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HEK MEDIA和FEAD POTTFOLIOHEK MEDIA和FEAD POTTFOLIO
sartorius的HEK293介质组合包含化学定义，无血清，无动物成分和无动物的无动物溶液，设计和优化，以支持HEK293和其他人类细胞系的高密度悬架培养物。兼容的饲料补充剂，HEK FS含有高浓度的营养素，并且不含脂质，水解液和生长因子。它通过维持和扩展HEK培养物的生产能力来支持悬浮培养中病毒载体和重组蛋白的出色生产。
CRISPR/Cas9 介导的 HuTu-80 和 HEK 293T 细胞系中的 LRP10 敲除
在患有家族性帕金森病 (PD)、帕金森病性痴呆 (PDD) 和路易体痴呆 (DLB) 的患者中，已发现低密度脂蛋白相关蛋白 10 基因 (LRP10) 中罕见的致病变异 (Quadri et al., 2018)。此外，对携带不同 LRP10 变异的患者的尸检分析显示，脑干、边缘和皮质区域中存在严重的 α-突触核蛋白相关病理负担，表现为路易体 (LB) 和路易体神经突 (LN) (Quadri et al., 2018)。重要的是，功能研究表明，最初发现的 LRP10 致病变异影响 LRP10 转录本表达和稳定性、蛋白质稳定性或蛋白质定位，表明功能丧失 (LoF) 是一种共同的致病机制 (Quadri et al., 2018)。此外，早期使用 LRP10 过表达模型的研究报告称 LRP10 参与细胞内运输途径 (Boucher et al., 2008; Brodeur et al., 2009, 2012; Doray et al., 2008). 尽管有这些数据，但对于内源性 LRP10 在健康和疾病中的功能知之甚少，部分原因是缺乏体外 LRP10 敲除 (KO) 模型。
通过 HEK 293 T/17 细胞基因组编辑制备癌症基因面板中参考突变的标准细胞系
临床应用所谓的“癌症基因面板” [9,10] 对多种基因异常进行全面分析。与此同时，下一代测序仪（NGS）的应用也越来越普及，它有望成为实现人类癌症基因组医学的有用工具。但其临床应用必须确保多个基因序列数据的可靠性和灵敏度 [11,12]。但很难保证综合癌症基因面板中所有安装基因的突变检测性能。此类癌症面板测试包含多个步骤，包括样品制备、核酸提取、序列分析文库制备以及用于序列测定的硬件（NGS）和软件，很难确保所有步骤的有效性。因此，提倡使用标准材料来验证整个诊断系统的过程的标准方法 [13]。
使用 3M Harvest RC 色谱澄清剂从 HEK 洗涤剂裂解物中去除宿主细胞 DNA 的调查案例研究
腺相关病毒 (AAV) 是广泛用于递送基因疗法以治疗各种人类疾病的载体。截至 2024 年 3 月，美国 FDA（食品和药物管理局）已批准了 5 种基于 AAV 的疗法，并且正在进行 200 多项临床试验。1 生产 AAV 的方法包括在宿主细胞（例如 HEK293）中进行瞬时三重转染、基于杆状病毒的表达系统和无辅助病毒方法（例如单纯疱疹病毒 (HSV) 系统）。2 AAV 颗粒通常在细胞内，AAV 纯化过程通常始于通过洗涤剂裂解将病毒从宿主细胞中释放出来；该细胞裂解过程也经常将 hcDNA 释放到液体中。最终产品中存在 hcDNA 对经过处理的细胞构成了重大的安全隐患
新颖的核糖开关通过口服小分子诱导剂调节哺乳动物中的AAV传递的转基因表达
HEK 293细胞用荧光素酶构建体，其中含有鸟嘌呤适体的核糖开关（左），腺嘌呤适体（中间）或TPP Aptamers（右）。转染的细胞用适体配体以指定的剂量处理。图显示了开关对不同适体粘合剂的剂量反应。con 1是没有核糖开关盒的控制构建体。
在轨道上生产病毒：轨道震荡病毒疫苗制造的最新进展
关键词：轨道式振荡生物反应器 (OSB)、禽类 AGE1.CR.pIX 悬浮细胞、流感病毒、动物疱疹病毒、腺相关病毒 (AAV)、人胚胎肾 (HEK) 293 细胞、一次性灌注至高细胞密度、制造。悬浮细胞的预培养在摇瓶中成功完成。特别是新开发的设计细胞在高摇动频率下在摇瓶中传代多达 100 次，然后完美适应在具有 pH 控制和最大氧气供应（通常高于 80% pO 2 ）的 CO 2 培养箱中生长。当它们随后被转移到搅拌槽生物反应器进行扩大时，特定细胞生长率通常较低，并且细胞对通过酸/碱添加和由于潜水器放气（气泡）而产生的剪切应力的 pH 控制变得敏感。禽类 AGE1.CR.pIX 和人类 HEK 293 细胞也出现了这种情况。为了避免这些问题，评估了在振荡模式下的扩大规模。这里我们介绍了 SB10-X OSB 生物反应器在袋子设计和控制单元改进方面的最新进展。引入了一种新的控制策略，从而可以更快、更精确地控制 pH 和 DO。此外，还优化了灌注袋，以便可以轻松连接一个或两个 TFF ATF 系统。这两项发展都带来了更强大的 SB10-X 系统，可以轻松执行批量、补料分批或灌注运行。在 10 L 一次性标准袋中，在化学定义的培养基 CD-U3（Biochrom-Merck，德国）中以 70 rpm 的摇动频率培养 Avian AGE1.CR.pIX 细胞（ProBioGen AG，德国）。对于灌注，使用了交替切向流系统（ATF2，Repligen，500 kDa 截止值）。感染流感病毒 A/PR/8/34 (H1N1) 后，MOI 为 0.001，工作体积从 5 升增加到 9 升，同时保持灌注。使用不同的填充体积评估 25 和 50 x 10 6 细胞/毫升的细胞浓度，以了解顶部空间通气的影响。总体而言，可以获得 3500 个病毒体/细胞的非常高的细胞特异性病毒产量，导致 HA 滴度高达 3.7 log 10（HA 单位/100 µL），感染滴度高达 8.8 x 10 9 TCID 50 /毫升。基于重组 AAV 的载体不仅是基因治疗目的的合适载体，而且还能够诱导针对各种抗原的强烈、主要是细胞的免疫反应。到目前为止，AAV 生产主要使用瞬时转染的贴壁人类 HEK 293 细胞（例如在细胞堆栈中），这对大规模 AAV 生产来说是一个重大挑战。在这里，我们测试了内部适应悬浮生长的 HEK 293 细胞，以通过一种允许简单扩大规模的过程生产 AAV9 的能力。因此，HEK 293 悬浮细胞在 5 L 化学定义的无血清培养基中培养，细胞密度为 1 x 10 6 个细胞/毫升，使用 SB10-X OSB 生物反应器，摇动频率为 65 rpm。24 小时后以 70 rpm 的振荡频率进行聚乙烯亚胺 (PEI) 介导的三重转染（包括 GFP 报告基因）。最后，转染后 48 小时，收获细胞和上清液进行 AAV 分离，并测定裂解物中 DNase I 抗性载体颗粒 (DRP) 的数量。由于转染效率高（基于 GFP 报告基因的转染率 >90%）且 SB10-X 系统中整个批处理过程性能良好，因此达到了 1.4 x 10 12 DRP/ml 或 7 x 10 15 DRP/批（5 L）范围内的制造相关 AAV 滴度。总之，在轨道上生产病毒可能是创新疫苗制造的一种有吸引力的替代方案。
AVA6000，一种针对肿瘤微环境的新型精密药物
肿瘤细胞系与AVA6000 +/-人重组可溶性FAP或盐酸阿霉素孵育，以研究FAP水解前后AVA6000的细胞毒性活性。AVA6000细胞毒性还研究了HEK-MFAP和HEK MOCK细胞的培养物。研究了所有细胞系的添加可溶性FAP对AVA6000的细胞毒性活性的影响，但HEK-MFAP除外。使用含有AVA6000和FAP抑制剂作为基线对照的培养物，添加AVA6000和可溶性FAP导致所有11种肿瘤细胞系的培养物中显着（P <0.05）的细胞毒性（表2）。使用仅包含AVA6000作为对照的培养物，添加AVA6000和可溶性FAP导致所有细胞系培养物的细胞毒性增加。用MFAP转染HEK细胞似乎赋予了对AVA6000的细胞中性敏感性，如与用AVA6000孵育的Hek-Mock细胞培养物孵育的Hek-MFAP细胞培养物中EC 50值（P <0.0001）的明显较低的EC 50值（P <0.0001）所示（P <0.0001）。对于测试的肿瘤细胞系，除了对阿霉素具有抗药性的MCF-7外，完整的AVA6000在体外比阿霉素少了80倍至4,000倍。ec 50比较表明，每种肿瘤细胞类型对FAP激活的AVA6000的敏感性与其对阿霉素在体外的固有敏感性非常接近。
transit®-lenti转染试剂
要产生慢病毒，HEK 293细胞被编码所需的GAG，POL和REV结构和调节基因的包装质粒以及编码兴趣基因的转移载体（GOI）。复制无能是通过在单独的质粒上表达最小病毒成分来实现的，并通过在转移载体中的3'长末端重复（LTR）的重大删除来结合自我激活（SIN）元素。必需成分与VSV包膜蛋白G结合使用，以进行广泛的病毒质量和纯化过程中稳定性的提高。慢病毒颗粒被分泌到细胞培养基中，在该培养基中收集，过滤并冷冻到等分试样中，以便随后转导到靶细胞中。