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CRISPR 敲入协议 - 用于刺激人类 T 细胞......
注意：确保将 Cas9 蛋白作为反应中的最后一种材料添加。如果进行了敲除编辑，则无需添加 HDRT。表中 Cas9 与 sgRNA 的比例为 1:3。强烈建议对每个设计进行 Cas9：sgRNA 比例以及 Cas9 蛋白和 HDRT 的量进行实验优化。GenScript 建议通过测试 1:1 和 1:4 之间的 RNP 比例开始优化。ssDNA 或 dsDNA 的量可以分别最初设置在 1 μ g - 4 μ g 或 0.2 μ g - 1 μ g 之间（对于 0.5 kb 和 4 kb 之间的 HDRT；如果 HDRT 长度超出此范围，则需要相应调整试剂量）。最好为第一次实验设置阴性对照、阳性对照和转染对照。
CRISPR 敲入方案
注意：确保将 Cas9 蛋白作为反应中的最后一种材料添加。在 KO 实验中，无需添加 HDRT。表中 Cas9 与 sgRNA 的比例为 1:3，对于 1.8kb ssDNA，HDRT 为 4 μ g。强烈建议针对每个具体设计对 Cas9：sgRNA 比例以及 Cas9 蛋白和 HDRT 的量进行实验优化。GenScript 建议通过测试 1:1 和 1:4 之间的 RNP 比例开始优化。我们建议 ssDNA 的量可以设置在 2 μ g 和 6 μ g 之间（对于 0.5kb 和 4kb 之间的 HDRT 长度；如果 HDRT 长度超出此范围，则可能需要适当调整试剂的量）。最好为第一次实验分别设置阴性对照、阳性对照和转染对照。
CRISPR敲入协议 - 用于Jurkat细胞...
注意：确保将Cas9蛋白添加为反应中的最后材料。在KO的情况下，无需添加HDRT。表中Cas9与SGRNA的比率为1：3，对于1.8kb dsDNA，HDR为1μg。强烈建议每种特定设计对CAS9的实验优化：SGRNA比和Cas9蛋白和HDRT的量。Genscript建议通过测试1：1至1：4之间的RNP比率开始优化。我们建议最初可以将DsDNA的量设置在0.5μg和3μg之间（对于0.5kb和4KB之间的HDRT；如果HDRT长度超过此范围，则可能需要适当调整试剂的量）。为第一个实验分别设置负面对照，阳性对照和转染控制是最好的做法。
缺乏 G 蛋白黏蛋白结构域的 RSV 减毒活疫苗候选物具有减毒、免疫原性，可有效预防 BALB/c 小鼠的 RSV
重组 RSV 病毒的组装和拯救 先前描述了重组 A2-line19F 的拯救，该病毒在 A2 骨架中表达 mKate2 和 RSV 菌株 line19 融合蛋白 [ 16 ]。为了生成在 A2-line19F 骨架内表达修饰的 G 蛋白的重组病毒，从 GenScript 获得了合成的 G 核苷酸序列，其两侧是 SacI-SacII 限制性位点，用于将相应的 G 基因克隆到 pSynkRSV-A2-line19F 细菌人工染色体中。得到的菌株 A2-line19F-G155 缺失了 G 蛋白粘蛋白结构域，而菌株 A2-line19F-G155S 缺失了 G 蛋白粘蛋白结构域和跨膜结构域，因此它只表达缺乏粘蛋白的分泌性 G 蛋白（图 1 和图 2）。为了回收重组病毒，将 BSR-T7/5 细胞与 RSV 反基因组
用于特定细胞靶向和药物输送的多功能淀粉样蛋白寡聚纳米粒子
116 试剂和酶。除非另有说明，试剂和酶均从 Sigma-Aldrich（英国）购买。碳网格（400 平方目铜）从 Micro to Nano（荷兰）购买，醋酸铀酰溶液由巴塞罗那自治大学的显微镜服务部门提供。Sup35- 121 SAC 肽从 CASLO ApS（Scion 丹麦技术大学）购买。122 蛋白质的表达和纯化。克隆到带有 His6 标签的质粒 pET28(a) 中的 Sup35- 123 5aa-DHFR 的 cDNA 是从 GenScript 获得的。通过在 128 质粒 pET28(a)/Sup35-5aa-DHFR 上进行诱变，获得了构建体 pET28(a)/Sup35-8aa- 126 DHFR、pET28(a)/野生型 DHFR (DHFR-wt) 和 pET28(a)/ 127 Sup35-5aa-DHFR-Z。用相应的质粒转化大肠杆菌 BL21 (DE3)- 129 感受态细胞。130 然后，将转化细胞在 10 mL 溶源性肉汤 (LB) 中培养
果糖与葡萄糖：调节干细胞生长和通过补充糖的功能
试剂或资源源标识符化学品，肽和重组蛋白Puelink RNA Mini Kit Invitrogen 12183018A ISCRIPT™ISCRIPT™cDNA合成Kit Kit Biorad 1708840 Sybr™SELICS SYBR™SELECT MASTER MASTER MASTER MIST 4-12％，10井Genscript M00653胶原酶II Sigma C2-28-100MG DMEM（无葡萄糖）GIBCO GIBCO 11-966-025 FBS FISHER FISHER FISHER SCOCICILIFIC SH3010903 PENICILLIN SH30103 PhosSTOP Roche 4906845001 IBMX Sigma 410957 Insulin Sigma I5500 Indomethacin Sigma 405268 Triiodothyronine (T3) Sigma T6397 Dexamethasone Sigma 265005 Rosiglitazone Sigma PHR2932 LipidTOX deep red neutral lipid stain Fisher Scientific H34477超级阻止诱因37535抗体抗KHK Sigma HPA007040抗HIF1α（D2U3T）细胞信号传导14179抗PPARγ（C26H12）细胞信号2443 C/EBPα细胞信号8178 Anti-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-EBPα细胞信号8178 Anti-al timnigin-αtubin tim-αtubin（38）细胞信号2250质粒和siRNA PVSV-G添加剂138479 PCL-ECO ADDGENE 12371 PBABE-NEOLARGE TCDNA ADDGENE 1780人HIF1A 3091 sirna accell drm-a-a-a-a-004018230001生物。n/a
使用内部血清组检查来自多个商业和 1 实验室平台的 SARS-CoV-2 血清学检测结果 2 3
摘要 严重急性呼吸综合征（SARS）冠状病毒 2（SARS-CoV-2）是一种 2019 年发现的新型人类冠状病毒。SARS-CoV-2 感染会导致一种急性、严重的呼吸道疾病，称为 2019 年冠状病毒病（COVID-19）。SARS-CoV-2 的出现和迅速传播已导致全球公共卫生危机，并持续影响全球人口。实时逆转录聚合酶链反应 (rRT-PCR) 是 COVID-19 诊断的参考标准测试。血清学检测是血清监测计划和建立疾病保护相关性的宝贵工具。本研究评估了一种内部酶联免疫吸附试验（ELISA）的性能，该试验利用了 SARS-CoV-2 刺突（S）的预融合稳定胞外结构域，两种市售化学发光试验 Ortho VITROS 免疫诊断产品抗 SARS- CoV-2 总试剂包和 Abbott SARS-CoV-2 IgG 试验以及一种市售替代病毒中和试验（sVNT）、GenScript USA Inc.、cPass SARS-CoV-2 中和抗体检测试剂盒，用于检测 SARS-CoV-2 特异性抗体。使用一组 rRT-PCR 确诊的 COVID-19 患者血清和阴性对照组作为参考标准，所有三种免疫测定法均显示出较高的可比阳性率和较低的不一致率。三种免疫测定法均具有高度敏感性，估计敏感性为 95.4%-96.6%。ROC 曲线分析表明，三种免疫测定法均具有较高的诊断准确度，曲线下面积 (AUC) 值范围为 0.9698-0.9807。常规 54 微量中和试验 (MNT) 滴度与 sVNT 抑制百分比值之间表现出高度正相关性。我们的研究 55 表明，需要进行独立评估以优化血清学检测的整体效用和 56 结果的解释。总体而言，我们证明本研究中评估的所有血清学检测都适用于检测 SARS-CoV-2 抗体。58 59 60 数据摘要 61 62 本研究中未生成新的外部数据、工具、软件或代码。63
公司摘要：无花果（因子诱导基因）疗法
公司摘要：无花果（因子诱导基因）治疗药物是一家生物技术公司，致力于开发我们的SGT（Stealth Gene Therapy TM）用于治疗癌症的平台。SGT平台核心是一种肿瘤内传递的脂质 - 纳米颗粒封装的质粒DNA，该质粒编码为高效的癌症特异性启动子/增强子区域，以驱动关键疾病修饰剂的鸡尾酒的表达。我们的主要候选人SGT-001专注于治疗高风险的局部前列腺癌，在一线治疗后，超过50％的患者患有癌症复发，旨在通过解决肿瘤内细胞因子免疫疗法的先前试验来改善肿瘤微疗法（TME）。未满足的需求：超过50％的前列腺癌患者（每年33K）患有高风险局部疾病，在标准治疗后患有癌症复发。复发后，通过抑制雄激素受体（AR）或其配体来抑制护理标准 - 囊肿/雄激素剥夺疗法（ADT），enzalutamide/apalutamide和abiraterone。然而，AR抑制会在11个月内（enzalutamide/abiraterone）诱导抗药性和更具侵略性疾病的形成至2年的起始。免疫疗法来解决前列腺肿瘤的进展：例如，在大多数患者中，直接注射IL-2质粒到前列腺肿瘤中显示出强大的细胞毒性T细胞浸润和PSA水平的显着降低。然而，没有看到长期的原发性抗肿瘤免疫反应，我们现在知道这是由于免疫抑制性TME引起的。开始辅助研究所需的实验应花费约50万美元，需要6-8个月。我们的新型多模式SGT-001治疗不仅将细胞毒性免疫细胞直接募集到肿瘤中，而且还抑制了免疫抑制性TME。解决方案/产品FIG Therapeicts已开发了SGT-001，这是一种多核苷酸，募集了在癌症中过表达的转录因子，以驱动蛋白质/miRNA的多模式免疫疗法鸡尾酒，募集抗肿瘤的细胞毒性免疫细胞并抑制免疫抑制性的肿瘤肿瘤。SGT-001通过使用优化的AR特异性启动子/增强子区域对前列腺癌细胞的特异性提高了前列腺癌免疫疗法，从而可以在不损害特异性的情况下进行混杂递送。通过由AR驱动，SGT-001避免了当前AR驱动的AR抑制作用机制逃脱。2）通过使用多模式系统，SGT-001具有高效的效率，并且具有单个信号，可以驱动多个基因，这些基因募集细胞毒性CD8+，γδ和NK细胞，并抑制肿瘤巨噬细胞（TAMS）（TAMS）和骨髓抑制的细胞的免疫抑制作用。SGT-001将在肿瘤切除前每周/每两周用MRI或超声指导作为新辅助治疗进行。尽管我们的重点最初是在高风险前列腺癌上，但我们计划扩展到其他由转录因子过度表达的癌症（乳房，胰腺等）驱动的癌症。商业里程碑：我们已经与Acuitas Therapeutics和Aldeveron建立了关系，以开发和制造我们的基因疗法。此外，设计了我们的铅选择所需的所有质粒，并准备从Genscript购买。此外，我们刚刚提交了NIH SBIR I阶段赠款，与精英SBIR赠款写作公司（BBC）紧密合作。我们的赠款与特殊利益的通知（Not-ai-24-007）紧密相符，我们相信这笔非二线赠款的成功机会很大，这是为了付出这笔410美元的非第二授予赠款。竞争/竞争优势/客户益处：前列腺癌领域的竞争对手专注于通过抑制雄激素受体抑制癌细胞生长和扩散的策略。这种方法的问题是它在短时间内引起了抵抗。没有竞争对手试图利用癌细胞对细胞过程的认可来驱动多模式疗法。如果成功，与当前疗法相比，通过更好的安全性，无花果治疗方法将导致一种治疗，从而为患者提供更好的生活质量。重要的是，该公司的疗法可以为患者提供高风险的局部疾病，从而无需损害疗法（例如cast割）就可以做出真正的完全反应和治愈。公司最初的重点是高风险的局部前列腺癌（占前列腺癌患者的22％）。50-90％的高危局部疾病患者接受标准治疗（前列腺切除术或辐射）患有复发。如果临床试验证明是有益的，我们的疗法将成为标准，从而延迟了cast割治疗和延长生存期，同时保留了生活质量。财务预测，该公司目前正在筹集50万美元的预赛回合，以涵盖潜在客户选择和IP策略。计划在2025年进行种子回合，以涵盖辅助疗效/TOX研究和分析发展。此外，该公司还利用非二元资本，今年拥有40万美元的I期SBIR赠款，并计划在2026年申请200万美元的II期SBIR赠款。预计将在2027年开始临床试验。
业务描述 /公司背景：无花果（因子诱导基因）治疗学是一家早期生物技术公司，已开发出基因T < / div>
业务描述 /公司背景：无花果（因子诱导基因）治疗学是一家早期生物技术公司，它已经开发出一种基因疗法，该基因疗法利用癌症中过表达的转录因子来驱动多模式免疫疗法。Our Stealth Gene Therapy TM is an intratumorally delivered, lipid-nanoparticle encapsulated, polynucleotide that recruits cancer-causing transcription factors to drive a proprietary cocktail of genes that both induce anti-tumor immune cell infiltration and inhibit the immunosuppressive tumor microenvironment (TME).我们目前的重点是治疗高风险的局部前列腺癌，在第一线治疗后，超过50％的患者患有癌症复发。我们同时利用我们的隐形基因疗法TM平台技术来开发其他癌症。市场机会 /未满足需求：大多数癌症是由关键转录因子（TFS）过度表达的驱动。自然，抑制这些TFS是医疗治疗的最佳治疗策略。尽管这种方法起初起作用，但阻力在1 - 2年内迅速发展，导致更具侵略性的疾病。前列腺癌（男性中的＃1癌症）是由雄激素受体（AR）驱动的。尽管前列腺切除术和辐射是局部前列腺癌的标准治疗方法，但超过50％的高风险局部疾病患者（每年33K）在标准治疗后患有癌症复发，并接受直接和间接的AR抑制治疗（castration疗法）。癌症是一种主免疫逃避者。已经失败，除非解决，否则将继续失败。cast割治疗）。尽管在11个月至2年内引起了重大副作用并引起抵抗，但这些AR抑制性药物的年收入超过200亿美元。利用免疫系统杀死癌细胞已被寻求作为一种治疗策略，可以避免使用TF抑制剂看到耐药性。免疫抑制肿瘤微环境是许多针对实体瘤的免疫疗法（CAR-T，新抗原癌疫苗，细胞因子疗法等）的原因产品 /服务 - 启动和管道：无花果治疗学已经为这两个问题开发了一种解决方案。而不是抑制引起癌症的转录因子（TFS）并诱导抗性，我们利用它们的功能：转录基因。我们已经开发了一种专有的多核苷酸，该多核苷酸编码启动子/增强子序列，该启动子/增强子序列是针对多种癌症定制的，这些序列募集了引起癌症的TFS以驱动基因鸡尾酒。这些基因不仅募集了有效的抗肿瘤免疫细胞，而且还会修饰免疫抑制性肿瘤微环境内和细胞外的。我们劫持了癌细胞，并将其从免疫逃避者转变为一种免疫疗法机器，该机器训练免疫系统以在本地杀死癌细胞，并在任何地方藏起来。最重要的是，由于该疗法是由癌症升高的TF驱动的，因此尽管非特异性分娩，我们可以混杂注入整个组织并获得癌症特异性。我们的疗法将在肿瘤切除前每周/每两周用MRI或超声指导作为新辅助治疗。允许延迟或潜在消除对TF抑制剂的需求（即这不仅可以防止抗药性发展和更具侵略性疾病的发展，而且还可以改善患者的生活质量。尽管我们目前对概念验证的重点是高风险的局部前列腺癌，但我们正在利用平台技术同时开发用于黑色素瘤，乳腺癌和胰腺癌的类似结构。商业 /技术里程碑：我们最近提交了一项40万美元的非债务NIH SBIR I期赠款，与一家精英SBIR赠款写作公司（BBC）紧密合作。鉴于我们的赠款与特殊利益的通知（非AI-24- 007）紧密相吻合，我们认为今年12月发行的成功机会很大。我们已经与Genscript，Acuitas Therapeutics和Aldeveron建立了关系，以开发我们的临床前发展的关键试剂。已经完成了我们与生物孵化器的合同到来自多个CRO的报价所需的所有质粒设计和步骤。我们还拥有一项专利，该专利涵盖了我们治疗性的几乎所有迹象和变体。在全速执行之前，我们正在等待的单一绿灯是我们的预付资金回合。竞争/竞争优势/客户收益：目前没有竞争者利用过表达的转录因子来推动特定于癌症的，免疫抑制肿瘤的微环境中和，中和，多峰治疗。前列腺癌领域的竞争者主要集中在抑制雄激素受体的策略上。我们相信我们可以做得更好。在新辅助环境中目前尚无批准的前列腺癌药物。如果成功至少，我们的疗法将成为手术肿瘤切除或辐射之前的患者的护理标准，以延迟或消除癌症复发。此外，我们的疗法有可能提高无数其他免疫疗法（已批准和发育）的疗效，从CAR-T细胞疗法到双特异性T细胞纳入者，再到单克隆抗体，在实体瘤的治疗中。pluvicto是一种新近批准的药物，仅将无进展生存的药物增加6个月，被认为是未来的大片。财务预测，该公司目前正在筹集40万美元的预赛回合，以涵盖潜在客户选择和IP策略。计划在2025年进行850万美元的种子回合，以涵盖效力/托克斯研究和分析开发。此外，该公司还利用非二元资本，今年拥有40万美元的I期SBIR赠款，并计划在2026年申请200万美元的II期SBIR赠款。我们的A系列弹将在2026年为我们的临床试验提供资金。