图2。吉布森组装反应效率和准确性对反应时间的依赖性。(a)与吉布森组装反应混合物转化的大肠杆菌菌落形成的比较。数据代表具有标准偏差的平均CFU计数(n = 9)。(b)RCA反应使用吉布森组装克隆产物作为模板产生。使用Quant-IT PICOGREEN DSDNA测定试剂盒对反应产量进行定量。数据表示标准偏差(n = 3)的平均值。(c)使用插入片段侧面的载体特异性引物对大肠杆菌转化体进行群落PCR筛选。用SYBR安全染料将等量的PCR产物加载在1%的E-E-Gel琼脂糖凝胶上。m:e-gel 1 kb Plus Express DNA梯子用作分子大小标准,NC:由无插入的矢量组成的负对照,NTC:非板块对照。
在任何特定事实或情况下。Gibson Dunn(及其分支机构,律师和雇员)不得与使用这些材料有关的任何责任。这些材料的共享不能与
在白宫的头几周,乔·拜登(Joe Biden)总统签署了28项执行命令,比最近在任职的第一个月的任何近期总统签署的命令还要多,包括一系列备受瞩目的主题,包括经济,冠状病毒大流行和移民。但也许拜登在环境和气候问题上所做的努力代表了与当前国家政策的最大差异 - 在许多情况下,不仅反映了唐纳德·特朗普总统的环境放松调节议程的完全逆转,而且要比贝登民主的前者巴拉克·奥巴马(Barack Barack Obama)更大。基于拜登(Biden)迄今为止发表的行政行动,声明,备忘录和信件,我们已经确定了与新政府第一个月的环境执法和政策问题有关的三个关键要点。这些席卷的变化将对许多高度监管的行业产生有意义的影响,并会立即影响国家的环境法。环境正义是竞选期间执法的重点,拜登承诺,他的政府“认识到,颜色和低收入社区的社区几十年来一直面临着气候变化和环境污染物的不成比例的伤害,并将“持有“负责”对“负责”的企业污染者”“ [1]寻求兑现这一诺言,总统的环境司法倡议始于美国司法部本身的结构。律师在全国范围内的办公室。[3]biden指示司法部考虑重命名其环境和自然资源部,或纳入环境正义和自然资源部[2],同时任命司法部建立一个新办公室,以协调其组成部分和美国
Raymond J. DiCamillo、Kevin M. Gallagher、Daniel E. Kaprow 和 Caroline M. McDonough,RICHARDS, LAYTON & FINGER,PA,特拉华州威尔明顿;David J. Margules 和 Brittany M. Giusini,BALLARD SPAHR LLP,特拉华州威尔明顿;Mark A. Kirsch 和 Adam H. Offenhartz,GIBSON, DUNN & CRUTCHER LLP,纽约州纽约市;Colin B. Davis,GIBSON, DUNN & CRUTCHER LLP,加利福尼亚州欧文市;Terence M. Grugan,BALLARD SPAHR LLP,宾夕法尼亚州费城;Kevin P. Chilton 将军、Thomas A. Corcoran、Eileen P. Drake 和 Lance W. Lord 将军的法律顾问
体现的数学学习是基于人类通过有目的的运动,感官的使用以及创造和利用工件与身体和社会环境互动的能力。作为一个田间范式,体现的学习源于认知科学的体现转弯,它坚持认为,感知和动作是我们思维的形式上是我们思维的组成型 - 认知是固有的模态和位置的活动(例如,Chemero,2013),它吸引了身体与世界与世界(Gibson,gibson,1986,1986年)的物理互动。因此,认知(包括学习和知识)源于感知和运动系统的活动,因此,依次是由身体的物理特性和运动能力塑造的(Glenberg,2010年)。这些想法为更新课程设计和学习和教学资源提供了强大的动力(Shapiro&Stolz,2019年)。
Bakkensen和Barrage 2021; Casey,Fried和Gibson 2022; Rudik等。2021)•气候和长期发展:我们发现错误分配通道是越野TFP差异的关键驱动力。
图1。用户输入区分了BioXP系统上DNA扩增的工作流程。对于所有三个选项,可以使用限制酶来消化产物,以获取放大DNA的线性片段。套件的选择取决于所需的自动化程度。Acceptable inputs are sequence-confirmed plasmid templates that will be amplified on the BioXp system (left), DNA fragments and the appropriate cloning vectors which are subsequently cloned and amplified on the BioXp system (middle), and digital sequences to be synthesized, cloned into user-provided vectors, and amplified on the BioXp system.请注意,对于所有克隆应用,吉布森组装是克隆方法,序列必须具有与吉布森组装兼容的悬垂。
观察调度程序。Gibson 和这项工作得到了 NOAO/KPNO 本科生研究体验 (REU) 计划的支持,该计划由 NSF REU 计划 (AST-1262829) 资助,并获得了美国能源部 SC0007881 拨款。
带有PCR纯化套件。此后,从含有IL-2和BI-特异性基因的预先形成的慢病毒F9质粒和BI-特异性F9质粒中扩增了IL-2信号肽和双特异性AVRAN-BIS或DURAN-BIS蛋白构建体。使用与KOD DNA聚合酶的PCR反应进行扩增,与噬菌体质粒同源的引物(补充表S1中的引物为G)。此后,使用吉布森装配方法的方案将PCR产物克隆到开放噬菌体质粒中,然后转化为电竞争性的大肠杆菌。使用Allin™Red Taq Mastermix进行了用于Gibson组装和质粒插入验证的菌落PCR,并将上述序列呈阳性的菌落转移到含有氨苄青霉素LB(25 µg/mL)和