加入6孔板中并在28°C下孵育2小时(不摇晃)以形成单层。我们制备了8μL Cellfectin II 试剂(Gibco-10362-100)和1μg每种DNA样本,并根据Bac-to-Bac手册提供的指导进行孵育。去除培养基后,将DNA转染试剂复合物逐滴加入6孔板中。将板在28°C下孵育5小时。然后,在从细胞培养板中取出DNA样本后,向每个孔中加入3mL不含抗生素的新鲜培养基进行孵育。每隔24小时观察一次细胞病变效应(CPE)。感染后72-96小时收获P0重组杆状病毒,并进行噬斑测定(Bac-to-Bac手册)以检查滴度。收获P1和P2以增加重组杆状病毒的库存和滴度,用于蛋白质表达。
尽管疫苗已经广泛使用了多年,但他们未能控制中国田间的H9N2禽流感病毒(AIV)。针对H9N2病毒的高水平母体衍生抗体(MDA)导致家禽中的H9N2流感疫苗衰竭。这项研究旨在生成一种新的疫苗来克服鸡在H9N2疫苗接种中的MDA干扰。,我们使用火鸡疱疹病毒(HVT)作为疫苗载体来表达H9血凝集素(HA)蛋白。表达H9 HA蛋白(RHVT-H9)的重组HVT在原代鸡肉胚胎成纤维细胞(CEF)中成功产生和表征。Western印迹和间接免疫荧光测定法(IFA)表明RHVT-H9始终表达HA蛋白。此外,RHVT-H9具有与母体HVT相似的生长动力学。初步动物实验表明,与常规的全部病毒(IWV)疫苗相比,RHVT-H9刺激了用被动转移的抗体(PTA)刺激用于模拟MDA的鸡的耐受性体液免疫。传播实验表明,RHVT-H9在PTA的鸡中诱导了体液和细胞免疫。此外,我们使用数学模型来量化疫苗在防止H9N2 AIV传播方面的功效。结果表明,RHVT-H9降低了病毒脱落周期,并降低了同源挑战后PTA的鸡的繁殖比(R)值。但是,该试验中的疫苗接种尚未带来R <1。总而言之,我们生成了一种新的RHVT-H9疫苗,该疫苗刺激了强烈的体液和细胞免疫,即使在鸡中存在PTA的情况下,也可以减少H9N2 AIV的病毒脱落和传播。
H9N2鸟类流感病毒是低致病性禽流感(LPAI),除非病毒感染与其他背景或继发感染变得复杂。这种感染通常会导致经济损失。人们担心H9N2病毒在家禽种群中循环时可能会发展并变得高度致病。因此,基于咨询
流感(H9N2)病毒在哺乳动物模型中表现出差异复制和传播表型。J Virol。2020; 94:e00451-20。https://doi.org/10.1128/jvi.00451-20 6。 le Kt,Nguyen LT,Huynh LT,Chu DH,Nguyen LV,Nguyen TN等。 H9和H6的遗传,抗原和病理生物学表征从2014年到2018年在越南分离出来的低致病性禽流感病毒。 微生物。 2023; 11:244。 https://doi.org/10.3390/ micronismss11020244 7。 Tan M,Zeng X,Xie Y,Li X,Liu J,Yang J等。 报道了2021年中国H9N2鸟类流感病毒的人类感染。 前公共卫生。 2023; 11:1255969 https://doi.org/10.3389/fpubh.2023.1255969 8。 um S,Siegers JY,Sar B,Chin S,Patel S,Bunnary S等。 人类感染禽流感(H9N2)病毒,柬埔寨,2021年2月。 紧急感染。 2021; 27:2742–5。 https://doi.org/10.3201/eid2710.211039https://doi.org/10.1128/jvi.00451-20 6。le Kt,Nguyen LT,Huynh LT,Chu DH,Nguyen LV,Nguyen TN等。H9和H6的遗传,抗原和病理生物学表征从2014年到2018年在越南分离出来的低致病性禽流感病毒。微生物。2023; 11:244。 https://doi.org/10.3390/ micronismss11020244 7。Tan M,Zeng X,Xie Y,Li X,Liu J,Yang J等。 报道了2021年中国H9N2鸟类流感病毒的人类感染。 前公共卫生。 2023; 11:1255969 https://doi.org/10.3389/fpubh.2023.1255969 8。 um S,Siegers JY,Sar B,Chin S,Patel S,Bunnary S等。 人类感染禽流感(H9N2)病毒,柬埔寨,2021年2月。 紧急感染。 2021; 27:2742–5。 https://doi.org/10.3201/eid2710.211039Tan M,Zeng X,Xie Y,Li X,Liu J,Yang J等。报道了2021年中国H9N2鸟类流感病毒的人类感染。前公共卫生。2023; 11:1255969 https://doi.org/10.3389/fpubh.2023.1255969 8。um S,Siegers JY,Sar B,Chin S,Patel S,Bunnary S等。人类感染禽流感(H9N2)病毒,柬埔寨,2021年2月。紧急感染。2021; 27:2742–5。https://doi.org/10.3201/eid2710.211039
结果:我们生产了一种不含佐剂的自组装纳米颗粒疫苗,可对抗多种甲型流感病毒。这种纳米颗粒疫苗在幽门螺杆菌铁蛋白表面显示多抗原靶点,该铁蛋白由 H3N2 病毒血凝素的胞外域和三个串联高度保守的甲型流感病毒 M1 表位组成,这些表位与通用辅助 T 细胞表位 PADRE 融合,称为 HMP-NP。HMP-NP 在杆状病毒-昆虫细胞系统中以可溶形式表达,并自组装成均质纳米颗粒。动物免疫研究表明,HMP-NP 纳米疫苗引起的血凝抑制 (HAI) 滴度比灭活甲型流感疫苗高 4 倍。 HMP-NPs 对 H3N2 病毒和 H1N1 和 H9N2 病毒异源株诱导的中和滴度分别比灭活流感疫苗高约 8、12.4 和 16 倍。同时,我们还观察到 HMP-NPs 诱导的 IFN-γ 和 IL-4 分泌细胞数量比灭活流感疫苗高约 2.5 倍。重要的是,使用 HMP-NPs 进行鼻内免疫(不使用任何佐剂)可诱导有效的粘膜 IgA 反应并赋予对 H3N2 病毒的完全保护,以及对 H1N1 和 H9N2 病毒的部分保护,并显着降低肺病毒载量。
原创文章 鱼油对实验感染禽流感病毒 H9N2 的肉鸡生长性能和免疫反应的影响 Ihsan Ali 1#、Asim Aslam 1*、Habib-ur-Rehman 2、Beenish Zahid 3、Ishtiaq Ahmed 1 1 巴基斯坦旁遮普省拉合尔兽医和动物科学大学病理学系,2 巴基斯坦旁遮普省拉合尔兽医和动物科学大学生理学系,3 巴基斯坦旁遮普大学动物学系 文章历史 收到日期:2017 年 3 月 1 日 修订日期:2017 年 10 月 19 日 接受日期:2017 年 12 月 11 日 作者贡献 AA、BZ:参与购买肉鸡和套件。 IA:参与进行血清学和组织学研究的实验和样本收集,BZ,IA:参与组织病理学研究。HR:分析数据。关键词 组织病理学 淋巴器官 肉鸡 禽流感病毒
2020 年 2 月 16 日至 5 月 15 日期间,欧洲报告了 290 起高致病性禽流感 (HPAI) A(H5) 病毒疫情,感染者包括保加利亚、捷克、德国、匈牙利和波兰的家禽 (n=287)、圈养鸟类 (n=2) 和野生鸟类 (n=1),意大利报告了两起低致病性禽流感 (LPAI) A(H7N1) 病毒疫情。在欧洲发现的 287 起家禽疫情中,有 258 起是二次疫情,这表明在绝大多数情况下,病毒的传播不是由野生鸟类引起的。除保加利亚报告的三起 A(H5N2) 疫情外,所有 HPAI 疫情均为 A(H5N8)。从东欧和中欧国家分离出的 HPAI A(H5N8) 病毒的基因分析表明,这是来自非洲的 HPAI A(H5N8) 病毒和来自欧亚大陆的 LPAI 病毒之间的重配体。在保加利亚发现了两种不同的亚型,一种新型重配体 A(H5N2) 和 A(H5N8),自 2016 年以来一直在该国持续存在。在 2019-2020 年流行季节,野生鸟类中仅发现极少数 HPAI 病例可能有几个原因,更好地了解野生鸟类的活动和病毒-宿主相互作用(例如宿主对这种病毒的易感性)可能有助于了解 HPAI 感染野生鸟类检测不佳的原因。与上一报告期相比,欧洲以外地区报告的受高致病性禽流感 A(H5) 影响的国家和疫情数量有所减少。然而,欧洲以外许多国家的当前流行病学状况存在相当大的不确定性。报告期内,中国报告了四例因 A(H9N2) 病毒感染而导致的人感染病例。
2020 年 5 月 16 日至 8 月 15 日期间,欧洲报告了七起家禽中发生的高致病性禽流感 (HPAI) A(H5N8) 病毒疫情,其中保加利亚报告了一起疫情(n=1),匈牙利报告了六起疫情(n=6),意大利报告了一起家禽中发生的低致病性禽流感 (LPAI) A(H5N3) 病毒疫情。在匈牙利发现的所有六起疫情都是二次疫情,似乎是 2019 年 12 月以来欧洲中部冬季和春季家禽中发现的 HPAI A(H5N8) 疫情的尾声(n=334)。对本报告期内从保加利亚和匈牙利分离出的 HPAI A(H5N8) 病毒进行基因分析后,与 2020 年前几个月在两国收集的病毒相比,没有发现任何重大变化。这表明病毒在这两个国家持续存在,而不是通过受感染的野生鸟类引入的。报告期内,俄罗斯西部的家禽和野生鸟类中发现了高致病性禽流感 A(H5N8) 病毒,截至 9 月中旬,哈萨克斯坦也发现了该病毒。俄罗斯西部和哈萨克斯坦北部的高致病性禽流感病毒在空间上与野生水鸟的秋季迁徙路线相关,令人担忧,因为病毒可能通过迁往欧盟的野生鸟类传播。强烈建议成员国采取适当措施,及时发现高致病性禽流感疑似病例,包括加强生物安全措施。根据过去的经验(2005-2006 年和 2016-2017 年的疫情),北欧和东欧地区在即将到来的秋冬季节可能面临更高的病毒传入风险,应成为制定快速应对措施以尽早发现病毒的重点地区。报告期内,报告了一例人类感染 A(H9N2) 禽流感病毒的病例。
2020 年 8 月 15 日至 12 月 7 日期间,15 个欧盟/欧洲经济区国家和英国报告在野生鸟类、家禽和圈养鸟类中发现了 561 例高致病性禽流感 (HPAI) 病毒,其中受影响最严重的国家是德国 (n=370)、丹麦 (n=65)、荷兰 (n=57)。大多数检测结果报告在野生鸟类中出现 (n=510),主要是白颊黑雁、灰雁和赤颈鸭。猛禽也被检测到感染,尤其是普通秃鹰。大多数鸟类被发现死亡或奄奄一息,但也有报告称在看似健康的鸭子或鹅中感染了 HPAI 病毒。共报告了 43 起家禽 HPAI 疫情;至少 33 起疫情中观察到禽流感感染迹象;最可能的感染源是与野生鸟类的间接接触。已鉴定出三种高致病性禽流感病毒亚型,即 A(H5N8) (n=518)、A(H5N5) (n=17) 和 A(H5N1) (n=6),以及四种不同的基因型,表明有多种病毒传入欧洲。在欧盟/欧洲经济区国家发现的重配 A(H5N1) 病毒已从低致病性病毒中获得基因片段,与欧洲以外地区导致人类感染的 A(H5N1) 病毒(例如进化枝 2.3.2.1c)无关。随着野生水鸟继续在秋季迁徙到欧洲的越冬地区,并且考虑到这些鸟类预计会在当地迁徙,高致病性禽流感 A(H5) 病毒在欧洲境内传入和进一步传播的风险仍然很高。病毒从野生鸟类传播到家禽的风险很高,成员国应在其领土的“高风险地区”执行委员会实施决定 (EU) 2018/1136 中规定的措施。丹麦、荷兰和英国的养殖场发现疫情,也凸显了通过受污染材料(垫料/稻草)和设备引入的风险。保持高水平和可持续的监测和生物安全(特别是在高风险地区)至关重要。报告期内报告了两例人畜共患 A(H5N1) 和 A(H9N2) 禽流感病毒感染病例。对普通人群以及与旅行相关的输入性人类病例的风险被评估为非常低。
