标签为研究基因组空间组织和基因相互作用提供了视觉证据。CRISPR/DCAS9（群集定期间隔短的短倾向重复序列/停用CAS9）通过DCAS9/SGRNA/荧光蛋白复合物与靶基因组基因座中重复序列的结合来标记基因基因。但是，核中存在许多荧光蛋白通常会引起高背景荧光读数。本研究旨在通过重新设计由DCAS9-Suntag-NLS（目标模块）和SCFV-SFGFP-NLS（信号模块）组成的当前CRISPR/DCAS9- SUNTAG标签系统来限制进入核的荧光模块的数量。我们删除了信号模块的核位置序列（NLS），并将EGFP的两个副本插入信号模块中。核的荧光强度与细胞质的荧光强度（N/C比）降低了71％，信号与背景（S/B比）的比率增加了1.6倍。该系统可以稳定地标记随机选择的基因组基因局基因局基因组基因座，少于9个重复序列。
从二维或三维荧光图像对小鼠脑内皮网络进行无偏分析
尽管关于血管和神经网络之间关系的知识正在逐渐被人们所了解，但神经系统疾病的神经中心方法通常导致人们对脑成熟和疾病中脑血管重塑的理解有限。然而，越来越多的证据支持内皮缺陷对神经系统疾病的发生和/或进展有贡献，包括但不限于阿尔茨海默病、多发性硬化症和自闭症谱系障碍。5 – 11 因此，迫切需要实施开源和标准化方法，以便在实验室模型中对脑血管结构进行系统和高通量分析。我们提出了一种简单、可靠且廉价的方案，旨在对固定组织上的小鼠脑内皮网络进行免疫染色，然后进行光学切片荧光，使用计算机方法处理二维或三维 (2D 或 3D) 数字图像。该方案提供了一种无偏量化脑血管结构重要指标的方法。
碳点结合介孔二氧化硅纳米粒子用于靶向癌症治疗和荧光成像
由于纳米粒子具有高比表面积和高表面活性，因此被广泛应用于不同的生物医学应用。7 纳米级载体由于其高稳定性、简便的化学功能、高效的细胞内化和高负载能力，在药物输送方面具有极大的吸引力。8 最近，人们还考虑开发具有不同表面化学和新颖能力的智能多功能纳米平台。9 在此背景下，利用靶向剂（尤其是抗体和适体）进行表面功能化，已被广泛用于高效、特异性地靶向递送纳米载体。10 用于同时诊断和治疗疾病的治疗诊断纳米平台的设计和开发是纳米技术的另一项杰出成就。11
从二维或三维荧光图像对小鼠脑内皮网络进行无偏分析
尽管关于血管和神经网络之间关系的知识正在逐渐被人们所了解，但神经系统疾病的神经中心方法通常导致人们对脑成熟和疾病中脑血管重塑的理解有限。然而，越来越多的证据支持内皮缺陷对神经系统疾病的发生和/或进展有贡献，包括但不限于阿尔茨海默病、多发性硬化症和自闭症谱系障碍。5 – 11 因此，迫切需要实施开源和标准化方法，以便在实验室模型中对脑血管结构进行系统和高通量分析。我们提出了一种简单、可靠且廉价的方案，旨在对固定组织上的小鼠脑内皮网络进行免疫染色，然后进行光学切片荧光，使用计算机方法处理二维或三维 (2D 或 3D) 数字图像。该方案提供了一种无偏量化脑血管结构重要指标的方法。
荧光偏振原位抑制剂合成与筛选：加速药物发现的有效方法
和核磁共振 (NMR) [7] 已经开发出来。但总的来说，这些检测方法仅限于小型动态组合文库 (DCL) 大小，使用相对大量的蛋白质 (> 10 μM) 并且操作繁琐。报道了一种鉴定蛋白酶抑制剂的方法，该方法涉及醛和亲核试剂的可逆原位反应，监测荧光报告底物水解的抑制情况。[8] 荧光偏振 (FP) 分析已与片段连接结合使用以优化蛋白质结合：通过与亲核片段的原位反应延伸荧光素标记的底物类似物肽与 C 端醛，以增强蛋白质结合亲和力。[9] 在这里，我们报告如何通过在单个孔中原位合成和筛选抑制剂 (ISISS) 来有效发现适合体内使用的人类酶抑制剂。 ISISS 方法将双正交反应与基于 FP 的靶标结合分析相结合，能够对大量片段组合进行时间无关的检测。ISISS 方法操作简单，可在 384 孔板高通量模式下进行（图 1）。我们将基于 FP 的 ISISS 策略应用于发现人类脯氨酰羟化酶 2 (PHD2) 的体内活性抑制剂，PHD2 是治疗慢性肾病 (CKD) 相关贫血的靶标。ISISS 方法采用荧光素标记探针，该探针由异硫氰酸荧光素 (FITC) 和强效 PHD2 抑制剂连接而成（探针结构如图 S2 所示），并通过 FP 分析监测低浓度人类 PHD2 (20 nM) 与竞争性配体的结合（图 S2）。 [10] PHD 催化作用对促红细胞生成素的生物合成有负面调节作用，因此 PHD 抑制剂可促进血红蛋白 (Hb) 的产生和红细胞生成。[11] PHD2 抑制剂有可能彻底改变贫血的治疗，首创的 PHD2 抑制剂罗沙司他现已获准用于临床。[12] 在这里，我们报告了 ISISS 方法如何有效地识别与罗沙司他具有相似效力的 PHD2 抑制剂，包括在体内环境中。根据 PHD2 活性位点的结构特征（图 2A）和双正交酰腙形式，我们能够识别出与罗沙司他具有相似效力的 PHD2 抑制剂。
一种赋予活细胞中蛋白质无洗蛋白质成像的基因荧光的一般策略
预印本（未通过同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。该版本的版权持有人于2024年12月27日发布。 https://doi.org/10.1101/2024.12.26.630335 doi：Biorxiv Preprint
使用无重原子敏化剂的电荷转移态荧光作为自参考来确定上转换量子产率
推荐引用 推荐引用 Kiseleva, N., Busko, D., Richards, BS, Filatov, MA, Turshatov (2020). 使用无重原子敏化剂的电荷转移态荧光作为自参考来确定上转换量子产率。《物理化学快报》11,XXX.，第 6560–6566 页。doi:10.1021/acs.jpclett.0c01902
多重荧光原位杂交 (M-FISH) 揭示 HAP1 细胞系中的染色体不稳定性 (CIN)
摘要背景：HAP1 是一种近单倍体人类白血病癌细胞系，常与 CRISPR-Cas9 基因编辑技术结合用于基因筛选。HAP1 携带费城染色体 (Ph) 和插入 19 号染色体的额外的约 30 Mb 的 15 号染色体片段。体外细胞系作为生物医学研究模型系统的潜在用途取决于其维持基因组稳定性的能力。作为一种具有近单倍体基因组的癌细胞系，HAP1 容易出现遗传不稳定性，而其在培养中自发二倍化的倾向进一步加剧了这一问题。此外，CRISPR-Cas9 基因编辑加上长时间的体外细胞培养可能会诱发意外的“脱靶”细胞遗传学突变。为了深入了解染色体不稳定性 (CIN) 和核型异质性，使用多重荧光原位杂交 (M-FISH) 在单细胞分辨率下对 19 个 HAP1 细胞系进行了细胞遗传学表征，其中 17 个为近单倍体，两个为双单倍体。我们重点研究了新的数值 (N) 和结构 (S) CIN，并讨论了观察到的不稳定性的潜在致病因素。对于每个细胞系，我们检查了其倍性、基因编辑状态和体外细胞培养时间。结果：19 个细胞系中有 16 个已经过基因编辑，传代次数从 10 到 35 不等。17 个近单倍体细胞系的二倍体化范围为 4% 到 35%，[1n] 和 [2n] 中期的 N- 和 S-CIN 百分比范围为 7% 到 50%，两个细胞系没有显示 CIN。两种双单倍体细胞系中患有 CIN 的细胞百分比分别为 96% 和 100%。观察到的最常见的 S-CIN 是缺失，随后是非相互易位和罗伯逊易位。有趣的是，我们观察到近单倍体和双单倍体细胞系中都普遍存在与 13 号染色体相关的 S-CIN，且涉及 13 号染色体的罗伯逊易位发生率很高。此外，基因座特异性 BAC（细菌人工染色体）FISH 使我们首次能够显示额外的 15 号染色体片段插入到 HAP1 基因组 19 号染色体的 p 臂而不是 q 臂中。结论：我们的研究揭示了 CIN 的高发生率，导致大多数 HAP1 细胞系的核型异质性，并且细胞系之间的染色体畸变数量有所不同。值得注意的观察是与 13 号染色体相关的结构染色体畸变频率很高。我们表明，CRISPR-Cas9 基因编辑技术与自发二倍体化和长期体外细胞培养相结合，可能有助于在现有 CIN 的 HAP1 细胞系中诱导进一步的染色体重排。
stern – Volmer分析空心光子光子晶体纤维微反应器中光催化剂荧光猝灭
在后一种情况下。这些能量分散机制不仅对催化的量子效率具有深远的影响 - 显然对储能应用至关重要，而且对反应的催化转换率也具有最重要的意义。6给定光催化剂 - 猝灭剂组合的淬火和松弛之间的分馏用于光催化反应发育中的机械询问，以识别或确认哪些分子物种与兴奋的光催化剂相关。一种常见的技术是发光淬火（船尾– Volmer）分析，该分析测量了给定淬火物种的PC*淬火率，这是其浓度与辐射衰减过程竞争的函数。7实际上，该技术已经发现了提供机械洞察力的应用，并且最近已将其作为一种高通量筛选技术，用于发现新型的合成有机转化。8,9
用于高效有机发光二极管的非对称热活化延迟荧光材料
在材料科学中，开发具有聚集诱导发射的热活化延迟荧光 (TADF) 发射器对于构建高效电致发光器件至关重要。在此，基于高度扭曲的强吸电子受体 (A) 硫芴 (SF) 修饰的酮 (CO) 和芳胺供体 (D)，通过简单的合成程序高产率设计和制备了两种具有迷人聚集诱导发射的不对称 TADF 发射器 SFCOCz 和 SFCODPAC。所得分子具有高达 73% 的光致发光量子产率和 0.03 eV 的小单重态-三重态分裂；令人惊讶的是，由这些发射器促进的高效非掺杂和掺杂 TADF 有机发光二极管 (OLED) 显示出 5,598 和 11,595 cd m − 2 的高亮度、16.8 和 35.6 cd/A 的电流效率 (CE)、9.1 和 29.8 lm/W 的功率效率 (PE) 以及 7.5% 和 15.9% 的外部量子效率 (EQE)。这项工作为探索高效的 TADF 发射器提供了一个具体的例子，这对同时促进具有高亮度和出色效率的 TADF OLED 的发展非常有利和令人鼓舞。