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使用创新方法克隆和表达 UbiA 人类基因，在 PUAST 载体中生产重组蛋白
简介：Gal4/UAS 调控的转基因系统文库已被证明是一种强大的遗传系统，可用于识别基因和定义发育途径。该系统提供了宝贵的见解，强调了动物和人类之间的进化保守性。目标：本研究的目的是克隆、表达和表征 UbiA 基因。该研究提出了一种高效的基因克隆方法，使用 UbiA -pcDNA3 基因作为哺乳动物克隆的模型。然后将这些基因整合到果蝇的 PUAST 载体中，这是一种常用于生产重组蛋白的表达载体和真核细胞系统。材料和方法：从人细胞中分离 UbiA，并合成互补 DNA。根据 UbiA 基因序列设计寡核苷酸引物对，分别在正向和反向引物的 5' 端加入 XhoI 和 Xbal 限制位点。然后通过 PCR 扩增 UbiA 基因，克隆到 pcDNA3 质粒中，并对得到的重组质粒进行测序。随后将该基因亚克隆到PUAST载体中，在真核细胞系统中S2细胞中表达，通过Western印迹技术进行蛋白测定和验证。结果：通过菌落PCR和酶切验证UbiA基因克隆到PUAST载体中，通过酶切和基因测序验证克隆和亚克隆技术。克隆的UbiA基因与同源基因的同一性为99%。Western印迹结果表明纯化的蛋白为一条60kDa的单条带。结论：利用PUAST载体提供的真核表达系统可以实现更多UbiA基因的蛋白合成，该技术已被证明是一个合适的平台，可用于治疗学、药理学和疫苗开发等各种应用。
使用创新方法的Ubia人类基因的克隆和表达，用于PUAST载体中的重组蛋白质的产生
简介：被证明是GAL4/UAS调节的转基因的系统库，已被证明是识别基因和定义发育途径的强大遗传系统。该系统提供了有价值的见解，可以突出动物与人之间的进化保护。目标：这项研究的目的是克隆，表达和表征UBIA基因。该研究使用UBIA -PCDNA3基因作为哺乳动物克隆的模型提出了克隆基因的高效方法。然后将这些基因整合到果蝇的puast载体中，果蝇是一种表达载体和真核细胞系统，通常用于产生重组蛋白。材料和方法：从人类细胞中分离出UBIA，并合成互补的DNA。基于UBIA基因序列设计了一个寡核苷酸引物对，分别在正向和反向引物的5端掺入Xhoi和Xbal限制位点。然后通过PCR扩增UBIA基因，克隆到PCDNA3质粒中，并测序所得的重组质粒。随后，将基因sub clone到Puast载体中，并在S2细胞中以真核细胞系统表示。蛋白质的确定和验证是通过蛋白质印迹技术进行的。结果：通过酶菌落-PCR和酶消化实现了将UBIA基因克隆到Puast载体中的确认。克隆和子克隆技术通过酶消化验证，以及基因测序。克隆的UBIA基因与相同基因之间的身份呈现99％。，我们通过60 kDa大小的蛋白质印迹揭示了一种奇异的带纯化蛋白质。结论：通过使用PUAST载体提供的真核表达系统，可以实现更多蛋白质基因的蛋白质合成。该技术已被证明是一个合适的平台，可以在治疗，药理学和疫苗开发等各种应用中发挥作用。